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摘要：（目的）探索规模化养殖条件下，利用中草药替代抗生素，本试验先探讨中草药复方对鸽体内病原菌的体外抑菌效果。（方法）利用传统中药煎煮的方法提取上清液，通过体外抑菌法，将5种中草药复方作用于鸽大肠杆菌、沙门氏菌以及奇异变形杆菌，进行体外抑菌试验。（结果）结果表明，5种中草药复方对鸽体内病原菌表现出不同程度的敏感，以复方2的效果最好。
关键词：鸽，中草药复方，大肠杆菌，沙门氏菌，奇异变形杆菌
畜禽养殖业近几十年来发展迅速，规模化程度不断增加，但随着规模化的增加，抗生素在畜禽体内药物残留及病原菌抗药性逐渐增强的问题日益突出。肉鸽养殖业近几年发展更快，规模化进程更加迅速，新建养鸽场的规模由原来的几百上千对，发展成为动辄几万几十万对，虽然规模在不断扩大但由于人才和管理的缺失，鸽子的健康问题日益突出，临床上不得不使用抗生素，但由于鸽子的生理和生产的特殊性，寻找替代抗生素的产品刻不容缓。中草药作为我国特有的中医药理论与实践的产物，具有治疗、增强免疫[4]、促生长等作用，以其低毒、无药物残留、耐药性发生率低的独特优势，被广泛地应用于临床上，用来治疗畜禽疫病。临床上的常见症状，大肠杆菌、沙门氏菌、奇异变形杆菌等病原菌是鸽拉稀的原因之一[1,2,3]。因此，将中草药复方应用于鸽病防治中，是今后鸽健康养殖的趋势。本试验将自制的几种中草药复方通过体外抑菌试验，探讨中草药复方的抑菌效果，为其在临床上的应用提供理论依据。
1材料与方法
1.1菌种
鸽大肠杆菌、沙门氏菌、奇异变形杆菌。
1.2 供试中药
苍术、苦参、大黄、常山、秦皮、白头翁、黄连、黄柏、黄芩、葛根、甘草、穿心莲、神曲、蒲公英、黄芪、白芍、马齿苋、当归、麻黄、大青叶、连翘、黄连、金银花、杏仁、麦冬、桑白皮、菊花、桔梗购自江阴市颐神堂药店。
1.3培养基
营养肉汤培养基为上海中科昆虫生物技术开发有限公司产品，普通营养琼脂培养基为国药集团化学试剂有限公司产品。
1.4中草药复方处理
将各味中药粉碎，过80目筛。按一定比例称取中草药复方（表1）25g，分别加人300-400 mL水，煎1h，再加人50-100mL水，文火煎15min。药液用离心机离心，取上清液，浓缩至生药含量1g/mL。装人安培瓶中，封口， 121℃灭菌20min， 4℃冰箱中保存备用。用打孔器将优质滤纸打成直径1cm的圆形纸片，分装于西林瓶中，121℃高压蒸汽灭菌30 min，80℃烘干。每100片无菌烘干滤纸片加1g/mL的中草药煎剂1 ml，置于冰箱中浸泡60 min，使纸片均匀地将药液吸尽后(每片含药10ug)，置37℃烘箱中烘干，分装于灭菌西林瓶中密封，放置于低温干燥处[5]。
表1 中草药复方的组成
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复方
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组成
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复方1
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苍术、苦参、大黄、常山、秦皮
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复方2
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白头翁、黄连、黄柏、秦皮
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复方3
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白头翁、黄柏、黄芩、秦皮、葛根、甘草、穿心莲、苍术、神曲
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复方4
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穿心莲、白头翁、黄芩、蒲公英、黄芪、白芍、秦皮、马齿苋、当归、甘草
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复方5
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麻黄、大青叶、连翘、黄连、金银花、蒲公英、黄芩、杏仁、麦冬、桑白皮、菊花、桔梗、甘草
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1.5 菌种活化
将保存的菌种接种于适宜的斜面培养基上，于37℃培养16-18h，使其活化，然后接种于适宜的营养肉汤中，置于37℃温箱中培养18h。计数后，用营养肉汤稀释成108CFU/mL的菌液，4℃冰箱中保存备用。
4 抑菌试验方法
用消毒棉签将试验用菌液均匀涂布在普通琼脂培养基平板上，将抗生素药敏纸片和自拟中草药复方药敏纸片分别贴在培养基表面于无菌平皿内，每种药液做3个平皿，置于37℃培养箱中培养24h，测量抑菌圈直径，求出3个平皿的平均值。判定标准[6]：抑菌圈直径小于10 mm为耐药；10-15mm为中度敏感；15mm以上为高度敏感。
2结果与分析
表2 中药复方对鸽体内致病菌的体外抑菌效果 （mm）
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复方
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大1
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大2
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大3
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沙-1
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沙-2
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奇-1
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奇-2
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奇-3
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复方1
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-
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-
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-
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12
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-
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-
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13
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12
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复方2
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13
