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当前，我国羊的繁殖生产方式主要依靠公羊本交和子宫颈人工授精，这两种方式都存在配种受孕率低、种公羊利用效率不高、种资源投入量大，繁殖生产效率低下，空怀损失大，生产成本增加等诸多问题，严重影响了羊的养殖效益，也制约了我国羊产业良种化、专业化、工厂化的科学养羊发展进程。
腹腔内窥镜输精技术作为一项羊繁殖改良的高新技术，因其可直接进行子宫角内输精，从而有效规避子宫颈障碍，具有低剂量、高精准、高效率的繁殖生产效果，从而最大限度的发挥优秀种公羊利用率，提高繁殖生产效率，增加养殖收益。同时，对加速推动羊良种化产业进程，实现专业化、工厂化生产具有重要意义。当前，腹腔内窥镜输精技术在羊实际生产中已有所应用，但在与同期发情技术相结合的规模化生产中，缺乏对最佳输精时间、输精部位、最低有效输精剂量和输精方式等环节的系统性试验研究。本试验就以上问题，结合生产实践，对腹腔内窥镜输精关键环节技术参数进行了试验、筛选，为该技术在羊产业化生产中应用提供部分参考依据。
1 材料与方法试验设备 腹腔内窥镜1台（日本，olympus）；B超诊断仪1台（WED-2000AV）；生物学显微镜1台（上海，XSP-2CA）；输精车架（胚胎移植车）5个（自制）。
试验动物与药物母羊：小尾寒羊，繁殖机能正常，体况良好，11～24月龄。公羊：杜泊羊，30月龄，体况良好，长期参加配种公羊。
试验药品：阴道孕酮释放装置(CIDR，美国辉瑞)；孕马血清促性腺激素(PMSG，宁波三生药业)；维生素A、D、E （北京立时达药业有限公司）；长效土霉素针剂（山西兆益生物有限公司）。
试验方法 试验前对所有试验羊进行B超妊娠检测，确保试验母羊为空怀。其次，对试验羊进行人工诱导同期发情（同期发情放栓与撤栓同时肌肉注射维生素A、D、E 3 mL）。然后，对同期发情母羊进行腹腔内窥镜输精。输精前12 h对试验羊空腹；输精时对试验羊腹侧、乳房基部进行备皮、消毒处理后进行打孔、输精；输精后对创口进行一针、全层缝合，并喷涂碘酒消毒，同时肌肉注射长效土霉素3 mL；最后于输精后45～55 d利用B超诊断仪进行输精羊早期妊娠诊断，以确定输精效果。具体试验操作流程见表1。
1不同输精剂量对腹腔内窥镜输精效果影响的试验本试验采集同
1只种公羊精液，镜下检测活力，用预先配置的精液稀释剂由低到高，逐级稀释至试验设定的稀释倍数（稀释倍数和有效精子数处理方案见表2）。稀释后精液用10 mL离心管分装，再用棉花包裹放入温度在25～30℃的泡沫盒内保存、使用。本试验分别设立有效精子数在3×107、2×107和1×107 个，3个不同输精剂量，每组输精试验羊60只，进行输精受孕率对比试验。
2不同输精部位对腹腔内窥镜输精效果影响的试验本试验将180只母羊随机分成3组，每组60只，在相同输精剂量下（0.4 mL/次，0.2亿/次），分别对子宫角前段、子宫角中段和子宫角末端进行腹腔内窥镜输精受孕率、输精难易度的对比试验。
3不同输精时间对腹腔内窥镜输精效果影响的试验本试验以精子与卵子在母羊子宫内运行时间、保持受精能力时间、排卵时间、卵子接收等时间点的综合考虑，将180只同期发情处理后的母羊随机分成3组，在相同输精剂量下（0.4 mL/次、0.2亿/次），分别于撤栓后48、55、60 h，利用腹腔内窥镜输精，进行输精受孕率对比试验。
4腹腔内窥镜盲输与发情鉴定输精效果的对比试验本试验进行了在相同输精剂量下（0.4 mL/次，0.2亿/次），腹腔内窥镜输精时不进行卵巢观察，直接全群输精与发情鉴定输精进行腹腔内窥镜输精受孕率效果对比试验（输精时进行卵巢观察，发情鉴定，未发情母羊不于输精）。
