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宁乡猪GADD45G基因多态性研究


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2020/6/10 11:36:12 关注:66 评论: 我要投稿

宁乡猪GADD45G基因多态性研究
曾勇波1,马海明2**
  (1 宁乡市动物疫病预防控制中心,湖南 宁乡 410600;2 湖南农业大学动物科学技术学院,湖南 长沙 410128)

    摘  要:本研究以宁乡猪为研究对象,用测序方法发现一个A→G类型SNP,采用PCR-RFLP-Pst I进行分型。结果表明:宁乡猪GADD45G基因A/G位点的AA型、AG型和GG型频率分别为0.08、0.73和0.19,A基因和G基因频率分别为0.45和0.55,这表明宁乡猪该位点基因型基本处于杂合状态。本研究为宁乡猪的保种选育积累了有益的资料。
  关键词:猪;GADD45G基因;PCR-RFLP-Pst I
  哺乳动物的生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45(Growth Arrest and DNA Damage Inducible Gamma 45,GADD45G)是一类重要的信号换能器,并参与调节细胞的多种功能。GADD45G基因在人类基因去甲基化方面研究较多,但该基因在猪上的研究极少。鉴于国内外对猪GADD45G基因的研究甚少,我们开展了宁乡猪GADD45G基因分子遗传特性研究,以便为揭示GADD45G基因对猪肉质性状的研究奠定基础。
  1  材料与方法
  1.1 样品采集
  选择325头大白猪和67头宁乡猪,采集猪耳小块组织样本,随后提取DNA。
  1.2 PCR扩增条件
  正向引物为5'-AAA CTT GCT GCT TGC G-3';反向引物为5'-GGA TGG AGG CGA CAC T-3'。
  1.2.1 PCR反应体系(总体积20 μL)
  10×Buffer 2 μL,2 mmol/L dNTPs 1.6 μL,20 mmol/L MgCl2 1.6 μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.4 μL,DNA模板(100 ng/μL)1 μL,上下游引物       (10 pmol/μL)各0.4 μL,双蒸蒸馏水  (dd H2O) 12.6 μL。
  1.2.2 PCR反应程序
  94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸50 s,共35个循环;72 ℃后延伸8 min,最后4 ℃保存。
  1.3 PCR产物Pst I酶切
  在10 μL PCR产物中加入0.8 μL 10×内切酶缓冲液、0.2 μL限制性内切酶和1 μL双蒸蒸馏水,总体积为      12 μL,37 ℃消化4 h~10 h。
  A/G位点用2%琼脂糖凝胶电泳分析,5 V/cm电压电泳0.5 h(图1),扩增片断为第1外显子至第2外显子,共804 bp,为PCR-RFLP-Pst I分子标记。

 

  2  结果与分析
  在扩增的804 bp的片断中,GADD45G基因的Pst I的酶切位点A/G位点存在3种基因型:AA型(804 bp)、AG型(164 bp+640 bp+804 bp)和GG型(164 bp+640 bp)。对GADD45G基因A/G位点的基因频率和基因型频率进行检测,PCR-RFLP-Pst I多态性的分布情况如表1所示,宁乡猪GADD45G基因A/G位点均存在AA基因型、GG基因型以及AG基因型,AG基因型频率较高,基因频率分别为0.08、0.73和0.19;A基因和G基因的频率分别为0.45和0.55,A/G位点的基因型大部分处于杂合状态。

 

  3 讨论与结论
  经卡方检验,宁乡猪GADD45G基因A/G位点处于哈代-温伯格平衡状态,表明本研究结果可靠。本研究为宁乡猪的保种和系统选育奠定了理论基础。
  基金项目:
  宁乡猪基础研究(5026401-0315069)
  作者简介:曾勇波(1978- ),男,汉族,主要从事宁乡猪保种与疾病控制;E-mail:51742416@qq.com*通信作者:
  马海明(1972- ),博士,教授,研究方向动物遗传育种;E-mail:mahaiming2000@163.com

 

文章作者:曾勇波,马海明 国外畜牧学猪与禽     文章编辑:一米优讯     
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