蓝耳控制和净化工具

现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2018/7/25 17:00:08 关注：662 评论： 我要投稿

蓝耳控制和净化工具

惠通猪医院  安玉甫整理

资料来源：Project funding kindly provided by Canadian Swine Health Board

内容

猪繁殖与呼吸综合征的控制方案

1.猪繁殖和呼吸综合征免疫建立工具

1.1同源VS异源免疫

1.2商品化弱毒活疫苗

1.2.1后备母猪/公猪免疫

1.2.2种猪群免疫

1.2.3生长猪群免疫

1.3蓝耳病活毒暴露

1.3.1原理和原则

1.3.2用以活毒暴露的具有感染性蓝耳田间野毒来源

1.3.3避免活毒暴露的副作用

1.3.4不同生产阶段的暴露策略

1.3.4.1后备母猪/公猪驯化

1.3.4.1.1后备动物选留

1.3.4.1.2驯化过程

1.3.4.1.3驯化地点

1.3.4.1.4驯化流动/连续式VS全进全出

1.3.4.1.5毒株监测

1.3.4.2种猪群暴露

1.3.4.3生长猪群暴露

2.降低蓝耳病毒感染量的工具

2.1McRebel

2.2生物安全

2.3清洁卫生

蓝耳净化程序

1.清群

1.1全群清群/重建群

1.2分娩清群

1.3保育或者育肥清群/重建群

1.4保育或者育肥部分清群/重建群

2.检测移除

3.断奶移除

4.从蓝耳病毒阳性母猪生产出阴性仔猪

5.封群和轮替

蓝耳监测工具

1.监测

1.1ELISA

1.2PCR

2.使用哨兵猪

3.蓝耳病毒净化的监测程序

3.1动物选留

3.2采样数量

简介

蓝耳控制和净化工具包是给兽医们提供的用以从生产阶段或者单一猪群控制和净化猪繁殖和呼吸综合征病毒的一个资源。工具包是基于目前已知的科学研究成果，田间试验和猪场采用过的方案。知识是不断进步的，读者需要与时俱进，不断跟上新的信息。

放眼北美乃至全球，许多猪场都通过不同的方案达到了单个猪群蓝耳病毒的净化。在文献中，一些作者报道称从猪群净化蓝耳病毒的成功率高达91%—100%，尤其是种猪群。

本工具包分为三个主要部分：

1、蓝耳控制方案：

第一个部分是“蓝耳免疫力的建立工具”。这些工具用来在猪群内建立有保护力的免疫力。当所有猪群都有保护力的免疫，那么蓝耳病毒将不再复制，将能被净化。

第二个部分是“降低蓝耳感染量的工具”，列举了用来降低能够感染易感动物的病毒数量的管理措施。环境中的病毒变少了就可以减少感染动物，降低猪群蓝耳病流行率，之后就可以启动蓝耳净化方案。

2、蓝耳净化方案：介绍了许多来净化蓝耳病毒的方案。每种方案需要免疫力最大化，感染水平最小化，并且加强保护力。因此，这些方案的成功都依赖于有效地使用免疫力建立和感染量降低工具。

3、蓝耳监测工具：提供了如何检测蓝耳病毒感染和监测蓝耳病毒净化方案成功与否的技术路线。

猪繁殖与呼吸综合征病毒控制方案

1.猪繁殖与呼吸综合征免疫建立工具

1.1同源VS异源免疫力

同源免疫力指的是猪群免疫系统产生的免疫保护力，是针对之前暴露过的蓝耳病毒。通常同源免疫力要比异源的更有效。蓝耳病毒暴露后产生的同源免疫保护力可能将持续动物的一生。最近的研究也表明对于蓝耳病毒，同源保护力也不是100%的有效，当动物再次感染同一毒株病毒时，依然会产生病毒血症感染。尽管如此，同源免疫保护还是要比异源更有效。

异源免疫力指的是猪群免疫系统产生的免疫保护力是针对猪群之前没有暴露过的蓝耳病毒。异源保护能力取决于不同的感染毒株差异比较大。异源保护力，包括弱毒活疫苗产生的保护力被证明甚至对高致病性的毒株有效。能够保护与免疫毒株不一样的蓝耳病毒的感染，我们称为“交叉保护”。交叉保护某种程度上可能与两个毒株基因相似性有关。至今，究竟编码结构蛋白的哪个基因主要刺激免疫依然不清楚。

1.2商品化蓝耳弱毒疫苗

在蓝耳控制和净化方案中使用商品化的蓝耳弱毒活疫苗已经取得了不同程度的成功。在使用田间野毒进行攻毒保护的实验中，蓝耳弱毒活疫苗通常可以有效地降低临床发病，但是通常防止病毒感染的能力不佳。蓝耳弱毒活疫苗的交叉保护力也因不同的猪场有很大的差异。在母猪群上面，蓝耳弱毒疫苗的异源保护很难像自然同源保护那样维持免疫保护力。蓝耳弱毒疫苗的ORF5基因与感染毒株基因的相似性并不能很好的反映疫苗的有效性。但是阴性猪免疫弱毒疫苗会排毒，再次免疫后不会传播。阴性猪群不推荐使用蓝耳弱毒疫苗，因为可能存在排毒，并且在检测的时候会带来困扰，因为很难区分是野毒还是疫苗毒。

1.2.1后备母猪/公猪免疫

后备母猪和公猪如果在进入猪群之前没有免疫在种猪群循环着的蓝耳病毒，会存在感染的风险。后备如果感染了蓝耳病毒再进入种猪群会散毒。怀孕的后备特别是怀孕的后期感染蓝耳病毒会导致蓝耳病毒垂直传播给仔猪。如果种猪群内部有蓝耳野毒在循环，后备母猪和公猪在进入种猪群前使用商品化的蓝耳弱毒苗有助于降低感染的可能性和排毒。这种降低蓝耳病的风险也是某种意义上疫苗对于场内循环野毒的一种交叉保护。后备免疫商品化的蓝耳弱毒疫苗的结果也有所差异，因为蓝耳疫苗的产生的免疫力不能控制每一种蓝耳病毒株。

1.2.2种猪群免疫

商品化蓝耳弱毒疫苗可以用来对整个母猪群提供群体性暴露。结果是有差异的，因为疫苗产生的免疫力控制蓝耳病的能力不都是一样的。研究表明，母猪群首先在首免一个月以后进行二免有助于避免疫苗毒和田间野毒从哺乳母猪向仔猪的散毒。如果母猪正是怀孕的第三个阶段（66—114天），首次疫苗免疫时间可以推迟到分娩后7天，30天后再进行二免、同时进行普免可以有效的让所有的易感动物在同一时间产生免疫力。当场内的所有母猪进行了两次疫苗免疫，就可以封群，当猪群流动再得到控制，母猪群可以清除掉蓝耳感染，因为猪场里面已经没有易感动物发生急性感染和蓝耳病毒的散毒。针对异源蓝耳感染的保护程度和长度因为疫苗和野毒间病原的相关性而差异显著。

1.2.3生长猪群免疫

商品化的蓝耳弱毒疫苗可用于生长猪群的普免。生长猪群免疫商品化的蓝耳弱毒疫苗的结果也有所差异，因为蓝耳疫苗的产生的免疫力不能控制每一种蓝耳病毒株。生长猪群免疫时间最好是等到母源抗体下降以后，因为母源抗体可能会影响到疫苗的效果。因为不同的猪场和管理模式，蓝耳病毒的循环时间和猪群的感染时间会不尽相同，因此提供一个通用的蓝耳免疫程序很难。商品化蓝耳弱毒疫苗产生的保护力应答缓慢，猪群需要在野毒感染之前免疫疫苗。Opriessnig等报道称如果生长猪群在野毒感染前5周使用蓝耳弱毒疫苗可以产生异源免疫保护。这使得猪群在感染之前有足够的时间建立免疫保护。在首免后一个月加强免疫一次可以提高交叉保护。攻毒试验已经证明商品化蓝耳弱毒疫苗可以有效地降低异源毒株攻毒后的影响，在田间试验中也证明了蓝耳疫苗使用后的经济效益产出比投入大。在生长猪群已经验证过，猪群在感染非同源的野毒的情况下，使用蓝耳弱毒疫苗能够有效果。在感染后一周使用商品化蓝耳弱毒疫苗，疫苗可以有效地降低病毒血症的持续时间。蓝耳弱毒疫苗可以在部分清群的时候用来降低留在圈舍内大猪的排毒风险。现已证明，在一个蓝耳阳性的生长猪群使用蓝耳弱毒疫苗进行普免，使用单一的猪群流动，结合部分清群的方法，可以成功地清除蓝耳病毒。

1.3蓝耳田间野毒暴露

1.3.1原理和原则Rationale and principles

使用田间野毒进行暴露的做法与疫苗科学一样历史悠久。这项技术也不是什么新技术，已经被用于很多其他病毒性疾病的防控，例如传染性胃肠炎（Moxley et al，1993）。它的原理是基于同源免疫保护要比异源的更好（Lager et al，1999）。田间野毒的普免要确保所有的动物100%都暴露于某特定的蓝耳田间野毒，以确保均一化地抗体阳型猪群，以免产生易感动物亚群（Ruen et al，2007；FitzSimmons，2005）。重要的是要确保用来对整个猪群进行暴露的蓝耳毒株真的是是取自于特定场内。例如，如果一个母猪群需要暴露与某个田间野毒，那么这个野毒需要提取与母猪群而不是场外的某个保育舍（FitzSimmons，2005），要不然会引入新的病毒循环。依循这一原则可以降低误引入一个新的场外野毒的机会。

决定对阴性动物进行田间野毒暴露通常会引起临床症状，严重程度取决于使用的蓝耳毒株的毒力（FitzSimmons，2005）。对许多单个动物而言，感染后的严重程度无异于一次自然的田间野毒感染。通过使用田间野毒暴露我们可以影响感染时间，然后能够影响暴露动物的繁殖状态，影响圈舍内的散毒进程。

使用田间野毒进行暴露可能会带来在猪群散播其他病原的风险，以及其他问题都应当被考虑进去（Corzo et al，2010；O’Rourke，2005）。许多报道的母猪繁殖障碍的问题都是因为猪群暴露了田间野毒后引起的

（Bruner，2007）。这个作者还报道过，即使怀孕母猪第二次暴露于同一个蓝耳田间野毒依然会引起繁殖损失。使用猪场内的血清接种，在实验室制作血清的时候有可能交叉感染实验室的其他用于接种的血清病毒。

