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玉米赤霉烯酮（ZEA）是霉菌毒素的一种，又称F-2毒素，是由镰刀菌属的真菌产生的一类次级代谢产物，通常可在谷物及其副产物中发现。玉米赤霉烯酮具有类雌激素作用，一定量的ZEA摄入体内后，会与体内雌激素竞争性地与雌激素受体（ER）结合，产生类似雌激素的应答，导致动物体内雌性激素过多，损害动物的生殖生理健康。ZEA典型的中毒症状表现为阴户红肿、阴道和直肠脱垂以及乳腺增大，母猪对其尤其敏感，可引起母猪不孕、流产等繁殖障碍。此外，高剂量的ZEA对动物还具有一定的肝毒性、免疫毒性、遗传毒性等，对动物肿瘤的发生有一定影响。
有调查显示，ZEA在原料、玉米加工副产物及配合饲料中广泛存在，且玉米及玉米副产物污染较为严重。本文通过对2014年下半年及2015年上半年全国部分地区饲料公司及养殖场饲料原料和配合饲料抽样调查，探讨该段时间内玉米赤霉烯酮污染状况与分布规律。但由于样品在采集、分析过程中不可避免的误差，特别是在采集时造成的误差，使得本次试验结果仅能代表我国部分地区饲料原料及配合饲料ZEA污染状况，不足以代表全国的污染情况，数据仅供参考。
1试验材料与方法
1.1 试验材料
ZEA标准品，甲醇、乙腈(色谱纯)，0.01 mol/L磷酸盐缓冲液，LC-20AT高效液相色谱仪，Agilent C18色谱柱，HPLC ChemStation软件系统，玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，免疫亲和柱泵流操作架。
1.2 试验方法
样品采集本试验的所有样品均于2014年9月—2015年5月期间采集，采集地点主要为北京、山东、河南、四川等地区的部分饲料公司和养殖场。采集饲料原料共179份，其中玉米112份，豆粕/豆饼类21份，棉粕/棉籽类11份，DDGS 15份，麸皮13份，青贮饲料7份；配合饲料共61份，其中主要有乳猪料25份，大猪料24份，其它配合饲料12份。
检测方法本试验对所采集的样品进行免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测。
1）样品前处理：称取20 g粉碎后的样品于250 mL锥形瓶中，加入100 mL的乙腈水溶液（v/v, 8:2），恒温振荡器上提取2 h，静置，过滤。取10 mL滤液用40 mL PBS缓冲液稀释，使乙腈含量低于20％，然后过有机滤膜。
2）净化：将免疫亲和柱接于10 mL玻璃注射器下。去掉免疫亲和柱下方堵头，排空亲和柱中保护液。加入10 mL稀释好的滤液于免疫亲和柱中，调节滤液以1 mL/min左右的流速通过免疫亲和柱，直至空气进入亲和柱中。然后加入10 mL双蒸水于免疫亲和柱中淋洗2次，控制流速为3 mL/min左右。弃去流出液。
3）洗脱：最后分两次各加入1 mL甲醇，分别孵育2 min，流速为1 mL/min左右，收集洗脱液于棕色小瓶中，用于HPLC分析，检测其中的ZEA含量。
2试验结果饲料样品中ZEA含量高于检出限算作检出，本试验确定的ZEA的检出限为1μg/kg。我国国家标准GB 13078.2-2006规定饲料中ZEA的允许限量是：玉米和配合饲料中≤500 μg/kg，高于该限量标准为超标，其余饲料原料按玉米判定标准执行。本试验中ZEA污染程度的判定标准为：ZEA含量低于限量标准为轻度污染（＜500 μg/kg），高于限量标准5倍以上为严重污染（＞2 500 μg/kg），两剂量之间为中度污染（500 ~2 500 μg/kg）。
2.1 检测方法的回收率
在本试验的检测条件下，ZEA在10~11 min之间出峰。从表1可以看出，本试验条件下，玉米赤霉烯酮的回收率为83.29%~87.55%，平均回收率为85.50%，表明本试验所采用的方法精确度和灵敏度较好，回收率稳定，能满足本试验的检测要求。
2.2 主要饲料原料中玉米赤霉烯酮污染情况
由表2可以看出，被检的玉米、棉籽/棉粕、麸皮以及青贮饲料中的玉米赤霉烯酮检出率高达90%以上，分别为93.75%、100.00%、100.00%、100.00%。其中棉籽/棉粕、麸皮、青贮饲料的检出率高达100%。豆粕/豆饼和DDGS的检出率相对较低，分别为85.71%、80.00%。玉米、DDGS中玉米赤霉烯酮的含量较高，其阳性平均值可分别达到477.14 μg/kg和417.67 μg/kg，超标率为23.21%和13.33%。在所有被检的饲料原料中，玉米中的玉米赤霉烯酮含量最高，其最大值可达到3 387.00 μg/kg，但其阳性平均值低于我国的限量标准，豆粕/豆饼中的阳性平均值最低，为30.56 μg/kg。
如图1所示，被检饲料原料玉米赤霉烯酮的平均含量均呈现轻度污染，但玉米、DDGS样品中出现中度污染，其中玉米样品中还存在严重污染现象。
