|
目前，高致病性猪蓝耳病是国家规定的强制免疫的动物疫病病种之一，免疫则是防制高致病性猪蓝耳病有效方法之一。但是由于生产高致病性猪蓝耳病疫苗的厂家较多，究竟哪种疫苗临床应用效果较好，目前也无定论。为了更好地了解不同厂家生产的同一毒株疫苗的临床应用效果，以便为高致病性猪蓝耳病疫苗的采购提供依据和决策，很有必要找出一种或几种既安全又有效(应激作用小、抗体产生速度快，水平较高，维持时间较长、离散度较小等)的优质疫苗。因此，针对今年河南省驻马店市范围内使用的共5个厂家的高致病性猪蓝耳病活疫苗进行试验研究。
一、材料与方法
1.试验猪场的选择
通过问卷调查、现场查看、实验室检测等方式对河南省驻马店市部分猪场的基本情况、饲养管理、疫病情况、免疫情况、养殖场的配合程度等方面开展全面调查，最终选择河南省上蔡县宏伟种猪育种有限公司作为试验猪场。
2.试验动物
初选猪群病原学检测 为保证试验猪群的健康，试验实施前对同批140头断奶仔猪分别采集血清样品同时进行了高致病性猪蓝耳病荧光RT-PCR、猪瘟荧光RT-PCR、猪伪狂犬荧光PCR的病原学检测。
检测结果 通过对140头断奶仔猪的病原学检测发现，高致病性猪蓝耳病和猪瘟全部阴性，伪狂犬2头阳性，符合试验条件的猪群138头。
试验动物选定 从符合条件的健康仔猪群中选取25-26日龄左右120头作为试验动物，分为6组，每组20头。第1组至第5组每组随机注射一种疫苗，第6组为空白对照。
3.疫苗
试验用疫苗为河南省驻马店市政府采购的普莱柯生物工程股份有限公司、山西海森生物制品有限公司、中牧实业股份有限公司成都药械厂、扬州威克生物工程有限公司、广东永顺生物制药有限公司5个厂家的5种疫苗。
二、免疫
1.准备
猪群免疫前3天，停用一切药物和疫苗，圈舍禁用带猪喷雾消毒，饮水中添加电解多维，观察猪群的健康状况。
2.疫苗保存及处理
疫苗和稀释液运输保存过程均用保温箱加冰块，避免阳光直射和温度太高，疫苗稀释使用前先放置半小时恢复至25℃左右，稀释后的疫苗1小时内用完。
3.疫苗注射
选用合格的疫苗，使用前检查疫苗瓶是不是真空、有效期等;备好肾上腺素或地塞米松，以备对有过敏反应的猪只及时进行救治。严格按照疫苗规范操作和说明书使用。用不同厂家的高致病性猪蓝耳病疫苗分别对每组猪群采取颈部肌肉注射方法，专人保定，一头猪一个针头，专人标记并记录试验猪编号，剩余的疫苗及空瓶全部进行焚烧并深埋。
4.疫苗的安全性观察
免疫后3天内，观察每种疫苗免疫前后的猪群应激反应情况，结果各组高致病性猪蓝耳病活疫苗注射后3天内对试验猪群均未造成任何应激反应。
三、采样及检测
1.采样与样品处理
器材 个人防护用品(防护服、手套、帽子、鞋套等)、采样箱、保定器、一次性注射器、记号笔、干棉球、酒精棉球、封口袋、离心机等。
采血 分别于6月8日、6月24日、7月9日、7月23日、8月22日、9月22日六次采样，均采用猪前腔静脉采血方法，每次每头猪采集全血2-3ml并做好相关记录。
分离血清 每次采血后注射器预留1-2ml空隙，在室温静止放置2小时左右自然析出血清或1500r/min离心分离血清后进行编号，每次采集的血清保证量足、透明、新鲜、无溶血, -20℃保存待检。
采血频率 免疫前进行第一次，免疫后第15d、31d、46d、60d、90d、120d各进行一次。
2.检测
检测试剂 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测ELISA试剂盒，5块板装，批号为99-41289、99-40959，所用试剂盒均由IDEXX公司生产。
仪器及耗材 全自动酶标仪和自动洗板机均购自上海科华仪器设备有限公司;离心机购自上海精密仪器仪表有限公司;不同量程的移液器购自eppendorf公司;移液器配套的进口一次性吸头、离心管、烧杯、蒸馏水、个人防护用品等若干。
操作 使用前所有试剂应恢复至18-26℃，试剂应轻轻旋转或振荡混合。每个样品使用一个单独的吸头。
四、检测结果分析
依据不同厂家疫苗抗体产生情况，对每次每组检测的结果预从免疫抗体合格率、抗体检测平均值OD值(反应抗体水平高低)和方差(方差是各个数据与平均数之差的平方和的平均数)。在概率论和数理统计中，方差用来度量随机变量和其数学期望(即均值)之间的偏离程度。在许多实际问题中，研究随机变量和均值之间的偏离程度等方面进行比较分析和评估。找出抗体产生速度较快、维持时间较长、离散度较小的优质疫苗。
1.合格率比较 每次采样检测的抗体合格率情况如表1。
|
表1：各组高致病性猪蓝耳病抗体合格率统计表（单位：%） |
|
组别/日期 |
0608 |
0624 |
0710 |
0723 |
0822 |
0922 |
合计 |
平均值 |
|
第一组 |
90 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
590 |
98.33 |
|
第二组 |
95 |
95 |
95 |
100 |
100 |
95 |
580 |
96.67 |
|
第三组 |
65 |
95 |
100 |
90 |
90 |
95 |
535 |
89.17 |
|
第四组 |
100 |
100 |
89.5 |
73.7 |
78.9 |
100 |
542.1 |
90.35 |
|
第五组 |
100 |
95 |
85 |
70 |
90 |
100 |
540 |
90.00 |
|
第六组 |
0 |
10 |
20 |
25 |
25 |
30 |
110 |
18.33 |