蓝耳田间野毒暴露可用于：

后备母猪和公猪驯化（Hill et al，2004；Batista and Dee，2002；Batistaet al，2002）

在急性发病时或这部分猪群暴露（Hill et al，2004；Ruan，2003）

偶尔出生仔猪会有病毒血症是全部或者部分猪群暴露（Pittman，2007；Ruen et al，2007）

1.3.2活病毒暴露所用的感染性蓝耳病毒来源

血清注射：

猪群所特有的蓝耳病毒是来自与收集病毒血症的病猪血清（FitzSimmons，2005）。血清收集程序，血清储藏和猪场现场蓝耳活病毒的接种程序都已经公开发表（Hill et al，2004；Pugh et al，2005；FitzSimmons，2005；Ruen，2003）。如果人工可以严格执行程序，血清注射的好处是确保所有动物100%的暴露。通常来说，出生弱仔或者产房里面有临床症状的猪病毒含量是最高的（Ruen，2003）。有效的感染剂量需要每头猪7个病毒粒子到247个病毒粒子，这可以确保暴露猪群抗体转阳（Pugh et al，2005）。尽管同源活毒接种可以提供保护防止蓝耳病毒的增殖，但是最近的实验表明并不能防止病毒垂直传播给仔猪（Murtaugh and Wagner，2010）。

组织返饲：

In the scientific literature this methoddoes not seem as widely used and reported as serum injection

猪群所特有的蓝耳病毒是来自于收集感染蓝耳病毒猪的组织（Desrosiers and Boutin，2002）。然后将这些组织返饲给需要建立免疫力的猪群（Dufresne，2003）。这种蓝耳暴露方法的缺陷在于不能完全可靠，因为很难定量所用材料中活病毒的均一性（Hill et al，2004）。在科学文献中，这一方法没有雪情节中应用广泛。

排毒猪：

确定正在排出蓝耳病毒，这些病毒是需要感染猪群所特有的。然后将这些排毒猪与需要建立免疫力的猪关在一起，保证它们可以鼻对鼻接触。这一方法需要保证排出足够量的病毒，而且猪群之间可以直接接触，因此这种方法也不完全可靠（Hill et al，2004）。当母猪群急性发病，流产的母猪正在散毒，可以在整个母猪舍移动该母猪來使得其他母猪被暴露（Desrosiers and Boutin，2002）。通常，小猪比大猪感染的时间更长，并且更易产生持续性感染（Batista and Dee，2002；Ruen，2003）。因此让后备母猪和公猪接触正在排毒的小猪更为有效。更为可靠的做法是让抗阴性的猪暴露于接种过流行性蓝耳野毒的6周龄小猪。

1.3.3降低活毒暴露的副作用：

执意让猪群暴露于蓝耳田间野毒会引起临床副作用，死亡或者降低母猪群的生产效率（FitzSimmons，2005：Bruner，2007）。对那些准备使用活毒暴露方法的人来说可能会存在伦理道德方面的为难情况。但是成功防控或者净化蓝耳病毒的产出可以打消人们的这种顾虑（FitzSimmons，2005）。这里有一些工具可以用来降低田间野毒暴露的副作用。退热药物例如乙酰水杨酸和替米考星这些抗生素可以使得动物更为舒服，并且可以降低死亡繁殖障碍。不幸的是，结果往往变化很大（Misener et al，2006；Nemechek et al，2009；Batistaet al，2009；Fano et al，2005；Pittman，2007）。

1.3.4不同生产阶段的暴露策略

1.3.4.1驯化后后备母猪和公猪

1.3.4.1.1后备动物选留

蓝耳控制或者净化得以成功的基础是确保从种猪场引入后背来源不会引起新的蓝耳病毒或者再次引入已经存在的蓝耳病毒。如果是从场外其他猪场引种，强烈建议从那些抗原体阴性动物的种猪场引种（FitzSimmons，2005）。种猪场必须向老板和猪场兽医提供详细的足够量动物的周期监测报告，以猪场疾病控制基本框架和生物安全评估报告，以提供对于种猪场状态足够的信心。动物运输的生物安全也需要包括在评估在内。这也适用于所有公猪精液的来源场。

1.3.4.1.2 驯化过程

驯化过程包括三个阶段：暴露前期，暴露阶段和暴露康复阶段（Dee，2004）。取决于猪场种猪群的状态和采用的驯化方法，每个猪群驯化的时间长度都不一样。

驯化前期：

暴露前期的目的是提供机会确认引入动物的蓝耳病毒状态。为了准确的评估引种种猪场最近的蓝而感染，运输期间的感染，后背动物在抵场后14天内采样。如果需要早于14天了解蓝耳状态那么可以结合使用血清学和蓝耳病毒PCR采样。如果后背动物是在抵场14天以前在来源种猪场发生感染那么后背动物的抗体会是阳性。抵场14天以内血清学的检测会告诉我们是发生在种猪场。PCR检测可以告诉我们存在病毒血症可能是在种猪场感染也有可能在之后。抵场后14天以内进行检测可以让我们有机会处理这些感染的后背动物（Charbonneau，2010）。

暴露期间：根据采用技术的不同，暴露的时间长短不一。血清注射暴露1天就可以完成，弱毒疫苗免疫如果免疫俩次间隔一个月那么暴露的时间需要1个月，如果使用阳性动物混样感染暴露则需要长达60天（Dee，2004；FitzSimmons，2005；Gillespie and Carroll，2003）。

暴露康复时期：后备母猪和公猪的驯化程序是确保后背母猪和公猪在即将进入或者进入种猪群后不在排毒。如何需要进行蓝耳驯化，在后背母猪和公猪暴露病毒后至少隔离90天的时间再进入种猪群（Batista and Dee，2002）。这将使得动物在进入种猪群之前停止排毒。当暴露后的隔离时间越长，后背猪群进入种猪群排毒的风险越小（FitzSimmons，2005）。田间通常在移动动物进入母猪群之前使用PCR检测。需牢记，蓝耳病毒PCR检测阳性说明有单个猪只正在排毒。蓝耳病毒PCR检测为阴性也不能保证单个动物不具有感染性。

1.3.4.1.3 驯化场地

生长猪群场内驯化：购买回来的断奶猪或者是公猪可能被放入既有的保育或者生长育肥舍，5--45公斤的生长阶段（Batista and Pijoan，2000）。只当生长猪群有活跃和连续的蓝耳病毒循环才采用驯化的方法。之前提过，这一驯化的方法同时取决于足够量的散播病毒量和猪之间鼻对鼻的直接接触，因此不完全可靠（Hill et al，2004）。当后背母猪或者公猪没有生产免疫力，可能会加剧猪群爆发蓝耳的风险。如果在场外的保育舍或者生长育肥舍循环的蓝耳毒株跟母猪群的不一样，那么母猪群会有引入新毒株的风险（FitzSimmons，2005）。这种蓝耳驯化的方法最好是一个短期的方案，最终目标是用来生长猪群清除蓝耳病毒循环。

封闭猪群的场内驯化地点:

在一个蓝耳病毒阳性的封闭式猪场，自繁自养后备母猪，这些后辈偶尔也会有蓝耳病毒在内部循环。后背母猪和公猪需要适应场内目前存在的野毒，但是进入种猪群之前不能排毒（Dee，2004）。需要有一个场内的隔离设施和一套蓝耳驯化的程序确保进行蓝耳病毒的暴露，但是不给其余猪群增加暴露于更多量蓝耳病毒的风险。若场内的驯化舍建造的很近或者直接挨着，那么有可能通过空气将驯化舍的病毒传播到其以外的主要猪舍，必须要让隔离/驯化舍与主要猪舍之间做到生物安全上的完全隔离（Torremorell et al，2000）。至少从驯化舍到其他猪舍要换衣服换鞋子和洗手。在驯化舍内建议做到全进全出，这样病毒变异，病毒基因漂移的几率会降到最低。

场外训化设施：

场外的后备母猪驯化场地最大程度上可以避免从后备驯化舍向其他猪舍通过空气传播病毒，而且可以减少人员流动，污染也可以得到控制。这对于一些容易通过空气传播的病毒很重要。在最近的研究中，已经证明空气可以携带感染性蓝耳病毒例子传播9公里远（Otake er al,)。场外后备驯化舍的生物安全要达到甚至超过母猪场的标准。（FitzSimmons，2005）。场外的驯化舍如果跟其他的猪场太近的话很容易通过苍蝇、蚊子和空气等传播其他蓝耳病毒到后备动物驯化舍（Zimmerman，2007）。空气过滤的安装有助于降低空气传播感染的风险（Reicks，2010）。使用场外的后备母猪驯化舍，驯化舍和猪场之间的运输对于有些猪场也是一种风险。

1.3.4.1.4驯化流动/连续性VS全进全出：

有一些猪场使用连续性流动的驯化单元来维持驯化用的蓝耳病毒来源。这种猪群流动的模式会带来蓝耳病毒持续的循环和复制，增加蓝耳病毒变异的可能性。在某种程度上，会促使驯化社的蓝耳病毒与母猪群有显著差异，而这一新毒株有可能再进入种猪群。种猪群已有的对于现有毒株的免疫力可能没法对这一新毒株有充分的交叉保护力。连续性的流动不是驯化舍的第一选择，因为它会导致后备母猪的健康收到伤害，蓝耳毒株的“漂移”会增加（Roberts，2002）。就像之前提到的，后备驯化舍建议采用全进全出的猪群流动。

1.3.4.1.5毒株检测：

在一个有蓝耳病毒循环的阳型场，田间通常不断更新用于暴露的蓝耳毒株。这样做的目的是即使猪群的蓝耳病毒发生了变化，但是种猪群能够对其保持免疫力。之一方法需要定期再次分离猪场内的蓝耳病毒，测序比对然后在暴露程序中更新毒株（Torrison et al，2003）。这一做法是帮助控制随着时间推移因为蓝耳毒株漂移而不能在场内净化蓝耳病毒所带来的影响。

1.3.4.2种猪群暴露

所有母猪和公猪田间蓝耳野毒的暴露是用来确保所有母猪和公猪在同一时间被暴露并且都同时产生免疫力（Corzo et al，2010）。这位从种猪净化蓝耳病毒提供了一个绝佳的机会。在某些情况下，可以购买一定数量的后备母猪和公猪然后对其暴露猪场内特有的蓝耳病毒株。然后种猪群至少封群180天（Alfonso et al，2005；Schaefer and Morrison，2007；DuBOIS,2007).在大多数案例力，封群的时间更长（Torremorell et al，2003；Schaefer and Morrison，2007）。更为广泛接受的封群时间是200天（Yeske，2009）。对怀孕母猪暴露蓝耳田间野毒可能引起母猪死亡或者繁殖问题例如流产、死胎、或者在怀孕火气将病毒垂直传播给仔猪（Bruner，2007）。仔猪在怀孕后期于子宫内发生蓝耳病感染会哺乳仔猪、保育猪和育肥猪的发病风险（Bruner，2007）。

1.3.4.3生长猪群暴露

所有生长猪群田间蓝耳野毒的暴露是用来确保所有生长猪群在同意时间被暴露并且都同时产生免疫力（Pittman，2007）。这将使得免疫力更均一，因此让动物转入连续流动的保育和育肥舍之前减少排毒。特意的用田间蓝耳野毒进行暴露并不是很好选择，因为会引起生产损失和临床发病（Dufresne，2003）。如果长期目标是向从猪场净化病毒，那么使用毒力较弱的蓝耳毒株进行暴露是可以接受的。