2.3 被检配合饲料中玉米赤霉烯酮污染情况
由表3可以看出，乳猪料、大猪料、其他配合饲料的玉米赤霉烯酮检出率分别可达到100.00%、95.83%、100.00%。大猪料中玉米赤霉烯酮含量最高，超标率为41.67%，阳性平均值为510.42 μg/kg，超过了我国对玉米赤霉烯酮的限量标准。乳猪料受玉米赤霉烯酮污染相对较轻。除乳猪料与大猪料以外的其它配合饲料，玉米赤霉烯酮的超标率为8.33%，阳性平均值为231.90 μg/kg。
如图2所示，乳猪料、大猪料和其它配合饲料均表现出较高的轻度污染率，其中乳猪料最高；大猪料和其它配合饲料出现一定数量的中度污染样品，大猪料最高；被检配合饲料中未出现受ZEA严重污染的样品。
3讨论当前，玉米赤霉烯酮污染带来的危害逐渐深入到人们的思想中，人们急于寻找一种可以有效控制玉米赤霉烯酮污染的措施。但是由于各个国家和地区对玉米赤霉烯酮的限量标准和污染判定程度不一样，使得人们难以对玉米赤霉烯酮污染程度做统一的定夺。不同国家，粮谷、食品以及饲料中ZEA限量标准不同，一般在50~1 000 μg/kg。我国国家标准（GB 13078.2-2006）规定，玉米、配合饲料中ZEA的限量为500 μg/kg，超过相应的允许限量算作超标。而欧盟规定的限量标准（EEC 253/2004）为中仔猪和小母猪补充饲料和配合饲料的ZEA限量为100 μg/kg，母猪和育肥猪补充饲料和配合饲料为250 μg/kg，均低于我国的标准。除此之外，意大利规定，在谷物和谷类产品中ZEA的限量标准为100 μg/kg，法国ZEA限量标准规定植物油和谷类当中ZEA的含量不得超过200 μg/kg。合理、准确地制定符合当地条件的玉米赤霉烯酮限量标准，对于饲料行业、养殖行业和食品行业都具有重大的意义。
目前，对饲料及饲料原料中玉米赤霉烯酮的检测方法主要有薄层层析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）。本试验主要采用免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测样品中玉米赤霉烯酮的含量。该方法与其它方法相比，具有高灵敏性、高选择性、高特异性且操作程序较为简便、重复性高等特点，而且在检测过程中，有毒、有害试剂使用较少，不仅降低了环境污染，而且可以准确反映被检样品中的玉米赤霉烯酮含量。
由本次检测结果可以看出，2014年9月—2015年5月期间所采集的样品中玉米赤霉烯酮普遍存在，饲料原料与配合饲料中的检出率分别为92.74%和98.36%。其中饲料原料中，玉米与DDGS受玉米赤霉烯酮污染最为严重，其超标率分别可达23.21%、13.33%，阳性平均值为477.74 μg/kg和417.67 μg/kg。这与张丞等的调查结果相似。王国强等调查发现，2014年7—12月份，玉米中玉米赤霉烯酮的阳性检出率为88.09%，高于2013年7—12月份的82.55%，但是低于本试验的检出率。
由于我国幅员辽阔，全国不同地区，气候、地理环境相差较大，因而使得不同地区的饲料原料与饲料受ZEA污染有很大的差异。研究发现，玉米赤霉烯酮对饲料及饲料原料的污染程度气候有很大的关系。熊凯华等抽样调查发现，与其它省市相比，2009年安徽、河南等地的玉米和小麦受玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的污染较为严重，且玉米赤霉烯酮要比呕吐毒素严重。任建波于2012年对我国的新季玉米进行调查，发现2012年新季玉米受ZEA污染较小，相比之下，辽宁、黑龙江、山西的污染情况要比陕西、安徽等地的严重。
本试验结果显示，大猪料中ZEA含量最高，阳性平均值为510.42 μg/kg，高于我国的限量标准，而乳猪配合饲料中含量较低。配合饲料是由多种原料混合而成，在加工的过程中流通环节较多，所以更可能被霉菌毒素污染，且其直接被动物机体采食，其中所含有的毒素可以直接进入动物体内，毒素含量也可以直接影响到动物机体的健康。所以，对配合饲料中ZEA的检测，能更直观地反映ZEA对养殖业的危害，将配合饲料中的玉米赤霉烯酮含量作为监测玉米赤霉烯酮污染程度的标准也更为准确。
4结论通过本试验的调查研究及对不同饲料及饲料原料玉米赤霉烯酮含量的检测得到以下结论：
1）北京、山东、河南及四川等地区的饲料原料和配合饲料普遍受到玉米赤霉烯酮的污染。
2）被检饲料原料中，玉米和DDGS受玉米赤霉烯酮污染最为严重，超标率分别可达23.21%和13.33%。
3）抽检结果显示，配合饲料中大猪料玉米赤霉烯酮污染最为严重，超标率高达41.67%，阳性平均值为510.42 μg/kg，高于我国的限量标准。
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