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脂肪酶又称甘油三酯水解酶，是脂肪代谢最基本的酶。幼龄家禽消化道尚未发育完善，对脂肪的消化能力较弱，因此有必要添加外源性脂肪酶以弥补特殊生理阶段动物内源酶分泌的不足。在肉鸡饲粮中添加外源性脂肪酶可提高采食量，使动物机体对饲粮能量利用率最大化；同时能提高饲料转化率，促进动物生长。本试验在白羽肉鸡的饲料中添加海洋脂肪酶及单细胞蛋白，研究其对白羽肉鸡生产性能和肠道微生物区系的影响，为海洋脂肪酶产品在实际中的应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1 试验设计
试验于2015年4月在青岛根源生物技术集团有限公司研发中心动物试验室进行，试验选择1日龄白羽肉鸡300羽，预饲7天，淘去体重差异大的鸡苗。剩余240羽肉鸡正式开始试验，试验分为4个处理组，每个处理组4个重复（即4个栏位），每个重复15只鸡，脂肪酶在试验组1、试验组2和试验组3饲料中的添加水平分别是2 U/g、4 U/g和6 U/g，3个试验组的单细胞蛋白添加水平均为500 g/t，对照组在饮水和日粮中不添加任何添加剂，各处理组连续饲喂至42日龄出栏。
试验所用饲料是根据白羽肉鸡不同时期营养需求制作的配合饲料，试验基础日粮组成和营养成分见表1。
1.2 饲养管理及生产性能记录
垫料平养，自由采食和饮水。每日清晨8:00和下午14:00分别记录鸡舍温度和湿度，定期清扫卫生。每周结料1次，计算平均采食量，于42日龄以重复为单位称重，计算日采食量、日增重和料重比等生产性能指标。
1.3 样品采集
各处理组饲喂至42日龄，从每个处理组随机取出10只鸡禁食12 h后屠宰，取盲肠食糜，对照组编号为0-1至0-10；试验组1编号为1-1至1-10；试验组2编号为2-1至2-10；试验组3编号为3-1至3-10。
DNA提取
PCR扩增及高通量测序
测序序列的聚类分析和注释
2结果与分析
2.1海洋脂肪酶及单细胞蛋白对白羽肉鸡生产性能的影响海洋脂肪酶及单细胞蛋白对42日龄白羽肉鸡生产性能的影响如表2所示。不同处理组之间的均重和欧洲指数均无显著性差异（P>0.05），但试验组日增重和欧洲指数平均值均略高于对照组。随着脂肪酶添加剂量升高，试验组2和试验组3的料重比显著低于对照组（P<0.05），说明海洋脂肪酶及单细胞蛋白可以提高白羽肉鸡的生产性能。
2.2 海洋脂肪酶及单细胞蛋白对白羽肉鸡盲肠微生物序列丰度和多样性的影响通过Illumina Miseq高通量测序后，本研究40个样品共产生2 096 549条高质量序列，每个样品平均产生52 413条序列，平均每条序列长度为429 bp，分别属于9个门、15个纲、30个目、52个科和97个属。
根据97%水平下OUT的丰度信息，使用Rarefaction Curve和Shannon多样性指数对肠道菌群的多样性评估结果如图1-2所示，OUT数目随测序量的提高而不断提高，当测序量到达一定程度时，OUT增加趋势变得缓慢，但仍未达到饱和，说明随着测序量的深入，可检测到肠道食糜中大部分菌种，但仍有少部分新的物种有待于进一步发现。Shannon多样性指数能够预测并比较样本微生物群落的多样性，尽管随着测序量的增大，不断有新的物种出现，但Shannon指数达到饱和，曲线趋于平缓，说明本次试验的测序量已经能够反映肠道菌群的多样性组成。
2.3 海洋脂肪酶及单细胞蛋白对白羽肉鸡盲肠微生物构成分析海洋脂肪酶及单细胞蛋白对白羽肉鸡盲肠微生物构成分析如图3-4所示。在门水平上，各处理组均以厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）为主，它们的比例均占序列总数的1%以上，其中厚壁菌门（Firmicutes）平均占序列总数的84.79%（64.64%~95.05%）。而无壁菌门（Tenericutes）、蓝细菌门（Cyanobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、异常球菌-栖热菌门（Deinococcus-Thermus）和黏胶球形菌门（Lentisphaerae）序列都低于1%。统计结果表明：各处理组均以厚壁菌门（Firmicutes）的丰度最高，对照组、试验组1、试验组2和试验组3厚壁菌门（Firmicutes）的丰度分别是89.2%、86.3%、78.3%和85.4%，其中对照组厚壁菌门（Firmicutes）丰度显著高于试验组2（P<0.05）；而对照组无壁菌门（Tenericutes）和放线菌门（Actinobacteria）的丰度显著低于试验组1（P<0.05），其它菌门各处理组之间没有显著性差异（P>0.05）。