2.降低蓝耳病毒风险的管理措施

在进行蓝耳净化之前需要确保最好的管理措施。这包括了内部和外部生物安全，消毒卫生和管理程序（Dufresne，2003；Torremorell et al，2000；Zimmerman，2007；McCaw，1995）。关注细节可以增加成功率。

降低蓝耳风险的工具是指通过最好的管理手段，降低环境中的蓝耳病毒进而减少其去感染猪群。将病毒粒子的水平降低到感染计量以下是确保病毒在猪场内死去。

2.1 McREBEL™PRRS

McREBEL™PRRS是一系列的蓝耳管理措施。McREBEL™指的是Mangement Changes to Reduce Exposure toEliminate Losses(McCaw，1995）。北卡州立大学的Monte McCaw 开发命名了这一程序。这一程序的首要目标是降低继发细菌感染，但是对降低蓝耳病毒的传播有效。McREBEL™PRRS 方案简单，低成本使用，确实可以有效地降低保育舍和产房的损失，种猪群也可以得到稳定。

方案的难点在于猪场的员工很难抗拒产后24小时寄养的诱惑，或者对小猪进行安乐死是一个问题。方案需要改变才能获得成功。

McREBEL™PRRS方案包括了控制寄养时间，不同房间之间母猪和小猪的移动，使用代乳母猪，小猪安乐死，小猪处理程序，以及代乳母猪的流动（McCaw，1995）。

持续遵守McREBEL™PRRS原则非常重要。这是达到母猪群蓝耳净化的重要措施之一。McREBEL™PRRS程序应该实施到检测证明已经净化了蓝耳病毒（Polson et al，2010）。推荐的McREBEL™PRRS限制寄养生产流程见附件

1（McCaw，2006）。

2.2生物安全

内部生物安全是指在同一群体内控制病毒从已感动物向未感动物移动。这一原则可以在蓝耳爆发后很早的时候使用，一次来让未感断奶猪的数量最大化。这一原则也被用来在蓝耳爆发后降低场内病毒/内部生产的很多程序跟外部生物安全一样，但是关注点是在猪场内部。内部生物安全工具可以用来降低猪群内的感染率。比如控制能够将蓝耳病毒从一头猪带到另一头猪的工具或者物品，具体有针头、剪牙、索手套、扫帚等。内部生物安全涵盖了猪群流动例如停止移动母猪，单一的猪群流动。完全生物转换区域，例如进门的“丹麦式入口”。全进全出是内部生物安全的一个基本组成部分（Pitkin et al）。

蓝耳感染时的关键内部生物安全建议（Charbonneau,2007）

• 停止移动蓝耳阳型猪到阴性保育猪群

• 种猪群在急性蓝耳爆发的时候停止移动母猪

• 隔离流产母猪

• 流产母猪待的限位栏或者圈进行彻底的清洗

• 每个母猪一个针头

• 每一窝一个针头

• 每一窝一个一次性手套

• 在处理完正在排毒的病猪后要把鞋子和手洗干净，换工作服

• 处理粪便和饲料的时候使用单独的铲子，扫帚或者刮板

• 停止母猪产前返饲

• 通道使用石灰或者其他干制消毒剂

• 准备两套仔猪处理工具，以提高消毒剂接触时间

• 控制不同房间的小料车

• 仔猪处理小车进行消毒或者停止使用仔猪处理小车

• 为生长猪群配备有效的病猪栏或者康复栏

• Euthanize animals with poor prospect ofrecovery on a timely basis.Take these pigs to a remote area of the barn so thatblood from the euthanasia process does not infect susceptible pigs.将虚弱，康复渺茫的动物安乐死掉。将这些猪转移到离猪圈较远的地方，以免安乐死的过程中的血再次感染易感猪群。

• 确保单一的猪群流动，猪只向比他更小的猪群流动或者关在病猪周围。治疗康复或者治疗后安乐死。

• 每4周批次分娩，确保产房的全进全出(Bonneau,2010)

• 停止配种三周也有好处（Bonneau，2010）

• 空栏，清洁，消毒存有活蓝耳病毒的冰箱。

外部生物安全是指控新的病原进入到猪群。有许多防止主群感染的程序。感染性的蓝耳病毒可以通过控制传播非常远的距离，现在很多猪群密度比较大的地区也越来越流行使用空气过滤的方法来做为一个有效的外部生物安全措施（Otake et al，2010；Reicks，2010）。生物安全的好坏拒绝于整个生物安全中的短板，因此单一的空气过滤不能构成一个全面的方案，需要整个外部或者周边的生物安全体系都天衣无缝。

想进一步了解蓝耳生物安全规程，可以参考AASV蓝耳生物安全手册http://ww.aasv.org/aasv/PRRSVBiosecurityManual.pdf

2.3卫生

清洁卫生主要用于不同批次的猪，以达到从猪舍的特定位置清除掉蓝耳病毒。需要彻底清除所有的有机物，包括粪便，尿液，饲料，垫料和体液，并进行高压冲洗。建议清洗的时候使用一点洗涤剂，这样可以确保生物膜被清除掉。

一旦清洗干净，猪圈要进行彻底有效的消毒。有些产品已经证明是可以有效的杀死蓝耳病毒，包括季铵盐+戊二醛混合物和改良的过一硫酸氢钾。这些产品的使用浓度分别是0.8%和1%。所有表面覆盖消毒剂后保证接触时间至少2小时。在冬季，要消毒的地面需加热到10摄氏度以上，以确保消毒剂发挥效果（Schneide，2010）。

在清洗后，栏舍必须有足够的空栏时间以确保干燥。让整个房间干燥是清洗消毒过程中最重要的一个环节，只有这样才能确保灭杀病毒。

要想进一步了解蓝耳消毒，可以参考美国AASV生物安全手册，http://www.aasv.org/aasv/PRRSVBiosecurityManual.pdf

蓝耳进化方案

1.清群

1.1全部清群/重建群

这一方法包括移除场内的所有的种猪和/或者生长猪群，对猪舍消毒，然后引入蓝耳阴性猪（Corzo et al,2010)。

当猪场有很多的疾病问题，并且已经没有行之有效方法可以成功，才采用清群/重建群的方法。那些猪场里有很多蓝耳毒株，又有很多其他疾病，这样猪场就最适合做清群/重建群（Roberts,2002;Corzo et al,2010)。猪群若想快速改良品种基因也可以使用此方法。但是实施此方案的前提是兽医已经明确找到了爆发蓝耳的病毒源头，评估了风险因素，要不然盲目的重建不久后还会爆发蓝耳（DeBuse,2007），另外，要确保重建群提供的后备母猪都是蓝耳抗体阴性的（DeBuse,2007；Hill et al,2004）。

读者请注意：Paul Yeske 有一篇非常好的总结，阐述了对比封群发，清群/重建群的经济效益（Yeske,2010）

1.2产房清群

一旦种猪群产生了针对猪场特定蓝耳病毒的免疫了，那么主要存在病毒循环的是小猪。将产房清空将清除在仔猪群内的病毒循环。这也有利于实施有效的清洗消毒程序。将产房清空的时间很重要，必须要在产出病毒血症之前（Misener,2010）。

1.3保育和/或者育肥清群和重建群

一旦断奶仔猪的是阴性的，可以将保育和育肥清群，然后屯入蓝耳阴性猪群（Ddd and Joo,1997）。这一方法需要在引入蓝耳阴性仔猪之前彻底清洁和消毒栏舍。（Dufresne,2003;Torremorell et al,2003）。

1.4保育或者育肥部分清群和重建群

按栋全进全出的育肥舍，可以使用部分清群的方法来净化蓝耳：将蓝耳阴性的保育猪放入空的、干净和消毒过得房间，其他栋依然有蓝耳阳性动物（Andreason,2000）。这一方法需要在引入阳性动物之前，猪舍要彻底的清洗消毒(Dufresne,2003;Torremorell et al,2003）。如果场内的毒株不倾向于通过空气传播，可以实行严格的生物安全，那么这一方法可以更加成功。需要建立一套蓝耳阳性舍和蓝耳阳性舍之间的程序，以管控蓝耳病毒移动的风险。会因为产生了空气传播而导致了方法失败（Charbonneau,2010)。

2.检测淘汰（TR）

检测淘汰是种猪群基于血清学和病毒血的检测然后逐步淘汰抗体阳型/感染动物（Dee et al,2001;Corzo et al,2010）。检测过母猪群，并且15%以下的动物是蓝耳抗体阳型，可以实行检测淘汰方法（Dee et al,2000）。整个猪群同事进行蓝耳抗体和抗原检测。任何母猪不管是哪一项阳性都淘汰（Dee et al,2001;Toberts,2002）。如果是在断奶后检出蓝耳感染，那么感染过的保育和/或育肥舍需要在检测淘汰前24-48小时内清群。完成整个检测淘汰以后，母猪群，保育和育肥猪需要连续监测抗体12个月。母猪群采样数量需要确保信区间95%，估计流行率大于5%能够至少检出一个阳性猪，保育育肥猪群采样数量需要确保信区间95%，估计流行率大于30%能够至少检出一个阳性猪（Dee et al,2001）。PRRSnaive，seronegative replacement stlck can act as sentinelsand be monitored more intensively.时间越长成功率越高。现有的经验是等到连续12个月检测是阴性就可以判断猪群已经是阴性群。蓝耳阴性，抗体阴

性的动物可以作为哨兵猪，可以让监测更为集

3.断奶淘汰（WR)

断奶淘汰类似于检测淘汰，但是更关注断奶母猪群。母猪在分娩前检测蓝耳抗体和PCR（Sandri,2001）。通常PCR阳性的动物非常少，这些阳性猪一般立马清除掉还没等到分娩。蓝耳ELISA阳性母猪在断奶时淘汰，更新一些蓝耳阴性后备。断奶淘汰程序一般会进行20个礼拜（Roberts，2002），最低每头母猪至少检测一次。这比检测淘汰程序来的更慢。风险是蓝耳ELISA阴性猪在分娩前有可能被一只没有PCR检测出阳性的母猪感染。蓝耳PCR阴性/蓝耳ELISA阳性母猪分娩后会间歇性排毒长达90天，知道抗体转阴。

4.从蓝耳病毒阳性母猪生出蓝耳病毒阴性小猪

这一策略的目标是让蓝耳阳性猪群产出蓝耳阴性仔猪（Torremorell al,2000)。这一方法包括4个步骤：

-Identificationof the donor population；A populantion of seropositive animals whereno PRRSV is circulating is identified.

