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近年来，市场肉鸭养殖过程中出现肉鸭短喙长舌综合征(duck beak atrophy and dwarfish syndrome , BADS)症状明显，且多次追加抗体免疫后效果并不明显等问题。对此，我们对可能的原因进行了分析，一方面，可能存在其他病毒混合感染；另一方面，从毒株本身看，可能出现了毒株变异。为进一步确定毒株是否已经发生变异，实验室19年第一季度从市场上收集到26份肉鸭细小病毒阳性病料，开展实验室病毒分离及核酸测序分析。
单从测序结果来看，分离毒株均与GPV同源性高达92.0%-98.0%。我们将这些病料同时腔接种9日龄鸭胚和13日龄鹅胚后：鸭胚胚体无死亡现象，剖检也均无明显变化，收集到的尿囊液在鸭胚中检测到了细小阳性；而在鹅胚中，未出现明显的病变，也未检测到细小阳性。
这一现象使肉鸭细小病毒的分离陷入瓶颈，并且这与15-17年实验室分离到的大舌病病毒在鹅胚中分离增殖而在鸭胚中无法分离增殖的现象有明显差异。我们查阅相关报道文献，重新设计测序引物，对实验室的阳性细小病料从基因组序列上作以鉴定分析。
将26份病料分离毒株基于VP1基因上约1500bp序列进行测序，获得12株完全测序结果，将这12株病毒序列与GenBank发表的小鹅瘟和番鸭细小病毒分离株选取的VP1基因1431bp序列进行序列比对。结果显示，该12株病毒与小鹅瘟病毒亲缘关系比较接近，核苷酸同源性为92.0%-98.0%；与番鸭细小病毒核苷酸同源性在91.2%-92.7%之间。而这一结果与前期实验室保存的大舌病病毒与小鹅瘟病毒核苷酸同源性为92.0%-100%的结果十分相似，难以区分。同时我们将该12株细小病毒序列与实验室前期确定并保存的大舌病病毒G1、G3、G4、G5进行序列分析，发现二者核苷酸同源性在93.0%-93.2%之间。尽管同源性仍旧很高，但我们发现这期间似有差别，于是查阅文献，进而下载近几年所有水禽细小病毒科其他细小分离株序列，作以同源归类，挑选以下代表序列：（见图1）
图1 水禽细小病毒分离株代表毒株归类
将实验室16-17年保存的大舌病病毒序列和19年测序的12株细小病毒序列与以上5组水禽细小病毒分离株的序列进行遗传进化树构建（见图2），结果显示：番鸭细小病毒处于单独分支；实验室19年的肉鸭细小病毒与15年后报导的新型鸭源细小病毒（DPV）亲缘关系最为密切；实验室16-17年的大舌病病毒与经典亚洲株的小鹅瘟病毒处于同一分支；另外，与亚洲株小鹅瘟病毒（大舌病病毒）相比，新型鸭源细小病毒与欧洲株小鹅瘟病毒亲缘性更为接近，同时他们与台湾地区及大陆地区分离发现的减毒株、弱毒株等十分相近。
图2 19年第1季度实验室收集肉鸭细小病毒与其他水禽细小病毒序列
遗传进化树结论：
从对胚的致病性看：本实验室2018年以前的疑似细小阳性病料对鹅胚有明显的致死作用，2019年细小阳性病料对鹅胚和鸭胚均无致死作用。
本实验室收集的19年肉鸭细小病毒与15年后报导的新型鸭源细小病毒（DPV）亲缘关系最为密切；16-17年的大舌病病毒与经典亚洲株的小鹅瘟病毒处于同一分支。
讨论：
由于该病毒分离物在最初的三次传代中不能很好地繁殖【1】，且在鸭胚或细胞中的致病致死率极低，故而该病实验室分毒极其困难。根据文献报道，该新型鸭源细小病毒与致病性的小鹅瘟病毒和番鸭细小病毒相比，其左侧倒置末端重复区域有两个主要片段的缺失，这与减毒小鹅瘟分离毒株的序列缺失部位有所重合【1】，转录因子结合位点缺失现象或与毒力有关，但细小病毒的特定变化(宿主范围、效价和生长特性)，由其他缺失和核苷酸突变引起，目前还没有阐明。【2,3,4】选取3株阳性病毒进行实验室动物回归实验，感染鸭剖检无明显变化，推测其致病力低于传统大舌病，所以目前市场上肉鸭出现的喙脆断翅等高发病低死亡的现象或与此有关。此外，该病造成患鸭感染后期易发生骨折，该病是否引起机体钙磷比例失调亦值得重视。针对发病鸭群，可在饲料中添加钙、磷、维生素以及抗生素药物等，保障鸭机体的钙磷吸收并防止因该病继发的细菌性疾病的发生。【5】对于市面上新型鸭细小病毒抗体的效价保护，实验室也将再进一步跟进评估。
参考文献
【1】Hao C, Yanguo D, Yi T, Isolation and Genomic Characterization of a Duck-Origin GPV-Related Parvovirus from Cherry Valley Ducklings inChina. PLoSONE 10(10): e0140284. doi:10.1371/journal.pone.0140284【2】Smith DH, Ward P, Linden RM. Comparative characterization of Rep proteins from the helper-dependent adeno-associated virus type 2 and the autonomous goose parvovirus. Journal of virology. 1999; 73(4):2930–7. PMID: 10074142【3】Zádori Z, Stefancsik R, Rauch T, Kisary J. Analysis of the Complete Nucleotide Sequences of Goose and Muscovy Duck Pervoviruses Indicates Common Ancestral Origin with Adeno-Associated Virus 2. Virology. 1995; 212(2):562–73. PMID: 7571426【4】. Zsak L, Strother K, Kisary J. Partial genome sequence analysis of parvoviruses associated with enteric disease in poultry. Avian Pathology. 2008; 37(4):435–41. doi: 10.1080/03079450802210648【5】. 陈浩, 窦砚国, 唐熠, 樱桃谷肉鸭短喙长舌综合征病原的分离鉴定. 中国兽医学报. 2015;35(10):1600-5. DOI:10.16303/J. CNKI.1005-4545.2015.10.06
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