在属的水平上，序列比对得到的97个属中共有37个菌属的相对含量大于0.1%，而鉴定出的其它菌属相对含量均较低，这表明肠道中含有很多相对丰度较低的菌属。在相对含量大于0.1%的菌属中，各处理组均以瘤胃球菌科的Ruminococcaceae_unclutured（属）、栖粪杆菌属（Faecalibacterium）、毛螺菌科的Lachnospiraceae_unclassified（属）、Anaerotruncus、Alistipes、志贺氏菌属为优势菌，其中瘤胃球菌科的Ruminococcaceae_unclutured（属）丰度最高，占总序列的21.07%；其次是栖粪杆菌属（Faecalibacterium），占总序列的12.24%。统计结果表明：各处理组均以瘤胃球菌科的Ruminococcaceae_unclutured（属）丰度最高，对照组、试验组1、试验组2和试验组3的Ruminococcaceae_unclutured（属）丰度分别是14.97%、26.60%、20.58%和22.12%，其中对照组Ruminococcaceae_unclutured（属）丰度显著低于试验组1和试验组3（P<0.05）；而对照组毛螺菌科的Lachnospiraceae_uncultured（属）丰度最高为6.81%，显著高于试验组1（2.53%）和试验组2（2.89%）（P<0.05），其它菌属各处理组之间没有显著性差异（P>0.05）。
3讨论
幼龄家禽由于消化道尚未发育完善，对脂肪的消化能力较弱，因此有必要添加外源性脂肪酶以弥补特殊生理阶段动物内源酶分泌的不足。本试验在饲粮中添加海洋脂肪酶及单细胞蛋白显著降低了白羽肉鸡的料重比，表明海洋脂肪酶及单细胞蛋白可以提高白羽肉鸡的生产性能。
白羽肉鸡的消化道由嗉囊、肌胃、腺胃、小肠和盲肠构成，肉鸡消化道的微生物与宿主生长代谢和免疫机能密切相关。而高通量测序可实现对以往传统培养方法无法检测到的微生物进行分类，且菌群丰度值更高，组成结构更加清晰。本试验采用Illumina Miseq高通量测序技术对肉鸡盲肠微生物进行了比较全面的检测。Shannon曲线分析表明，尽管随着测序量增大，不断有新的物种出现，但Shannon指数达到饱和，曲线趋于平缓，说明本次试验的测序量已经能够真实全面的反映肠道菌群的多样性组成。
本试验采用RDP和BLAST同源性序列比对所有样本序列鉴定得到9个门、15个纲、30个目、52个科和97个属。在门水平上，各处理组均以厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和疣微菌门（Verrucomicrobia）为主，它们的比例均占序列总数的1%以上，其中厚壁菌门（Firmicutes）平均占序列总数的84.79%（64.64%~95.05%）。
在属的水平上，本试验通过序列比对得到的97个属中共有37个菌属的相对含量大于0.1%，而鉴定出的其它菌属相对含量均较低，这表明肠道中含有很多相对丰度较低的菌属。
4结论
饲粮中添加海洋脂肪酶及单细胞蛋白显著降低了白羽肉鸡的料重比，通过高通量分析肉鸡盲肠微生物区系，显示菌群结构主要由厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和疣微菌门4大类构成，海洋脂肪酶及单细胞蛋白显著提高了试验组瘤胃球菌科Ruminococcaceae_unclutured（属）的微生物数量，这可能是试验组白羽肉鸡生产性能得到改善的原因。
参考文献略
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