确定母猪群状态：确认母猪群抗体阳性但是没有病毒循环

-母猪配种妊娠

-分娩和断奶Farrowing and weaning：分娩必须在隔离区域。断奶需要5-7日龄。断奶仔猪需要尽快移动到场外保育舍以免交叉感染。

-场外保育阶段和检测：保育舍需要做到全进全出。周期性地至少放入一个哨兵猪进行监测。这些猪需要至少呆在一起12周让母源抗体消减。在这个时候，所有动物都进行ELISA检测，如果哨兵猪和其他猪都是抗体阴性，那么就证明猪群已经是阴性了（Torremorell et al,20000）。

5.封群和轮替

封群和轮替已经成为广泛使用的从母猪群净化蓝耳病毒的方法（Corzo et al,2010)。这一方法包括了停止引入后备母猪公猪至少6个月，再加上逐步清除抗体阳性动物。封群带来的是整体健康和生产的提升（DuBois,2007)。使用封群的方法进行蓝耳净化包含了以下几个步骤：

5.1猪群扩充

猪群扩充指的是在封群之前引入不同年龄的后备动物。这样在封群之后8个月就不会再有新的蓝耳阴性猪引入种猪群。这些后辈需要和种猪群在一起，在同一天暴露。（deBuse,2007)。另外一个可选的方案保持种猪群的目标就是让阴性后备猪呆在场外舍。当场内用来囤积后备母猪的空间不足的时候，这种场外配种是一个好的可选方案。（Torremorell et al,2003)。当封群不成功的时候，必须要在场外再找个地方囤积阴性的后备，因为一旦怀孕的阴性后备进入后导致母猪群的繁殖问题，以及增加下游的呼吸道疾病。（Charbonneau,2010)。

用活病毒暴露

一旦封群后，母猪使用同源的野毒或者弱毒疫苗进行有计划的活病毒暴露。活病毒暴露使得猪群保持均一的免疫了，并且可以消除亚群。让所有动物在同一天暴露的目的是确保整个群体被暴露并产生有效的免疫应答若不使用活病毒暴露的话，存在的阴性亚群会增加所需的从散毒到停止的时间。排毒时间增加是因为病毒持续在整个猪群扩散，虽然持续感染动物只会暂时存在，但是如果猪群没有易感动物存在，那么病毒在猪群内循环的能力就会下降，并且得到清除（Corzo et al,2010)。

5.2引入阴性后备动物

在引入抗体阴性后备母猪之前需要在一个隔离的地方放一些哨兵动物和在场的抗体阳性动物一起，以此验证现在场里的动物都不再排毒了。（Torremorell et al,2003)。在引进阴性后备是，要非常小心，要进行衡量，因为刚刚前面进去后备还是用过活毒暴露的，那些后备母猪可能还具有感染性。（Torremorell et al,2003)

5.3淘汰抗体阳性母猪

一旦抗体阴性的后备引入猪群，就要根据生产计划逐步的淘汰以前进行过活毒暴露的抗体阳性母猪。如果想尽快达到蓝耳阴性场，那么可以加快淘汰抗体阳性母猪（Dufresne,2003；orremorell et al,2003)。

5.4从生长猪群清除蓝耳病毒

在进行生长猪群的蓝耳病毒净化之前要确保猪群流动是阴性的。这一步骤最保育舍清群，然后进行彻底的清洗消毒，然后再屯入蓝耳病毒阴性猪（Dufresne,2003；orremorell et al,2003)。

5.4净化后监测

在整个过程中，目前的血清学检测是必须的：在引入阴性后备之前需要有哨兵猪，血清抗体阴性后备母猪和生长猪。要每月安排生成流程进行监测，确保有足够的统一学意义说明是否还存在感染（Torremorell et al,2003)。

蓝耳控制和净化工具包

监测工具

通过检测来制定成功的蓝耳净化

已经证明可以从一个猪群里面清除蓝耳病毒。但是，一个区域如果没有准确定义那么就不知道到底有没有成功净化蓝耳病毒。猪群比较低的蓝耳病毒流行率使得准确检测和确定蓝耳状态阴性比较困难（Morrison,2009）。

1.检测：

1.1 ELISA

之前的研究表明在一个绝对阴性的群体，蓝耳ELISA的敏感为96.6%，特异性100%（Choet al，1996）。但是取决于猪场情况和采样动物的日龄结果可能有所差异。单个反应（在一堆阴性动物中的一份阳性样本）应该通过其他方法来确认是否阴性，例如间接免疫荧光，蓝耳PCR可以用来表明是最近发生的感染(Charbonneau,2010)。另外一种确认蓝耳阴性的状态是对某个动物重复采样或者对其同一圈的其他猪（至少10天以后），以确保没有血清阳转或者散毒给其他动物。

另外一个需要解释的是抗体使感染产生的还是母源抗体。需要对那么看清来抗体水平比较低的动物采样。这些信号不一定是假阳性，但是他们不一定反应的是目前或者现在的感染。那么解决这个问题就是对尽量大的育肥猪采样，他们母源抗体基本下降了，必要时对哨兵动物采样。另外需要注意的是IFA和PCR检测都是毒株特异性的。

1.2 PCR

要记住设计PCR检测程序的时候评估蓝耳病毒的流行率是至关重要的，可以确保很高的敏感性和特异性。一个PCR阴性的结果并不能保证单个动物没有被感染。

1.2.1 血清

虽然有很多PCR检测的方法，他们都有很高的特异性和敏感性。对于定量PCR单个样本检测，敏感性是95.5%，特异性是100%，用的是SYBR Green RT- PCR (Martinez e t  a l,2008).因此各个实验室用PCR出现假阳性和假阴性都千差万别（Truyen e t  a l,2006;  Zimmerman,2008 ）。通常会将血清样本混样后送到实验室进行检测，因外PCR检测太贵了。混样之后会降低敏感性，5：1混样降低到84.5%，10：1混样降低到82%（Carmichael e t  a l，2010）。混样的特异性分别是5：1为99%，10：1为97.7%。但是，当方法的到，一些猪群的5：1和10：1的检测敏感性和特异性也可以在100%。

1.2.2口腔液

目前又报道一种新的蓝耳检测方法（Zimmerman  et  a l，2007;Weeks e t  a l,2010）。口腔液收集后可以做PCR检测。研究表明口腔液可以代替血液进行蓝耳病毒检测。

2.使用哨兵猪

通常在蓝耳净化项目中使用抗体阴性动物来测试是否猪群还有病毒循环。哨兵动物需要跟厂里的其他动物关在一个场外的隔离佘进行测试，测试猪群是否还在排毒（Torremorell e t  a l，2003）。哨兵动物也可以跟阳性母猪的后代关在一起，以确认后代是否是阴性。在这个方法里面，哨兵猪跟断奶猪关在一起（Torremorell e t  a l，2000）。哨兵动物需要平均分布在抗体阳性猪群内，比例大概是一圈保育猪一头哨兵动物（Torremorell e t  a l，2002）。在一些方法中，哨兵动物先在入群之前做测抗体，然后入群以后每个月测一次，哨兵动物转走4周以上再测下哨兵动物的抗体（Torremorell e t  a l，2000）。在另外一些程序中，哨兵动物会持续在猪群里面待上2个月，每周检测直到转走（Alfonso ET a l，2005）。只有猪群已经非常肯定是不会排毒了才将哨兵动物放进去。

3.蓝耳净化的监测程序MonitoringProtocols for PRRSV Elimination

3.1动物选择：

为了更好的检测蓝耳病毒循环，要选择感染风险高的：哨兵猪，阴性后背，淘汰后背和母猪，病猪，断奶猪（当使用PCR检测），保育后期和育肥后期（当使用蓝耳病毒抗体检测）（Morrison，2009; Torremorell  e t  al,2002;  Torremorell  e t  al,2003; Desrosiers and Boutin,2002,Batista e t  a l,2002;Ruen,2003）.

3.2采样数量

检测蓝耳病毒循环所需的采样数量取决于目标置信区间，所用的实验方法的敏感性和特异性，以及选择猪群的最小流行率。

举个蓝耳净化检测程序的例子，Alfonso等报道称按照置信区间95%，估计流行率5-10%，至少检出一个阳性样本的统计所需采样数量（Alfonso e t  a l，2005）。

当猪群的流行率下降的时候，还要维持95%的置信区间，检出病毒循环的采样数量会增加（Morrison，2009）。当然，当猪群流行率下降，采样数上升，假阳性的比率也会上升。用系列检测是最好的从低流行率群体中检测和确认阳性样本（Morrison，2009）。要确定随机采样的样本数量，可以使用统计差数表（附件3）（Morrison，2009 Ramirez，2008）。

附件1：MCREBEL 限制寄养操作规程（McCaw，2006）

1.不要在出生24小时后寄养Don t crossfoster piglets after 24 hours of age

a. 将不够奶头的小猪转走不要为了追求整齐度和一窝的性别而寄养

b. 当多余的或者大的小猪必须转走，需要转到大小一致奶水足够的那窝母猪那

c. 确保最小的猪奶头优先级别最小，要么当小猪比较多的时候出生就转走

MAXIMIZE THE NUMBER OF PIGLETS REMAINANG ON THEIRBIRTH MOTHER! 尽量让小猪留在自己母猪的身边或者最大程度上让小猪待在吃初入母猪身边