2 试验结果
不同输精剂量对腹腔内窥镜输精效果的影响 由表3可以看出，3个不同输精有效精子数的发情输精受孕率分别为88.0%、85.1%和77.8%。其中，3×107（19倍）和2×107（29倍）2个有效精子数剂量保持了较高的受孕率（Ｐ＜0.05），两者以2×107（29倍）组的输精有效精子数最低。
不同输精时间对腹腔内窥镜输精效果的影响由表4可见，腹腔内窥镜进行输精时，在同期发情撤栓后48 h输精，发情输精受孕率为85.7%，显著高于撤栓后55 h（80%）和撤栓后60 h（77.8%）（Ｐ＜0.05）。说明，该时间在撤栓后48 h实施腹腔内窥镜输精受孕率最高。
不同输精部位对腹腔内窥镜输精效果的影响由表5可以看出，腹腔内窥镜精时，在子宫角前段和子宫角中段输精工作效率较高，且不容易造成输精过程精液外漏和出血现象。同时由表6可以看出，子宫角前段和子宫角中段的发情输精受孕率分别为88.5%和86.2%，显著高于子宫角末端（78.6%）（Ｐ＜0.05）。
腹腔内窥镜盲输与发情鉴定输精效果对比试验由表7可以看出，腹腔内窥镜盲输与发情鉴定后输精，以处理羊数为基数计算，全群输精受孕率分别为77.5%和75.0%，盲输全群输精受孕率略高于发情鉴定输精的全群受孕率。而在工作效率方面，盲输相对发情鉴定后输精平均单只羊操作时间节省30 s，工作效率相对提高16.7%(0.5/3)。
3 讨论羊子宫颈是一个非常复杂的纤维状组织，许多的子宫颈褶皱湮没了阴道和子宫的连接，子宫颈阴道部极不明显，仅为几个片状皱褶构成，且颈管内的横向较硬的轮状环相互嵌合，管腔弯曲狭窄，平时闭合严密，发情时只略张开，此特点影响了人工授精导管的穿过，阻止了精液顺利到达子宫，降低了受孕几率。腹腔镜输精技术能克服羊子宫颈管道这种特殊构造，直接进行子宫角输精，充分发挥低剂量、高精准、高效率的输精配种效果，输精受孕率达50%～80%，显著高于传统子宫颈输精40%～60%。
生产中，腹腔镜输精要与同期发情配合使用，所以掌握准确的输精时间、输精部位、有效精子数和输精方法是保证获的高受孕率的关键。乌达巴拉等对撤栓后24 h母羊试情，并开展腹腔内窥镜输精，鲜精有效精子数4～5×107，输精剂量0.4～0.5 mL，发情受孕率为92.7%，略高于本试验受胎率，但其输精有效精子数是本实验的倍，即种公羊的有效利用率要低于本试验方法，输精时间和输精部位未见具体报道。本试验研究表明，绵羊同期发情处理在撤栓后48 h开始输精，既能避免操作过程干扰母羊排卵与卵子接收，又能有效保障精子与卵子相遇、受精时间；输精部位选择在子宫角前、中段，输精准确率高，精液外溢现象少，操作方便，输精工作效率高，为批量输精，争取了时间；输精有效精子数在2×107，既能够保证良好的受孕效果，又能提高优秀种公羊利用率；在集约化、规模化生产中，减少劳动量投入，提高工作效率是第一要素。
在腹腔内窥镜输精工作中，利用试情公羊试情，然后再输精将带来大量人力、时间投入，且也不能保证试情100%的准确率，输精过程中观察卵巢进行发情鉴定，即延误整个输精时间而且会造成应激，影响排卵与卵子接收，造成整体受孕率下降。在腹腔镜输精报道中均采用了先试情再输精的技术环节，虽然起到了准确发情输精的目的，但与因试情而增加的人力、时间等相比，还是投入较大。实际生产中，羊群经过梳理、营养调控和同期发情处理（CIDR+PMSG）后，其整群同期发情率能够保证在95%以上，所以，在腹腔镜输精时，对全群处理母羊不经过发情鉴定全部输精的盲输法，既能提高输精工作效率，又能保证一个良好的受孕效率。
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