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精液制备中的控制点:温度控制和质量参数


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2019/9/20 14:59:14 关注:78 评论: 我要投稿

  用于宫颈后人工授精的精液的作用比用于宫颈授精的精液大2-3倍;故精液制备应遵循更严格的控制程序。
  近年来,猪人工授精站已从小型实验室(大多数在猪场内)演变为大型专业人工授精站,其为许多猪场提供精液。这种转变使这些实验室工作更加专业化。
  宫颈后人工授精所需的精子剂量较低(Watson和Behan,2002年,Hernández-Caravaca等人,2012年,Soriano-_beda等人,2013年),故应在人工授精站实施更加严格的控制。近年来,宫颈后人工授精的应用导致人工授精站公猪数量减少,故对公猪的体况和精液剂量的制备都应严格控制。用于宫颈后人工授精的精液的作用比用于宫颈授精的精液大2-3倍(Mezalira等人,2005; Hernández-Caravaca等人,2012; Bortolozzo等人,2015)人工授精站的主要目的是确保在人工授精时精液处于最佳状态。收集精液后,需经过几个操作,以充分制备精液。我们认为最重要的因素包括:
  射精和精液制备时的温度控制
  精液质量参数
  精子浓度
  射精和精液制备时的温度控制
  从收集精子到将处理后的精子储存在15度,期间的温度下降应缓慢地进行,以避免精子损伤。首先,所用收集杯的温度必须与收集的精液温度相同(38度)。精液收集后,所有的操作都旨在确保温度控制,实现缓慢和连续的温度下降,直至达到精液储存温度(15度)。在33度条件下进行稀释(精液+稀释液),包装好后将精液留在实验室,直至温度稳定,然后将其放入储藏柜,使温度继续下降到15度。
  为了在室温为24度的实验室中检查在33度下制备的精液的降温时间,在稀释后的精液(90 ml)中放入数据记录器。如图1所示,精液大约100分钟内达到热稳定状态。此后,温度下降非常缓慢,因此为了保持最佳温度下降,必须将精液放入相应的储藏柜(15度)。


  图1.在室温为24度的实验室中,在33度条件下制备的精液(90 ml)的温降曲线(min)。


  精液质量参数
  精子能动性以及精子形态是人工授精站最常用的评估精子质量的参数,因其对精子在母猪生殖道内的运动至关重要(Hernández-Caravaca等,2015,García-Vázquez等,2015a,2015b)。 用于评估精子活力的方法主要有两种:
  显微镜主观评估:该法已广泛在实验室中使用。其目的是在显微镜下观察并估计活动精子细胞的百分比,以及它们的活动性(通常按0到5评分,其中0是非前向性运动精子,5是快速、前向性和直线运动的精子)。这是一种快速的评估方法,它可大概估计精子的运动性,但它是不准确和主观的,由技术人员自行评估(Verstegen等人,2002年)。
  CASA系统(计算机辅助精液分析仪):该方法包括使用计算机程序分析精液样本并评估与运动精子细胞相关的不同参数,如活动精子数、进行性活动率(%)以及不同的速度参数。该分析系统比之前描述的显微镜法更加客观和准确(Verstegen等人,2002年;Broekhuijse等人,2011年)。尽管该类系统在人工授精站中的应用越来越多,但必须进行常规检查以确保其准确性。在该案例中,为了验证该系统的正确性,我们选择了两个不同的实验室,用同一个CASA系统测量进行性运动的百分比;分析来自同一头公猪的精液,并在同一天收集及用相同的制备方法处理(图2)。


  图2.在两个不同的实验室用相同的运动分析系统分析了相似精液的前向运动精子数(%)。


  同样重要的是,始终使用相同的程序进行系统测量,并考虑到不同的因素,如样品温度、稀释率、从样品制备到其分析所用的时间或所用的实验室类型(G?czarzewicz, 2015).。另一个需要考虑的因素是样品体积(μl)。图3显示了用CASA系统根据所用样品的体积获得的运动值的变化,运动性与样品体积成正相关。


  图3.使用计算机系统分析3种不同体积的精液样本的前向运动精子数(%)。


  重要的是要建立一个适当和持续的分析程序,以充分保证的运动性分析。任何微小的细节都是必要的,例如,在计算运动性时,应校正每个精液剂量的总浓度。

文章来源:pig333     文章编辑:一米优讯     
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