2.Don’t move pigletsbetween rooms 不要在不同房间之间移动小猪

a.严格全进全出

THE LITTER IS NOW THE ALL IN-ALL OUT UNIT! 一窝为一个单位全进全出

3.将病猪，很弱的猪，体况不好的猪转移走

a.将体重太小，养不活，体况不好的断奶猪卖掉或者清除

b.一些小猪治疗后不见好转，清除掉

c.将很消瘦，虚弱，跛腿，体重轻，被毛长，慢性病猪清除掉 断奶的治疗弱仔远离健康猪

4.护理工作可以让小猪的存活率和生产成绩最大化

a.将大小不一的小猪分别入圈

b.将最小的猪放在温暖，没有贼风的地方

c.每天人工饲喂最小的猪4次，连续5天

d.转换频率基于体重而不是房间

e.使用加热灯或者软塑料垫给最小的猪

f.将圈内的一个饮水器降低高度，最初24小时拧开一点，让小猪能够找到水

如果奶头不够，再怎么样也无法断奶出更高质量的仔猪

要想断奶仔猪的数量足够多，就需要得在后背选留和母猪淘汰的时候就关注有效母猪奶头数

附件2：感染蓝耳后的时间轴（McCaw.2006）

以下所例的时间轴是单个猪清除蓝耳病毒的多个事件，要把蓝耳病毒从体内清除出去需要花很多时间建立完全免疫力

感染后的时间

10—30     病毒血症（从血液可以分离到病毒），强烈抗体反应

20—30     最早检测到中和抗体

60+        血液中的中和抗体达到顶峰

100—150   扁桃体/淋巴结变成蓝耳病毒阴性（在保育舍发生感染），许多猪变成蓝耳抗体阴性（＜0.4S/P ratio）血清中和抗体还是阳性

150++      扁桃体/淋巴结变成蓝耳病毒阴性

200        封群所需时间

蓝耳控制和净化工具

惠通猪医院  安玉甫整理

资料来源：Project funding kindly provided by Canadian Swine Health Board

内容

猪繁殖与呼吸综合征的控制方案

1.猪繁殖和呼吸综合征免疫建立工具

1.1同源VS异源免疫

1.2商品化弱毒活疫苗

1.2.1后备母猪/公猪免疫

1.2.2种猪群免疫

1.2.3生长猪群免疫

1.3蓝耳病活毒暴露

1.3.1原理和原则

1.3.2用以活毒暴露的具有感染性蓝耳田间野毒来源

1.3.3避免活毒暴露的副作用

1.3.4不同生产阶段的暴露策略

1.3.4.1后备母猪/公猪驯化

1.3.4.1.1后备动物选留

1.3.4.1.2驯化过程

1.3.4.1.3驯化地点

1.3.4.1.4驯化流动/连续式VS全进全出

1.3.4.1.5毒株监测

1.3.4.2种猪群暴露

1.3.4.3生长猪群暴露

2.降低蓝耳病毒感染量的工具

2.1McRebel

2.2生物安全

2.3清洁卫生

蓝耳净化程序

1.清群

1.1全群清群/重建群

1.2分娩清群

1.3保育或者育肥清群/重建群

1.4保育或者育肥部分清群/重建群

2.检测移除

3.断奶移除

4.从蓝耳病毒阳性母猪生产出阴性仔猪

5.封群和轮替

蓝耳监测工具

1.监测

1.1ELISA

1.2PCR

2.使用哨兵猪

3.蓝耳病毒净化的监测程序

3.1动物选留

3.2采样数量

简介

蓝耳控制和净化工具包是给兽医们提供的用以从生产阶段或者单一猪群控制和净化猪繁殖和呼吸综合征病毒的一个资源。工具包是基于目前已知的科学研究成果，田间试验和猪场采用过的方案。知识是不断进步的，读者需要与时俱进，不断跟上新的信息。

放眼北美乃至全球，许多猪场都通过不同的方案达到了单个猪群蓝耳病毒的净化。在文献中，一些作者报道称从猪群净化蓝耳病毒的成功率高达91%—100%，尤其是种猪群。

本工具包分为三个主要部分：

1、蓝耳控制方案：

第一个部分是“蓝耳免疫力的建立工具”。这些工具用来在猪群内建立有保护力的免疫力。当所有猪群都有保护力的免疫，那么蓝耳病毒将不再复制，将能被净化。

第二个部分是“降低蓝耳感染量的工具”，列举了用来降低能够感染易感动物的病毒数量的管理措施。环境中的病毒变少了就可以减少感染动物，降低猪群蓝耳病流行率，之后就可以启动蓝耳净化方案。

2、蓝耳净化方案：介绍了许多来净化蓝耳病毒的方案。每种方案需要免疫力最大化，感染水平最小化，并且加强保护力。因此，这些方案的成功都依赖于有效地使用免疫力建立和感染量降低工具。

3、蓝耳监测工具：提供了如何检测蓝耳病毒感染和监测蓝耳病毒净化方案成功与否的技术路线。

猪繁殖与呼吸综合征病毒控制方案

1.猪繁殖与呼吸综合征免疫建立工具

1.1同源VS异源免疫力

同源免疫力指的是猪群免疫系统产生的免疫保护力，是针对之前暴露过的蓝耳病毒。通常同源免疫力要比异源的更有效。蓝耳病毒暴露后产生的同源免疫保护力可能将持续动物的一生。最近的研究也表明对于蓝耳病毒，同源保护力也不是100%的有效，当动物再次感染同一毒株病毒时，依然会产生病毒血症感染。尽管如此，同源免疫保护还是要比异源更有效。

异源免疫力指的是猪群免疫系统产生的免疫保护力是针对猪群之前没有暴露过的蓝耳病毒。异源保护能力取决于不同的感染毒株差异比较大。异源保护力，包括弱毒活疫苗产生的保护力被证明甚至对高致病性的毒株有效。能够保护与免疫毒株不一样的蓝耳病毒的感染，我们称为“交叉保护”。交叉保护某种程度上可能与两个毒株基因相似性有关。至今，究竟编码结构蛋白的哪个基因主要刺激免疫依然不清楚。

1.2商品化蓝耳弱毒疫苗

在蓝耳控制和净化方案中使用商品化的蓝耳弱毒活疫苗已经取得了不同程度的成功。在使用田间野毒进行攻毒保护的实验中，蓝耳弱毒活疫苗通常可以有效地降低临床发病，但是通常防止病毒感染的能力不佳。蓝耳弱毒活疫苗的交叉保护力也因不同的猪场有很大的差异。在母猪群上面，蓝耳弱毒疫苗的异源保护很难像自然同源保护那样维持免疫保护力。蓝耳弱毒疫苗的ORF5基因与感染毒株基因的相似性并不能很好的反映疫苗的有效性。但是阴性猪免疫弱毒疫苗会排毒，再次免疫后不会传播。阴性猪群不推荐使用蓝耳弱毒疫苗，因为可能存在排毒，并且在检测的时候会带来困扰，因为很难区分是野毒还是疫苗毒。

1.2.1后备母猪/公猪免疫

后备母猪和公猪如果在进入猪群之前没有免疫在种猪群循环着的蓝耳病毒，会存在感染的风险。后备如果感染了蓝耳病毒再进入种猪群会散毒。怀孕的后备特别是怀孕的后期感染蓝耳病毒会导致蓝耳病毒垂直传播给仔猪。如果种猪群内部有蓝耳野毒在循环，后备母猪和公猪在进入种猪群前使用商品化的蓝耳弱毒苗有助于降低感染的可能性和排毒。这种降低蓝耳病的风险也是某种意义上疫苗对于场内循环野毒的一种交叉保护。后备免疫商品化的蓝耳弱毒疫苗的结果也有所差异，因为蓝耳疫苗的产生的免疫力不能控制每一种蓝耳病毒株。

1.2.2种猪群免疫

商品化蓝耳弱毒疫苗可以用来对整个母猪群提供群体性暴露。结果是有差异的，因为疫苗产生的免疫力控制蓝耳病的能力不都是一样的。研究表明，母猪群首先在首免一个月以后进行二免有助于避免疫苗毒和田间野毒从哺乳母猪向仔猪的散毒。如果母猪正是怀孕的第三个阶段（66—114天），首次疫苗免疫时间可以推迟到分娩后7天，30天后再进行二免、同时进行普免可以有效的让所有的易感动物在同一时间产生免疫力。当场内的所有母猪进行了两次疫苗免疫，就可以封群，当猪群流动再得到控制，母猪群可以清除掉蓝耳感染，因为猪场里面已经没有易感动物发生急性感染和蓝耳病毒的散毒。针对异源蓝耳感染的保护程度和长度因为疫苗和野毒间病原的相关性而差异显著。

1.2.3生长猪群免疫

商品化的蓝耳弱毒疫苗可用于生长猪群的普免。生长猪群免疫商品化的蓝耳弱毒疫苗的结果也有所差异，因为蓝耳疫苗的产生的免疫力不能控制每一种蓝耳病毒株。生长猪群免疫时间最好是等到母源抗体下降以后，因为母源抗体可能会影响到疫苗的效果。因为不同的猪场和管理模式，蓝耳病毒的循环时间和猪群的感染时间会不尽相同，因此提供一个通用的蓝耳免疫程序很难。商品化蓝耳弱毒疫苗产生的保护力应答缓慢，猪群需要在野毒感染之前免疫疫苗。Opriessnig等报道称如果生长猪群在野毒感染前5周使用蓝耳弱毒疫苗可以产生异源免疫保护。这使得猪群在感染之前有足够的时间建立免疫保护。在首免后一个月加强免疫一次可以提高交叉保护。攻毒试验已经证明商品化蓝耳弱毒疫苗可以有效地降低异源毒株攻毒后的影响，在田间试验中也证明了蓝耳疫苗使用后的经济效益产出比投入大。在生长猪群已经验证过，猪群在感染非同源的野毒的情况下，使用蓝耳弱毒疫苗能够有效果。在感染后一周使用商品化蓝耳弱毒疫苗，疫苗可以有效地降低病毒血症的持续时间。蓝耳弱毒疫苗可以在部分清群的时候用来降低留在圈舍内大猪的排毒风险。现已证明，在一个蓝耳阳性的生长猪群使用蓝耳弱毒疫苗进行普免，使用单一的猪群流动，结合部分清群的方法，可以成功地清除蓝耳病毒。

1.3蓝耳田间野毒暴露

1.3.1原理和原则Rationale and principles

使用田间野毒进行暴露的做法与疫苗科学一样历史悠久。这项技术也不是什么新技术，已经被用于很多其他病毒性疾病的防控，例如传染性胃肠炎（Moxley et al，1993）。它的原理是基于同源免疫保护要比异源的更好（Lager et al，1999）。田间野毒的普免要确保所有的动物100%都暴露于某特定的蓝耳田间野毒，以确保均一化地抗体阳型猪群，以免产生易感动物亚群（Ruen et al，2007；FitzSimmons，2005）。重要的是要确保用来对整个猪群进行暴露的蓝耳毒株真的是是取自于特定场内。例如，如果一个母猪群需要暴露与某个田间野毒，那么这个野毒需要提取与母猪群而不是场外的某个保育舍（FitzSimmons，2005），要不然会引入新的病毒循环。依循这一原则可以降低误引入一个新的场外野毒的机会。

决定对阴性动物进行田间野毒暴露通常会引起临床症状，严重程度取决于使用的蓝耳毒株的毒力（FitzSimmons，2005）。对许多单个动物而言，感染后的严重程度无异于一次自然的田间野毒感染。通过使用田间野毒暴露我们可以影响感染时间，然后能够影响暴露动物的繁殖状态，影响圈舍内的散毒进程。

使用田间野毒进行暴露可能会带来在猪群散播其他病原的风险，以及其他问题都应当被考虑进去（Corzo et al，2010；O’Rourke，2005）。许多报道的母猪繁殖障碍的问题都是因为猪群暴露了田间野毒后引起的

（Bruner，2007）。这个作者还报道过，即使怀孕母猪第二次暴露于同一个蓝耳田间野毒依然会引起繁殖损失。使用猪场内的血清接种，在实验室制作血清的时候有可能交叉感染实验室的其他用于接种的血清病毒。

