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“早监测、早发现、早处置”——猪场养户如何开展非洲猪瘟自检工作？
——访广东爱苏生物科技有限公司刘芮祎市场总监嘉宾介绍
广东爱苏生物科技有限公司市场总监刘芮祎
广东爱苏生物科技有限公司成立于2015年，在畜牧业板块创立了“牧康灵”品牌，以先进的无创采集专利技术，便捷的现场检测方法，和最新的“生猪体检”理念服务于猪场。非瘟之下，广东爱苏结合养殖生产实践，总结了一套集采样、检测与技术服务于一体的“牧康灵非洲猪瘟一站式解决方案”助力非瘟防控。
自主检测：有的放矢，心中有数
Q1.非洲猪瘟自检政策逐层放开，对于国家鼓励养殖户开展自检工作，能谈谈您的看法吗？
刘芮祎：这是一项非常有益、及时而且十分有必要的政策。可以说现在开展非洲猪瘟自检工作已经迫在眉睫，同时也是防控非洲猪瘟的前提与重中之重。目前防控非洲猪瘟，没有疫苗，也没有有效药物，自检成了非洲猪瘟防控的第一步，也是“自保”的前提！只有养殖场户做到自主检测，才能了解非洲猪瘟防控的成效，做到有的放矢，心里更有数！
规范操作，避免操作污染
Q2.通过对猪场自检指导工作以及开展的非洲猪瘟检测培训，您认为猪场养户们普遍存在哪些问题？
刘芮祎：最主要的问题是操作上“污染防控意识薄弱”。由于多数养殖户以前没有接触过这样的实验，操作流程技能不规范等，容易造成污染扩散，导致实验结果出现假阳性等情况。
关于如何解决操作污染问题，我们有以下措施建议：
1.“傻瓜式”培训。仪器设定好程序，现场指导猪场员工掌握操作技能、流程步骤及判读实验结果。
2.根据猪场具体情况建立（简易）实验室。需要有独立实验区，至少要保证样本处理区与操作区分开；需有通风条件（可配超净工作台），避免内部交叉污染循环。日常检测结束使用95%的酒精或核酸去除剂对实验桌、仪器枪头等进行消毒。
3.对于实验区已出现污染问题，可以更换基因序列（靶点）不同的试剂盒，同时确保通风流畅。
规范化自检操作流程与操作细节
Q3.日常监测中，养殖场户该如何开展非洲猪瘟自检操作呢？有哪些规范化检测流程以及操作细节可以分享？
刘芮祎：非洲猪瘟自检流程与细节有以下几点注意事项：
1.样本来源要广泛。采样的样本除了猪群本身，还应包括猪场各个区域的环境、用具、员工、来往车辆、饲料原料等。
2.采样方式要安全可靠。对于猪只本身的临床样本，建议使用“唾液样本”进行监测和检测。因为非洲猪瘟病毒在自然感染的情况下首先在口腔内形成感染，病毒从口腔扁桃体进入血液出现的平均时间是3-4天，最长可达19天，也就是唾液可以早于血液至少3天被检测出来，最早可以提前19天被检测出来，这也是检测的黄金窗口期，那这样就给猪场进行有效、及时处理赢得了大量的时间！如果在血液里面查出有病毒核酸阳性，实际上猪已经出现了比较严重的病毒血症，再做任何处理都已经来不及了，也就失去了检测的生产指导意义。
3.采样时间间隔要合理。应根据猪场实际情况确定，种猪群一般建议一周至少2次，商品猪群一周1次，如果有卖猪等临时行为，要对出猪台、进出人员等随时进行检测，环境检测要做到一周2次左右。如果猪场周围有疫情发生的，则更要加强监测周期和频率，做到随时了解本猪场的病原及生物安全防控情况。
4.采样数量要科学。对于临床样本数量，建议母猪分胎次，小猪分胎龄，育肥、保育以栏为单位进行采样，以及环境等各个区域（可以划分小单元），每组取5份样本混样，公猪量少的可以全检。这里需要注意，混样样本不建议份数太多。假若出现检测阳性结果，再单独对每一份样本进行溯源，目标过于分散，耗时增长。
“定向”选择检测“目标”样本
Q4:在检测试剂与仪器的选择上，您是否能给养殖场户们一些意见？
刘芮祎：首先，从非洲猪瘟病毒的存在形式上来说，分为蛋白和核酸，所以可检测的目标物就从这两个层面来入手。目前市面上有快速检测试纸条，这属于免疫层析的原理，检测目标为病毒的蛋白；还有一种方法是用荧光定量PCR仪，配合使用荧光定量PCR试剂盒，这是一种分子水平的诊断，这种方法检测的是病毒的核酸。