抗体产生速度 从免疫后半月采样检测抗体合格率，第一组至第五组分别为90%、95%、65%、100%、100%，第六组非免疫抗体阳性率为0。由此可以得出第四组、第五组抗体产生速度最快达100%，第三组产生抗体最慢仅为65%。
抗体维持时间 第一组免疫半月后连续6次采样检测抗体合格率均为90%、100%、100%、100%、100%、100%，均值最高且保持较高水平;第二组免疫半月后连续6次采样检测抗体合格率分别为95%、95%、95%、100%、100%、95%，均值次之;第三组免疫半月后连续6次采样检测抗体合格率分别为65%、95%、100%、90%、90%、95%;第四组免疫半月后连续6次采样检测抗体合格率分别为100%、100%、89.5%、73.7%、78.9%、100%;第五组免疫半月后连续6次采样检测抗体合格率分别为100%、95%、85%、70%、90%、100%;第六组采样抗体阳性率分别为0、10%、20%、25%、25%、30%。合格率均值比较依次为第一组、第二组、第四组、第五组、第三组。
可以得出第一组抗体在免疫后30天后均维持在100%，抗体维持时间长，保护率最高;第二组抗体在免疫后30天后均维持在95%以上，抗体维持时间较长，保护率较高;第四组、第五组抗体较低仅为70%左右，保护率相对较差。
2.平均OD值比较
每次采样检测的抗体平均OD值情况见表2。从图2可以看出平均OD值在第二次采样之后第一组一直维持较高水平达1.2以上且呈上升趋势，第二组次之但是波动性较大，第三组、第四组、第五组平均OD值基本接近且均小于1，第六组抗体阳性率也呈上升趋势，但一直保持在0.3以下。
可以得出第一组OD值抗体水平较高、第二组次之，第四组、第五组、第三组相对较低。
|
表2：各组高致病性猪蓝耳病抗体平均OD值统计表 |
|
组别/日期 |
0608 |
0624 |
0710 |
0723 |
0822 |
0922 |
合计 |
平均值 |
|
第一组 |
0.6635 |
0.8754 |
0.6435 |
0.8562 |
1.1053 |
1.2808 |
5.4247 |
0.9041 |
|
第二组 |
0.9409 |
0.6281 |
0.4153 |
0.8406 |
0.7864 |
0.989 |
4.6003 |
0.7667 |
|
第三组 |
0.3108 |
0.7036 |
0.5429 |
0.7339 |
0.7664 |
0.8296 |
3.8872 |
0.6479 |
|
第四组 |
0.9739 |
0.668 |
0.4735 |
0.628 |
0.6808 |
0.915 |
4.3392 |
0.7232 |
|
第五组 |
0.8159 |
0.6573 |
0.5006 |
0.5132 |
0.7438 |
0.8881 |
4.1189 |
0.6865 |
|
第六组 |
0.128 |
0.159 |
0.112 |
0.186 |
0.195 |
0.298 |
1.078 |
0.1797 |
3.离散度比较(方差)
每次采样检测的各组抗体方差值情况见表3 。从表3可以看出各组方差值情况，第六组方差值最小，其次依次是第一组、第二组、第三组、第四组、第五组;从图3可以看出第四组和第三组的曲线波动性较大，第五组、第一组、第二组的曲线波动性较缓。
可以得出第一组至第五组疫苗组中，第一组抗体方差较小且波动性较缓，第二组次之。
|
表3：各组高致病性猪蓝耳病抗体方差统计表 |
|
组别 |
0608 |
0624 |
0710 |
0723 |
0822 |
0922 |
合计 |
平均值 |
|
第一组 |
0.0695 |
0.0408 |
0.0221 |
0.051 |
0.0252 |
0.1086 |
0.3172 |
0.0529 |
|
第二组 |
0.0504 |
0.0384 |
0.0445 |
0.0457 |
0.0576 |
0.1467 |
0.3833 |
0.0639 |
|
第三组 |
0.0354 |
0.0633 |
0.0163 |
0.1137 |
0.1363 |
0.1237 |
0.4887 |
0.0815 |
|
第四组 |
0.0428 |
0.0412 |
0.0524 |
0.1436 |
0.1878 |
0.0726 |
0.5404 |
0.0901 |
|
第五组 |
0.1233 |
0.0877 |
0.0681 |
0.0972 |
0.1349 |
0.1229 |
0.6341 |
0.1057 |
|
第六组 |
0.0066 |
0.0082 |
0.0032 |
0.0115 |
0.0136 |
0.0405 |
0.0836 |
0.0139 |
五、结论
综合以上，从疫苗产生抗体的速度、合格率、平均OD值、方差等方面综合分析得出以下结论：各试验组高致病性猪蓝耳病活疫苗注射后3天内对试验猪群均未造成任何应激反应;第四组、第五组抗体产生速度最快，第三组产生抗体最慢;第一组抗体维持时间长，保护率最高;第二组抗体维持时间较长，保护率较高;第四组、第五组抗体较低，保护率相对较差;第一组OD值抗体水平较高，第二组次之，第三组、第四组、第五组相对较低;第一组至五组疫苗组中，第一组抗体方差较小且波动性较缓，第二组次之。
总之，从安全性和免疫抗体方面分析得出结论：各个厂家高致病性蓝耳病疫苗均安全，无任何应激反应;第一组疫苗效果较好且维持时间长、抗体水平高、离散度较小;第二组疫苗仅次于第一组;第四组、第五组抗体产生的速度快，用于紧急免疫接种效果好。
|