蓝耳田间野毒暴露可用于：

后备母猪和公猪驯化（Hill et al，2004；Batista and Dee，2002；Batistaet al，2002）

在急性发病时或这部分猪群暴露（Hill et al，2004；Ruan，2003）

偶尔出生仔猪会有病毒血症是全部或者部分猪群暴露（Pittman，2007；Ruen et al，2007）

1.3.2活病毒暴露所用的感染性蓝耳病毒来源

血清注射：

猪群所特有的蓝耳病毒是来自与收集病毒血症的病猪血清（FitzSimmons，2005）。血清收集程序，血清储藏和猪场现场蓝耳活病毒的接种程序都已经公开发表（Hill et al，2004；Pugh et al，2005；FitzSimmons，2005；Ruen，2003）。如果人工可以严格执行程序，血清注射的好处是确保所有动物100%的暴露。通常来说，出生弱仔或者产房里面有临床症状的猪病毒含量是最高的（Ruen，2003）。有效的感染剂量需要每头猪7个病毒粒子到247个病毒粒子，这可以确保暴露猪群抗体转阳（Pugh et al，2005）。尽管同源活毒接种可以提供保护防止蓝耳病毒的增殖，但是最近的实验表明并不能防止病毒垂直传播给仔猪（Murtaugh and Wagner，2010）。

组织返饲：

In the scientific literature this methoddoes not seem as widely used and reported as serum injection

猪群所特有的蓝耳病毒是来自于收集感染蓝耳病毒猪的组织（Desrosiers and Boutin，2002）。然后将这些组织返饲给需要建立免疫力的猪群（Dufresne，2003）。这种蓝耳暴露方法的缺陷在于不能完全可靠，因为很难定量所用材料中活病毒的均一性（Hill et al，2004）。在科学文献中，这一方法没有雪情节中应用广泛。

排毒猪：

确定正在排出蓝耳病毒，这些病毒是需要感染猪群所特有的。然后将这些排毒猪与需要建立免疫力的猪关在一起，保证它们可以鼻对鼻接触。这一方法需要保证排出足够量的病毒，而且猪群之间可以直接接触，因此这种方法也不完全可靠（Hill et al，2004）。当母猪群急性发病，流产的母猪正在散毒，可以在整个母猪舍移动该母猪來使得其他母猪被暴露（Desrosiers and Boutin，2002）。通常，小猪比大猪感染的时间更长，并且更易产生持续性感染（Batista and Dee，2002；Ruen，2003）。因此让后备母猪和公猪接触正在排毒的小猪更为有效。更为可靠的做法是让抗阴性的猪暴露于接种过流行性蓝耳野毒的6周龄小猪。

1.3.3降低活毒暴露的副作用：

执意让猪群暴露于蓝耳田间野毒会引起临床副作用，死亡或者降低母猪群的生产效率（FitzSimmons，2005：Bruner，2007）。对那些准备使用活毒暴露方法的人来说可能会存在伦理道德方面的为难情况。但是成功防控或者净化蓝耳病毒的产出可以打消人们的这种顾虑（FitzSimmons，2005）。这里有一些工具可以用来降低田间野毒暴露的副作用。退热药物例如乙酰水杨酸和替米考星这些抗生素可以使得动物更为舒服，并且可以降低死亡繁殖障碍。不幸的是，结果往往变化很大（Misener et al，2006；Nemechek et al，2009；Batistaet al，2009；Fano et al，2005；Pittman，2007）。

1.3.4不同生产阶段的暴露策略

1.3.4.1驯化后后备母猪和公猪

1.3.4.1.1后备动物选留

蓝耳控制或者净化得以成功的基础是确保从种猪场引入后背来源不会引起新的蓝耳病毒或者再次引入已经存在的蓝耳病毒。如果是从场外其他猪场引种，强烈建议从那些抗原体阴性动物的种猪场引种（FitzSimmons，2005）。种猪场必须向老板和猪场兽医提供详细的足够量动物的周期监测报告，以猪场疾病控制基本框架和生物安全评估报告，以提供对于种猪场状态足够的信心。动物运输的生物安全也需要包括在评估在内。这也适用于所有公猪精液的来源场。

1.3.4.1.2 驯化过程

驯化过程包括三个阶段：暴露前期，暴露阶段和暴露康复阶段（Dee，2004）。取决于猪场种猪群的状态和采用的驯化方法，每个猪群驯化的时间长度都不一样。

驯化前期：

暴露前期的目的是提供机会确认引入动物的蓝耳病毒状态。为了准确的评估引种种猪场最近的蓝而感染，运输期间的感染，后背动物在抵场后14天内采样。如果需要早于14天了解蓝耳状态那么可以结合使用血清学和蓝耳病毒PCR采样。如果后背动物是在抵场14天以前在来源种猪场发生感染那么后背动物的抗体会是阳性。抵场14天以内血清学的检测会告诉我们是发生在种猪场。PCR检测可以告诉我们存在病毒血症可能是在种猪场感染也有可能在之后。抵场后14天以内进行检测可以让我们有机会处理这些感染的后背动物（Charbonneau，2010）。

暴露期间：根据采用技术的不同，暴露的时间长短不一。血清注射暴露1天就可以完成，弱毒疫苗免疫如果免疫俩次间隔一个月那么暴露的时间需要1个月，如果使用阳性动物混样感染暴露则需要长达60天（Dee，2004；FitzSimmons，2005；Gillespie and Carroll，2003）。

暴露康复时期：后备母猪和公猪的驯化程序是确保后背母猪和公猪在即将进入或者进入种猪群后不在排毒。如何需要进行蓝耳驯化，在后背母猪和公猪暴露病毒后至少隔离90天的时间再进入种猪群（Batista and Dee，2002）。这将使得动物在进入种猪群之前停止排毒。当暴露后的隔离时间越长，后背猪群进入种猪群排毒的风险越小（FitzSimmons，2005）。田间通常在移动动物进入母猪群之前使用PCR检测。需牢记，蓝耳病毒PCR检测阳性说明有单个猪只正在排毒。蓝耳病毒PCR检测为阴性也不能保证单个动物不具有感染性。

1.3.4.1.3 驯化场地

生长猪群场内驯化：购买回来的断奶猪或者是公猪可能被放入既有的保育或者生长育肥舍，5--45公斤的生长阶段（Batista and Pijoan，2000）。只当生长猪群有活跃和连续的蓝耳病毒循环才采用驯化的方法。之前提过，这一驯化的方法同时取决于足够量的散播病毒量和猪之间鼻对鼻的直接接触，因此不完全可靠（Hill et al，2004）。当后背母猪或者公猪没有生产免疫力，可能会加剧猪群爆发蓝耳的风险。如果在场外的保育舍或者生长育肥舍循环的蓝耳毒株跟母猪群的不一样，那么母猪群会有引入新毒株的风险（FitzSimmons，2005）。这种蓝耳驯化的方法最好是一个短期的方案，最终目标是用来生长猪群清除蓝耳病毒循环。

封闭猪群的场内驯化地点:

在一个蓝耳病毒阳性的封闭式猪场，自繁自养后备母猪，这些后辈偶尔也会有蓝耳病毒在内部循环。后背母猪和公猪需要适应场内目前存在的野毒，但是进入种猪群之前不能排毒（Dee，2004）。需要有一个场内的隔离设施和一套蓝耳驯化的程序确保进行蓝耳病毒的暴露，但是不给其余猪群增加暴露于更多量蓝耳病毒的风险。若场内的驯化舍建造的很近或者直接挨着，那么有可能通过空气将驯化舍的病毒传播到其以外的主要猪舍，必须要让隔离/驯化舍与主要猪舍之间做到生物安全上的完全隔离（Torremorell et al，2000）。至少从驯化舍到其他猪舍要换衣服换鞋子和洗手。在驯化舍内建议做到全进全出，这样病毒变异，病毒基因漂移的几率会降到最低。

场外训化设施：

场外的后备母猪驯化场地最大程度上可以避免从后备驯化舍向其他猪舍通过空气传播病毒，而且可以减少人员流动，污染也可以得到控制。这对于一些容易通过空气传播的病毒很重要。在最近的研究中，已经证明空气可以携带感染性蓝耳病毒例子传播9公里远（Otake er al,)。场外后备驯化舍的生物安全要达到甚至超过母猪场的标准。（FitzSimmons，2005）。场外的驯化舍如果跟其他的猪场太近的话很容易通过苍蝇、蚊子和空气等传播其他蓝耳病毒到后备动物驯化舍（Zimmerman，2007）。空气过滤的安装有助于降低空气传播感染的风险（Reicks，2010）。使用场外的后备母猪驯化舍，驯化舍和猪场之间的运输对于有些猪场也是一种风险。

1.3.4.1.4驯化流动/连续性VS全进全出：

有一些猪场使用连续性流动的驯化单元来维持驯化用的蓝耳病毒来源。这种猪群流动的模式会带来蓝耳病毒持续的循环和复制，增加蓝耳病毒变异的可能性。在某种程度上，会促使驯化社的蓝耳病毒与母猪群有显著差异，而这一新毒株有可能再进入种猪群。种猪群已有的对于现有毒株的免疫力可能没法对这一新毒株有充分的交叉保护力。连续性的流动不是驯化舍的第一选择，因为它会导致后备母猪的健康收到伤害，蓝耳毒株的“漂移”会增加（Roberts，2002）。就像之前提到的，后备驯化舍建议采用全进全出的猪群流动。

1.3.4.1.5毒株检测：

在一个有蓝耳病毒循环的阳型场，田间通常不断更新用于暴露的蓝耳毒株。这样做的目的是即使猪群的蓝耳病毒发生了变化，但是种猪群能够对其保持免疫力。之一方法需要定期再次分离猪场内的蓝耳病毒，测序比对然后在暴露程序中更新毒株（Torrison et al，2003）。这一做法是帮助控制随着时间推移因为蓝耳毒株漂移而不能在场内净化蓝耳病毒所带来的影响。

1.3.4.2种猪群暴露

所有母猪和公猪田间蓝耳野毒的暴露是用来确保所有母猪和公猪在同一时间被暴露并且都同时产生免疫力（Corzo et al，2010）。这位从种猪净化蓝耳病毒提供了一个绝佳的机会。在某些情况下，可以购买一定数量的后备母猪和公猪然后对其暴露猪场内特有的蓝耳病毒株。然后种猪群至少封群180天（Alfonso et al，2005；Schaefer and Morrison，2007；DuBOIS,2007).在大多数案例力，封群的时间更长（Torremorell et al，2003；Schaefer and Morrison，2007）。更为广泛接受的封群时间是200天（Yeske，2009）。对怀孕母猪暴露蓝耳田间野毒可能引起母猪死亡或者繁殖问题例如流产、死胎、或者在怀孕火气将病毒垂直传播给仔猪（Bruner，2007）。仔猪在怀孕后期于子宫内发生蓝耳病感染会哺乳仔猪、保育猪和育肥猪的发病风险（Bruner，2007）。

1.3.4.3生长猪群暴露

所有生长猪群田间蓝耳野毒的暴露是用来确保所有生长猪群在同意时间被暴露并且都同时产生免疫力（Pittman，2007）。这将使得免疫力更均一，因此让动物转入连续流动的保育和育肥舍之前减少排毒。特意的用田间蓝耳野毒进行暴露并不是很好选择，因为会引起生产损失和临床发病（Dufresne，2003）。如果长期目标是向从猪场净化病毒，那么使用毒力较弱的蓝耳毒株进行暴露是可以接受的。

