宁乡猪GADD45G基因多态性研究

现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2020/6/10 11:36:12 关注：373 评论： 我要投稿

宁乡猪GADD45G基因多态性研究
曾勇波1，马海明2**
  (1 宁乡市动物疫病预防控制中心，湖南 宁乡 410600；2 湖南农业大学动物科学技术学院，湖南 长沙 410128)

    摘  要：本研究以宁乡猪为研究对象，用测序方法发现一个A→G类型SNP，采用PCR-RFLP-Pst I进行分型。结果表明：宁乡猪GADD45G基因A/G位点的AA型、AG型和GG型频率分别为0.08、0.73和0.19，A基因和G基因频率分别为0.45和0.55，这表明宁乡猪该位点基因型基本处于杂合状态。本研究为宁乡猪的保种选育积累了有益的资料。
  关键词：猪；GADD45G基因；PCR-RFLP-Pst I
  哺乳动物的生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45(Growth Arrest and DNA Damage Inducible Gamma 45，GADD45G)是一类重要的信号换能器，并参与调节细胞的多种功能。GADD45G基因在人类基因去甲基化方面研究较多，但该基因在猪上的研究极少。鉴于国内外对猪GADD45G基因的研究甚少，我们开展了宁乡猪GADD45G基因分子遗传特性研究，以便为揭示GADD45G基因对猪肉质性状的研究奠定基础。
  1  材料与方法
  1.1 样品采集
  选择325头大白猪和67头宁乡猪，采集猪耳小块组织样本，随后提取DNA。
  1.2 PCR扩增条件
  正向引物为5＇-AAA CTT GCT GCT TGC G-3＇；反向引物为5＇-GGA TGG AGG CGA CAC T-3＇。
  1.2.1 PCR反应体系(总体积20 μL)
  10×Buffer 2 μL，2 mmol/L dNTPs 1.6 μL，20 mmol/L MgCl2 1.6 μL，Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.4 μL，DNA模板(100 ng/μL)1 μL，上下游引物       (10 pmol/μL)各0.4 μL，双蒸蒸馏水  (dd H2O) 12.6 μL。
  1.2.2 PCR反应程序
  94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，共35个循环；72 ℃后延伸8 min，最后4 ℃保存。
  1.3 PCR产物Pst I酶切
  在10 μL PCR产物中加入0.8 μL 10×内切酶缓冲液、0.2 μL限制性内切酶和1 μL双蒸蒸馏水，总体积为      12 μL，37 ℃消化4 h～10 h。
  A/G位点用2％琼脂糖凝胶电泳分析，5 V/cm电压电泳0.5 h(图1)，扩增片断为第1外显子至第2外显子，共804 bp，为PCR-RFLP-Pst I分子标记。