在方法学上，两种检测方法都可以检测病毒，但是灵敏度差异很大，荧光定量PCR的方法是目前最灵敏的方法，所以适合环境或者唾液样本的检测，还有猪场的日常监测。而快速检测试纸条属于免疫学诊断方法，灵敏度相对较低，但是对于临床上已有发病症状，肉眼通过症状不能确诊的情况下，可以使用快速检测试纸条来进行快速的判断，所以在临床上如果遇到有紧急发病症状的时候，可以使用快速检测试纸条。
Q5：近期，有关新闻报道（北京森康）非洲猪瘟抗原检测试剂纸条检测有假阴性的现象，对此您有何看法？
刘芮祎：最近也有很多朋友问过我这个问题，我也非常愿意分享我的观点。
第一，方法学限制。抗原快速检测试纸条是免疫胶体金水平的检测方法，检测的是病毒的蛋白，这种方法的检出率或者说灵敏度偏低，换句话说是检测限（检测阈值）较高，低病毒量不容易达到检测限。农业农村部第一批非洲猪瘟现场快速检测试剂评价结果目录里，“森康快速检测试纸条的诊断敏感性是66.67%、特异性100%”，同时注明非洲猪瘟快速检测试剂条类“仅用于病（死）猪现场快速初步检测”。这句话本质的含义是：病猪或者死猪的带毒量已经很高，更容易达到试纸条的检测限，所以病（死）猪更容易检测出来。抗原快速检测试纸条检出率的高低取决于待检猪的发病阶段，如若是处于潜伏期的病猪，核酸检测结果是阳性，抗原快速检测试纸条检测是阴性也是合理存在的。
这也提示我们可以通过“定向”选择检测“目标”样本，从而提高准确率。针对猪群日常监测与环境检测，其带毒量相对偏低，不容易达到检测限，不推荐使用抗原快速检测试纸条。
第二，合理存在假阴或者假阳的可能性。农业农村部第一批备案目录里部分荧光定量PCR试剂盒，诊断敏感性并不都是100%，也有93%或96%的情况。抗原快速检测试纸条与荧光定量PCR试剂盒敏感性指数的区别就是假阴或者假阳比例的高低。所以我个人认为每个产品都有它的优缺点，而不能一棍子打死，就说试纸条完全不准确也不可取，关键还是要定向选择检测目标样本。
第三，正规渠道购置检测产品。市面上森康产品的价格参差不齐，在这也提醒过广大用户，不能一味的在意价格，而不注重产品质量。请广大客户通过正规渠道购置产品，保障自身利益。
关注猪群“内在”健康体质情况
Q6:唾液检测在生猪健康度监测上也备受关注，能否介绍生猪的健康体质检测？
刘芮祎：抵抗非洲猪瘟，除了做好“外在”的生物安全防控措施，还要注重猪“内在”的健康体质情况。通过对猪只健康度的评判，可以了解猪群免疫力情况，及时提高猪群免疫力，以提高抗病能力。
其中，我们有寒度检测试剂盒和朊度检测试剂盒。寒度检测试剂盒主要检测机体体内毒素蓄积程度、免疫力水平或肝肾功能受损程度。朊度检测试剂盒检测机体的免疫能力。朊度即蛋白含量，代表机体的营养情况。
Q7：唾液检测的优势及唾液采集的注意事项主要有哪些？
刘芮祎：唾液学检测有四大优势：1.唾液可以早于血液平均3~5天检测出非洲猪瘟病毒，便于早期筛查；2.唾液采集操作简单方便，节省人力和物资；3.对猪无应激，方便频繁的临床采样；4.通过唾液样本，可以进行PCR检测，进一步确诊是否为非洲猪瘟病毒感染。
唾液采样有以下注意事项：1.采样时间：控食过夜，前晚停料不停水，第二天早晨采食前采集唾液。这样采集的唾液样本纯度高，病原含量高；2.要加入唾液保护液，否则唾液中的酶会对病毒核酸造成降解。3.采集出来的唾液样本不能离心，离心沉淀后，上清液中的病毒量会降低。
Q8：在日常疫病监测过程中，您认为应该注意哪环节？
刘芮祎：在日常疫病检测监测中，这几方面需要注意：
1.非洲猪瘟病毒虽然毒力强，发病后死亡率高，但它也有弱点，病毒接触传播，不接触就不传播，这个点来说其威力不及口蹄疫和猪高热病。若非传播媒介协助，自身传播扩散力度不是特别强。
2.非瘟感染猪清除一定要早：“早监测、早发现、早处置”，及时“稳、准、狠”地清除病猪，不给病毒扩散的机会，这样才能保护健康猪群。
3.落实封闭饲养、全进全出等饲养管理制度，禁止无关人员和车辆进入场区；严格落实补栏隔离措施和空栏管理制度，避免交叉污染。
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