2.降低蓝耳病毒风险的管理措施

在进行蓝耳净化之前需要确保最好的管理措施。这包括了内部和外部生物安全，消毒卫生和管理程序（Dufresne，2003；Torremorell et al，2000；Zimmerman，2007；McCaw，1995）。关注细节可以增加成功率。

降低蓝耳风险的工具是指通过最好的管理手段，降低环境中的蓝耳病毒进而减少其去感染猪群。将病毒粒子的水平降低到感染计量以下是确保病毒在猪场内死去。

2.1 McREBEL™PRRS

McREBEL™PRRS是一系列的蓝耳管理措施。McREBEL™指的是Mangement Changes to Reduce Exposure toEliminate Losses(McCaw，1995）。北卡州立大学的Monte McCaw 开发命名了这一程序。这一程序的首要目标是降低继发细菌感染，但是对降低蓝耳病毒的传播有效。McREBEL™PRRS 方案简单，低成本使用，确实可以有效地降低保育舍和产房的损失，种猪群也可以得到稳定。

方案的难点在于猪场的员工很难抗拒产后24小时寄养的诱惑，或者对小猪进行安乐死是一个问题。方案需要改变才能获得成功。

McREBEL™PRRS方案包括了控制寄养时间，不同房间之间母猪和小猪的移动，使用代乳母猪，小猪安乐死，小猪处理程序，以及代乳母猪的流动（McCaw，1995）。

持续遵守McREBEL™PRRS原则非常重要。这是达到母猪群蓝耳净化的重要措施之一。McREBEL™PRRS程序应该实施到检测证明已经净化了蓝耳病毒（Polson et al，2010）。推荐的McREBEL™PRRS限制寄养生产流程见附件

1（McCaw，2006）。

2.2生物安全

内部生物安全是指在同一群体内控制病毒从已感动物向未感动物移动。这一原则可以在蓝耳爆发后很早的时候使用，一次来让未感断奶猪的数量最大化。这一原则也被用来在蓝耳爆发后降低场内病毒/内部生产的很多程序跟外部生物安全一样，但是关注点是在猪场内部。内部生物安全工具可以用来降低猪群内的感染率。比如控制能够将蓝耳病毒从一头猪带到另一头猪的工具或者物品，具体有针头、剪牙、索手套、扫帚等。内部生物安全涵盖了猪群流动例如停止移动母猪，单一的猪群流动。完全生物转换区域，例如进门的“丹麦式入口”。全进全出是内部生物安全的一个基本组成部分（Pitkin et al）。

蓝耳感染时的关键内部生物安全建议（Charbonneau,2007）

• 停止移动蓝耳阳型猪到阴性保育猪群

• 种猪群在急性蓝耳爆发的时候停止移动母猪

• 隔离流产母猪

• 流产母猪待的限位栏或者圈进行彻底的清洗

• 每个母猪一个针头

• 每一窝一个针头

• 每一窝一个一次性手套

• 在处理完正在排毒的病猪后要把鞋子和手洗干净，换工作服

• 处理粪便和饲料的时候使用单独的铲子，扫帚或者刮板

• 停止母猪产前返饲

• 通道使用石灰或者其他干制消毒剂

• 准备两套仔猪处理工具，以提高消毒剂接触时间

• 控制不同房间的小料车

• 仔猪处理小车进行消毒或者停止使用仔猪处理小车

• 为生长猪群配备有效的病猪栏或者康复栏

• Euthanize animals with poor prospect ofrecovery on a timely basis.Take these pigs to a remote area of the barn so thatblood from the euthanasia process does not infect susceptible pigs.将虚弱，康复渺茫的动物安乐死掉。将这些猪转移到离猪圈较远的地方，以免安乐死的过程中的血再次感染易感猪群。

• 确保单一的猪群流动，猪只向比他更小的猪群流动或者关在病猪周围。治疗康复或者治疗后安乐死。

• 每4周批次分娩，确保产房的全进全出(Bonneau,2010)

• 停止配种三周也有好处（Bonneau，2010）

• 空栏，清洁，消毒存有活蓝耳病毒的冰箱。

外部生物安全是指控新的病原进入到猪群。有许多防止主群感染的程序。感染性的蓝耳病毒可以通过控制传播非常远的距离，现在很多猪群密度比较大的地区也越来越流行使用空气过滤的方法来做为一个有效的外部生物安全措施（Otake et al，2010；Reicks，2010）。生物安全的好坏拒绝于整个生物安全中的短板，因此单一的空气过滤不能构成一个全面的方案，需要整个外部或者周边的生物安全体系都天衣无缝。

想进一步了解蓝耳生物安全规程，可以参考AASV蓝耳生物安全手册http://ww.aasv.org/aasv/PRRSVBiosecurityManual.pdf

2.3卫生

清洁卫生主要用于不同批次的猪，以达到从猪舍的特定位置清除掉蓝耳病毒。需要彻底清除所有的有机物，包括粪便，尿液，饲料，垫料和体液，并进行高压冲洗。建议清洗的时候使用一点洗涤剂，这样可以确保生物膜被清除掉。

一旦清洗干净，猪圈要进行彻底有效的消毒。有些产品已经证明是可以有效的杀死蓝耳病毒，包括季铵盐+戊二醛混合物和改良的过一硫酸氢钾。这些产品的使用浓度分别是0.8%和1%。所有表面覆盖消毒剂后保证接触时间至少2小时。在冬季，要消毒的地面需加热到10摄氏度以上，以确保消毒剂发挥效果（Schneide，2010）。

在清洗后，栏舍必须有足够的空栏时间以确保干燥。让整个房间干燥是清洗消毒过程中最重要的一个环节，只有这样才能确保灭杀病毒。

要想进一步了解蓝耳消毒，可以参考美国AASV生物安全手册，http://www.aasv.org/aasv/PRRSVBiosecurityManual.pdf

蓝耳进化方案

1.清群

1.1全部清群/重建群

这一方法包括移除场内的所有的种猪和/或者生长猪群，对猪舍消毒，然后引入蓝耳阴性猪（Corzo et al,2010)。

当猪场有很多的疾病问题，并且已经没有行之有效方法可以成功，才采用清群/重建群的方法。那些猪场里有很多蓝耳毒株，又有很多其他疾病，这样猪场就最适合做清群/重建群（Roberts,2002;Corzo et al,2010)。猪群若想快速改良品种基因也可以使用此方法。但是实施此方案的前提是兽医已经明确找到了爆发蓝耳的病毒源头，评估了风险因素，要不然盲目的重建不久后还会爆发蓝耳（DeBuse,2007），另外，要确保重建群提供的后备母猪都是蓝耳抗体阴性的（DeBuse,2007；Hill et al,2004）。

读者请注意：Paul Yeske 有一篇非常好的总结，阐述了对比封群发，清群/重建群的经济效益（Yeske,2010）

1.2产房清群

一旦种猪群产生了针对猪场特定蓝耳病毒的免疫了，那么主要存在病毒循环的是小猪。将产房清空将清除在仔猪群内的病毒循环。这也有利于实施有效的清洗消毒程序。将产房清空的时间很重要，必须要在产出病毒血症之前（Misener,2010）。

1.3保育和/或者育肥清群和重建群

一旦断奶仔猪的是阴性的，可以将保育和育肥清群，然后屯入蓝耳阴性猪群（Ddd and Joo,1997）。这一方法需要在引入蓝耳阴性仔猪之前彻底清洁和消毒栏舍。（Dufresne,2003;Torremorell et al,2003）。

1.4保育或者育肥部分清群和重建群

按栋全进全出的育肥舍，可以使用部分清群的方法来净化蓝耳：将蓝耳阴性的保育猪放入空的、干净和消毒过得房间，其他栋依然有蓝耳阳性动物（Andreason,2000）。这一方法需要在引入阳性动物之前，猪舍要彻底的清洗消毒(Dufresne,2003;Torremorell et al,2003）。如果场内的毒株不倾向于通过空气传播，可以实行严格的生物安全，那么这一方法可以更加成功。需要建立一套蓝耳阳性舍和蓝耳阳性舍之间的程序，以管控蓝耳病毒移动的风险。会因为产生了空气传播而导致了方法失败（Charbonneau,2010)。

2.检测淘汰（TR）

检测淘汰是种猪群基于血清学和病毒血的检测然后逐步淘汰抗体阳型/感染动物（Dee et al,2001;Corzo et al,2010）。检测过母猪群，并且15%以下的动物是蓝耳抗体阳型，可以实行检测淘汰方法（Dee et al,2000）。整个猪群同事进行蓝耳抗体和抗原检测。任何母猪不管是哪一项阳性都淘汰（Dee et al,2001;Toberts,2002）。如果是在断奶后检出蓝耳感染，那么感染过的保育和/或育肥舍需要在检测淘汰前24-48小时内清群。完成整个检测淘汰以后，母猪群，保育和育肥猪需要连续监测抗体12个月。母猪群采样数量需要确保信区间95%，估计流行率大于5%能够至少检出一个阳性猪，保育育肥猪群采样数量需要确保信区间95%，估计流行率大于30%能够至少检出一个阳性猪（Dee et al,2001）。PRRSnaive，seronegative replacement stlck can act as sentinelsand be monitored more intensively.时间越长成功率越高。现有的经验是等到连续12个月检测是阴性就可以判断猪群已经是阴性群。蓝耳阴性，抗体阴

性的动物可以作为哨兵猪，可以让监测更为集

3.断奶淘汰（WR)

断奶淘汰类似于检测淘汰，但是更关注断奶母猪群。母猪在分娩前检测蓝耳抗体和PCR（Sandri,2001）。通常PCR阳性的动物非常少，这些阳性猪一般立马清除掉还没等到分娩。蓝耳ELISA阳性母猪在断奶时淘汰，更新一些蓝耳阴性后备。断奶淘汰程序一般会进行20个礼拜（Roberts，2002），最低每头母猪至少检测一次。这比检测淘汰程序来的更慢。风险是蓝耳ELISA阴性猪在分娩前有可能被一只没有PCR检测出阳性的母猪感染。蓝耳PCR阴性/蓝耳ELISA阳性母猪分娩后会间歇性排毒长达90天，知道抗体转阴。

4.从蓝耳病毒阳性母猪生出蓝耳病毒阴性小猪

这一策略的目标是让蓝耳阳性猪群产出蓝耳阴性仔猪（Torremorell al,2000)。这一方法包括4个步骤：

-Identificationof the donor population；A populantion of seropositive animals whereno PRRSV is circulating is identified.

