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非洲猪瘟--诊断专项


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2019/12/25 11:47:03 关注:692 评论: 我要投稿

一、清楚自己的检测能力十分重要(约翰·迪恩,美国明尼苏达大学)

检测指将在临床实践中用于区分目标疾病和其它状态的测试。优秀检测的理想特征:准确(与参考标准比)、精确、可用、方便、低风险、便宜及可重复。

如何量化衡量检测的准确性?

效果方面:敏感性和特异性,阴阳性预测值,阴阳性可能比例;

精确方面:置信区间;

可重复方面:在相同条件下对同一个体进行多次测试时,测试能够给出一致结果的能力

敏感性:疾病阳性=TP/(TP+FN)特异性:无疾病的阴性=TN/(TN+FP)阳性预测值:阳性指标测试中的患病率TP/(TP+FP)阴性预测值:阴性指标测试中的无病率TN/ (TN+FN)

敏感性:

敏感性告诉我们阳性检测如何能很好地检测出感染它被定义为测试阳性的小部分感染它的补充是假阴性率,定义为测试阴性的感染者比例敏感度和假阴性率加起来为一

特异性:

特异性告诉我们阴性测试如何很好地检测感染它被定义为未感染者呈阴性的比例它的补充是假阳性率,定义为测试呈阳性的未感染者的比例特异性和假阳性率加起来为一

预测值:

阳性预测值是指所有感染的检测呈所占的比例阴性预测值是所有没有感染的阴性测试结果中所占的比例

更改阈值进行测试

当疾病由连续测试的阈值定义时,可以通过更改阈值或截止点来更改测试特性降低阈值可提高敏感性,但通常以降低特异性为代价(即假阳性更多)提高阈值可提高特异性,但通常以降低敏感性为代价(即更多的假阴性)

检测敏感性和特异性的关系

接受者操作特性(ROC)曲线,在敏感性和特异性之间“权衡”, 45°线-测试时没有歧视数值

 

因此在做临床非洲猪瘟检测时,明确自身的检测能力十分重要。

二、使用非洲猪瘟标准物质来确保检测结果的有效性(原霖,中国动物疫病预防控制中心)

2.1 ASFV B646L (P72)基因质粒标准物资

名称

载体

插入基因(bp)

量值(copies/μL)

ASFV B646L基因质粒标准物质

pUC19

1941

(5.8±0.9)×10

3

2.2 不同检测方法的最低检测限

稀释倍数

浓度(copies/μL)

数字PCR

定量PCR

RAA、LAMP

试纸条、ELISA

原倍

12000




试纸条、ELISA

1:10

1

1200




试纸条、ELISA

1:10

2

120



RAA、LAMP


1:10

3

12


定量PCR



1:10

4

1.2

数字PCR

定量PCR




2.3 临床样品中的病毒含量?

 

三、当前ASF场景下诊断测试的QA/QC:比以往任何时候都重要(法比奥·万努奇,美国明尼苏达大学)

3.1 质量保证和质量控制的的主要测试流程是监视、确认和改正;

3.2 诊断测试中的开发和验证是为达到预期目的而适当开发、优化和标准化诊断分析的过程;诊断测试:真实场景下的解释,如果由于取样或处理的原因,目标病原体不在样品中,则有完美分析灵敏度的分析将无法给出阳性结果,高分析敏感性不能确保可接受的诊断灵敏度;诊断试验保持了很高的分析特异性,但由于外部污染而导致误诊,交叉污染可导致假阳性反应,降低诊断特异性。

3.3 诊断实验室质量保证/质量控制:质量手册,要求/承诺;系统策略,我们怎么认识他们?;标准操作程序,具体说明;表格和记录,可追溯性记录。

3.4 没有一个完美的诊断测试,但是有一个全面而完善的过程来开发和验证诊断测试=可靠和一致的实验室结果,了解诊断测试的优势和局限性对于在群体层面(畜群、综合系统、地区、国家)建立支持健康和管理决策的现实期望至关重要。质量保证/质量控制程序:高标准可持续性实践。

四、非洲猪瘟病毒的唾液学检测技术(樊福好博士)

4.1 唾液学检测的优势

猪群实施无创性体液检测;动物福利和生物安全的要求;防控成效大于血液学检测。

4.2 唾液样本的采集方法

猪群保持自由饮水;猪群停料12小时(夜间);采样方法:单采+群采;采集袋采集采样。

  

4.3 唾液样本保存

抑制(非灭活)酶活性(氧钒核糖核苷复合物等);保持细胞结构的完整性;保持核酸一级结构完整性;冷藏/冷冻(无抑制物,不得冷冻);重视样品的非洲猪瘟病毒数量半衰期。

4.4 窗口期检测的基本要求

核酸提取试剂盒的高效性和敏感性

4.5 定点清除(拔牙)

出现可疑;检测确认;清除单元格

4.6 非洲猪瘟的未来之路

选择:营养冗余+带毒生产;选择:定点清除+净化生产

4.7 非瘟防控秘籍

秘籍:深挖洞;广积粮;用火烧;筑高墙

五、为什么新一代检测-剔除法控制非洲猪瘟正在我国取得成功(闫之春老师,新希望集团)

5.1 采样和鉴别诊断方法有理论基础

猪群感染早期是可以在大规模出现临床症状前,通过检测可以发现病毒;攻毒后,不同个体的临床症状、病毒血症出现时间有差异。但是病毒血症比临床症状出现早,可以qPCR检出!在明显的临床症状出现之前,qPCR方法确切地检测出ASFV DNA,是能够实现,提前剔除的基础。

5.2 病毒本身的特性

ASFV在舍内、场内传播十分缓慢。完全可以实现早期发现,群内精准扑杀,进行病毒净化。出现ASFV后的环境中,病毒的感染力可能很快失活。完全可实现群内精准扑杀,进行病毒净化。“拔牙”猪场之间,甚至同舍猪群内,空气传播ASFV的几率很低。是我们能实现定点扑杀,全群净化的基础。对于`很大`的ASFV,舍内跨栏传播,除了直接口鼻接触外,更可能是较大尘粒、飞沫的物理携带。意味着舍内防尘、除尘,可能对降低传播程度,有实际意义;同时也给发病群,早期诊断,精准扑杀,提供了理论基础

5.3 环境清除

通过火焰、热风机烘干,环境中的ASFV可被消除, 先检测,再清理,防污染。分小格定点清除!ASFV的半数死亡期,粪中,4° C条件下,0.65天,37° C条件下,0.29天;尿中,4° C条件下,2.19天,37°C条件下,0.41天;口腔液,4° C条件下,2.75天,37° C条件下,2.60天;

5.4 总结

1)高效且可靠的鉴别诊断方法:采样方法快速、全覆盖,不合规疫苗免疫,给鉴别真的造成额外的困难!2)病毒自身特性:(场舍间)是否空气传播,(舍内)传播是否容易?3)环境污染不难清除。4)成本合理:检测成本,剔除成本,维持阴性成本。

文章来源:李曼养猪大会     文章编辑:一米优讯     
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