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16
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13
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16
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12
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14
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15
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15
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复方3
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-
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12
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-
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14
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12
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14
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13
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15
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复方4
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12
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12
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12
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12
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13
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17
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14
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16
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复方5
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-
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16
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-
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13
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13
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14
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13
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11
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注：表中“-”表示无抑菌圈。
从表2可以看出，5种中药复方对鸽体内的致病菌的体外抑菌效果各不相同。其中复方1对3种血清型的大肠杆菌、沙-2、奇-1均不敏感，对其余菌表现出中度敏感；复方3、复方5对大1、大3型大肠杆菌均没有抑菌圈，对其他菌表现出不同程度的敏感；复方2、复方4对各种菌均表现出不同程度的抑菌效果，其中复方2对大2型大肠杆菌、沙-1表现出高度敏感，复方4对大2型大肠杆菌亦表现出高度敏感。
3讨论
大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌病是鸽的常见传染病，目前这些传染病的治疗多以抗生素为主，长期使用抗生素使得致病菌易产生耐药性，抗生素的临床效果就会越来越差。另外，畜产品无公害化生产的要求，使抗生素的选择范围越来越小。而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小，且毒性小、副作用小、几乎无残留，所以研究应用中药防治鸽疾病有重要的现实意义[7]。
本试验中，5种中草药复方均对鸽病原菌表现出不同程度的抑菌效果。其中复方2、4对各种菌均表现出抑菌效果，综合来看，以复方2的效果较好。复方1、3、5对某些菌表现为没有抑菌效果，这不能说明该复方没有抑菌效果，还可能与所使用的复方提取物的浓度有关。而且某些中药如决明子、藿香、板蓝根对大肠杆菌的体外抑菌效果来看不明显或无效，但在临床上，用于治疗疾病极佳，其机理可能是中草药治疗疾病除对抗病原体作用外，还有调节机体免疫，诱导干扰素，对抗细菌毒素等方面有关[8]。
4结论
5种中草药复方对鸽体内病原菌表现出不同程度的敏感，以复方2的效果最好。此外，没有表现出抑菌效果的复方不代表其在临床上无效。
参考文献：
[1]王晓丽，王永明，朱万光，等.鸽新城疫与大肠杆菌混合感染的诊治[J].上海畜牧兽医通讯，2010,6:82.
[2]仲学峰.小心种鸽患大肠杆菌与沙门氏菌混合症[J].中华信鸽，2010,1:57.
[3]于进波，王志海，邵芹，等.鸡奇异变形杆菌病的诊治 [J].养殖技术顾问，2010，1:104-105.
[4]Kong X F, Hu Y L, Rui R, etal. Effects of Chinese herbal medicinal ingredients on peripheral lymphocyte proliferation and serum antibody titer after vaccination in chicken[J]. International Immunopharmacology, 2004, 4(7):975-982.
[5]苏丽娟，谢慧，吴玉臣，等.自拟复方中草药防治鸡大肠杆菌病疗效研究[J].安徽农业科学，2007,35（36）：11841-11842.
[6]秦四海.自拟中草药复方防治蛋雏鸡大肠杆菌病的研究[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2005,33（8）：41-46.
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[8] 史秋梅，沈萍，汤生玲.抗菌中草药筛选试验方法研究[J].中国家禽，2004,8（1）：45-47
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