确定母猪群状态：确认母猪群抗体阳性但是没有病毒循环

-母猪配种妊娠

-分娩和断奶Farrowing and weaning：分娩必须在隔离区域。断奶需要5-7日龄。断奶仔猪需要尽快移动到场外保育舍以免交叉感染。

-场外保育阶段和检测：保育舍需要做到全进全出。周期性地至少放入一个哨兵猪进行监测。这些猪需要至少呆在一起12周让母源抗体消减。在这个时候，所有动物都进行ELISA检测，如果哨兵猪和其他猪都是抗体阴性，那么就证明猪群已经是阴性了（Torremorell et al,20000）。

5.封群和轮替

封群和轮替已经成为广泛使用的从母猪群净化蓝耳病毒的方法（Corzo et al,2010)。这一方法包括了停止引入后备母猪公猪至少6个月，再加上逐步清除抗体阳性动物。封群带来的是整体健康和生产的提升（DuBois,2007)。使用封群的方法进行蓝耳净化包含了以下几个步骤：

5.1猪群扩充

猪群扩充指的是在封群之前引入不同年龄的后备动物。这样在封群之后8个月就不会再有新的蓝耳阴性猪引入种猪群。这些后辈需要和种猪群在一起，在同一天暴露。（deBuse,2007)。另外一个可选的方案保持种猪群的目标就是让阴性后备猪呆在场外舍。当场内用来囤积后备母猪的空间不足的时候，这种场外配种是一个好的可选方案。（Torremorell et al,2003)。当封群不成功的时候，必须要在场外再找个地方囤积阴性的后备，因为一旦怀孕的阴性后备进入后导致母猪群的繁殖问题，以及增加下游的呼吸道疾病。（Charbonneau,2010)。

用活病毒暴露

一旦封群后，母猪使用同源的野毒或者弱毒疫苗进行有计划的活病毒暴露。活病毒暴露使得猪群保持均一的免疫了，并且可以消除亚群。让所有动物在同一天暴露的目的是确保整个群体被暴露并产生有效的免疫应答若不使用活病毒暴露的话，存在的阴性亚群会增加所需的从散毒到停止的时间。排毒时间增加是因为病毒持续在整个猪群扩散，虽然持续感染动物只会暂时存在，但是如果猪群没有易感动物存在，那么病毒在猪群内循环的能力就会下降，并且得到清除（Corzo et al,2010)。

5.2引入阴性后备动物

在引入抗体阴性后备母猪之前需要在一个隔离的地方放一些哨兵动物和在场的抗体阳性动物一起，以此验证现在场里的动物都不再排毒了。（Torremorell et al,2003)。在引进阴性后备是，要非常小心，要进行衡量，因为刚刚前面进去后备还是用过活毒暴露的，那些后备母猪可能还具有感染性。（Torremorell et al,2003)

5.3淘汰抗体阳性母猪

一旦抗体阴性的后备引入猪群，就要根据生产计划逐步的淘汰以前进行过活毒暴露的抗体阳性母猪。如果想尽快达到蓝耳阴性场，那么可以加快淘汰抗体阳性母猪（Dufresne,2003；orremorell et al,2003)。

5.4从生长猪群清除蓝耳病毒

在进行生长猪群的蓝耳病毒净化之前要确保猪群流动是阴性的。这一步骤最保育舍清群，然后进行彻底的清洗消毒，然后再屯入蓝耳病毒阴性猪（Dufresne,2003；orremorell et al,2003)。

5.4净化后监测

在整个过程中，目前的血清学检测是必须的：在引入阴性后备之前需要有哨兵猪，血清抗体阴性后备母猪和生长猪。要每月安排生成流程进行监测，确保有足够的统一学意义说明是否还存在感染（Torremorell et al,2003)。

蓝耳控制和净化工具包

监测工具

通过检测来制定成功的蓝耳净化

已经证明可以从一个猪群里面清除蓝耳病毒。但是，一个区域如果没有准确定义那么就不知道到底有没有成功净化蓝耳病毒。猪群比较低的蓝耳病毒流行率使得准确检测和确定蓝耳状态阴性比较困难（Morrison,2009）。

1.检测：

1.1 ELISA

之前的研究表明在一个绝对阴性的群体，蓝耳ELISA的敏感为96.6%，特异性100%（Choet al，1996）。但是取决于猪场情况和采样动物的日龄结果可能有所差异。单个反应（在一堆阴性动物中的一份阳性样本）应该通过其他方法来确认是否阴性，例如间接免疫荧光，蓝耳PCR可以用来表明是最近发生的感染(Charbonneau,2010)。另外一种确认蓝耳阴性的状态是对某个动物重复采样或者对其同一圈的其他猪（至少10天以后），以确保没有血清阳转或者散毒给其他动物。

另外一个需要解释的是抗体使感染产生的还是母源抗体。需要对那么看清来抗体水平比较低的动物采样。这些信号不一定是假阳性，但是他们不一定反应的是目前或者现在的感染。那么解决这个问题就是对尽量大的育肥猪采样，他们母源抗体基本下降了，必要时对哨兵动物采样。另外需要注意的是IFA和PCR检测都是毒株特异性的。

1.2 PCR

要记住设计PCR检测程序的时候评估蓝耳病毒的流行率是至关重要的，可以确保很高的敏感性和特异性。一个PCR阴性的结果并不能保证单个动物没有被感染。

1.2.1 血清

虽然有很多PCR检测的方法，他们都有很高的特异性和敏感性。对于定量PCR单个样本检测，敏感性是95.5%，特异性是100%，用的是SYBR Green RT- PCR (Martinez e t  a l,2008).因此各个实验室用PCR出现假阳性和假阴性都千差万别（Truyen e t  a l,2006;  Zimmerman,2008 ）。通常会将血清样本混样后送到实验室进行检测，因外PCR检测太贵了。混样之后会降低敏感性，5：1混样降低到84.5%，10：1混样降低到82%（Carmichael e t  a l，2010）。混样的特异性分别是5：1为99%，10：1为97.7%。但是，当方法的到，一些猪群的5：1和10：1的检测敏感性和特异性也可以在100%。

1.2.2口腔液

目前又报道一种新的蓝耳检测方法（Zimmerman  et  a l，2007;Weeks e t  a l,2010）。口腔液收集后可以做PCR检测。研究表明口腔液可以代替血液进行蓝耳病毒检测。

2.使用哨兵猪

通常在蓝耳净化项目中使用抗体阴性动物来测试是否猪群还有病毒循环。哨兵动物需要跟厂里的其他动物关在一个场外的隔离佘进行测试，测试猪群是否还在排毒（Torremorell e t  a l，2003）。哨兵动物也可以跟阳性母猪的后代关在一起，以确认后代是否是阴性。在这个方法里面，哨兵猪跟断奶猪关在一起（Torremorell e t  a l，2000）。哨兵动物需要平均分布在抗体阳性猪群内，比例大概是一圈保育猪一头哨兵动物（Torremorell e t  a l，2002）。在一些方法中，哨兵动物先在入群之前做测抗体，然后入群以后每个月测一次，哨兵动物转走4周以上再测下哨兵动物的抗体（Torremorell e t  a l，2000）。在另外一些程序中，哨兵动物会持续在猪群里面待上2个月，每周检测直到转走（Alfonso ET a l，2005）。只有猪群已经非常肯定是不会排毒了才将哨兵动物放进去。

3.蓝耳净化的监测程序MonitoringProtocols for PRRSV Elimination

3.1动物选择：

为了更好的检测蓝耳病毒循环，要选择感染风险高的：哨兵猪，阴性后背，淘汰后背和母猪，病猪，断奶猪（当使用PCR检测），保育后期和育肥后期（当使用蓝耳病毒抗体检测）（Morrison，2009; Torremorell  e t  al,2002;  Torremorell  e t  al,2003; Desrosiers and Boutin,2002,Batista e t  a l,2002;Ruen,2003）.

3.2采样数量

检测蓝耳病毒循环所需的采样数量取决于目标置信区间，所用的实验方法的敏感性和特异性，以及选择猪群的最小流行率。

举个蓝耳净化检测程序的例子，Alfonso等报道称按照置信区间95%，估计流行率5-10%，至少检出一个阳性样本的统计所需采样数量（Alfonso e t  a l，2005）。

当猪群的流行率下降的时候，还要维持95%的置信区间，检出病毒循环的采样数量会增加（Morrison，2009）。当然，当猪群流行率下降，采样数上升，假阳性的比率也会上升。用系列检测是最好的从低流行率群体中检测和确认阳性样本（Morrison，2009）。要确定随机采样的样本数量，可以使用统计差数表（附件3）（Morrison，2009 Ramirez，2008）。

附件1：MCREBEL 限制寄养操作规程（McCaw，2006）

1.不要在出生24小时后寄养Don t crossfoster piglets after 24 hours of age

a. 将不够奶头的小猪转走不要为了追求整齐度和一窝的性别而寄养

b. 当多余的或者大的小猪必须转走，需要转到大小一致奶水足够的那窝母猪那

c. 确保最小的猪奶头优先级别最小，要么当小猪比较多的时候出生就转走

MAXIMIZE THE NUMBER OF PIGLETS REMAINANG ON THEIRBIRTH MOTHER! 尽量让小猪留在自己母猪的身边或者最大程度上让小猪待在吃初入母猪身边

2.Don’t move pigletsbetween rooms 不要在不同房间之间移动小猪

a.严格全进全出

THE LITTER IS NOW THE ALL IN-ALL OUT UNIT! 一窝为一个单位全进全出

3.将病猪，很弱的猪，体况不好的猪转移走

a.将体重太小，养不活，体况不好的断奶猪卖掉或者清除

b.一些小猪治疗后不见好转，清除掉

c.将很消瘦，虚弱，跛腿，体重轻，被毛长，慢性病猪清除掉 断奶的治疗弱仔远离健康猪

4.护理工作可以让小猪的存活率和生产成绩最大化

a.将大小不一的小猪分别入圈

b.将最小的猪放在温暖，没有贼风的地方

c.每天人工饲喂最小的猪4次，连续5天

d.转换频率基于体重而不是房间

e.使用加热灯或者软塑料垫给最小的猪

f.将圈内的一个饮水器降低高度，最初24小时拧开一点，让小猪能够找到水

如果奶头不够，再怎么样也无法断奶出更高质量的仔猪

要想断奶仔猪的数量足够多，就需要得在后背选留和母猪淘汰的时候就关注有效母猪奶头数

附件2：感染蓝耳后的时间轴（McCaw.2006）

以下所例的时间轴是单个猪清除蓝耳病毒的多个事件，要把蓝耳病毒从体内清除出去需要花很多时间建立完全免疫力

感染后的时间

10—30     病毒血症（从血液可以分离到病毒），强烈抗体反应

20—30     最早检测到中和抗体

60+        血液中的中和抗体达到顶峰

100—150   扁桃体/淋巴结变成蓝耳病毒阴性（在保育舍发生感染），许多猪变成蓝耳抗体阴性（＜0.4S/P ratio）血清中和抗体还是阳性

150++      扁桃体/淋巴结变成蓝耳病毒阴性

200        封群所需时间