小反刍兽疫诊断技术及监测调查

现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2020/10/5 21:45:40 关注：687 评论： 我要投稿

  一、小反刍兽疫简介
  小反刍兽疫又称羊瘟，是由小反刍兽疫病毒（PPRV或SRMV）引起的一种急性病毒性传染病。山羊、绵羊是常见自然宿主，骆驼、牛和猪易感，但不表现临床症状。该病主要通过呼吸道和消化道感染，传播方式主要为密切接触传播，。发病羊临床表现主要为精神沉郁、厌食、高温，口腔内膜充血、溃疡、糜烂，坏死组织脱落后形成不规则的糜烂斑，同时眼鼻伴有脓状分泌物。一年四季均可发生，但多雨季节和干燥寒冷季节多发。
  小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科、麻疹病毒属，基因组为单股负链RNA。全球小反刍兽疫病毒毒株分为4个基因系，其中在亚洲地区流行的毒株属于基因4系。
  山羊较绵羊易感，但不同山羊品种对PPR感染的抵抗力不同。减毒活疫苗对PPR感染至少有3年保护期；减毒活疫苗毒株Nigeria75/1已经广泛应用于小反刍兽疫的免疫，印度采用减毒活疫苗Sungri/96株进行免疫；感染PPR的动物耐过后获得坚强的免疫力，不存在慢性病毒携带者。因此，推荐春、秋两季对所有适宜接种的羊进行一次集中免疫，每月定期进行补免。
  二、诊断
  临床症状分为三种。
  温和型：症状轻微，发热，类似感冒症状。
  标准型（常见）：发热，体温可达40-41℃，持续3-8天，口鼻分泌物严重增加，腹泻严重，有时有口腔溃疡，或表现支气管肺炎，类似羊支原体肺炎，病死率20%-90%不等。
  急性型：较少发生，急性死亡，感染后1-2天内死亡。
  剖检变化：皱胃黏膜出现严重的充血和溃烂；常见回盲肠瓣膜出血；大肠纵向折叠顶部偶尔出现严重的出血形成斑马样条纹。
  样品采集
  病原学样品：活体动物主要采集眼、鼻腔、直肠拭子，用于抗原或核酸检测；死亡动物主要采集淋巴结（肠系膜和支气管淋巴结）、肺、肾脏、大肠等用于抗原和核酸检测。
  血清学样品：无菌采集全血。
  病毒的分离培养。病毒的分离培养通常采集病畜的眼结膜、鼻 腔、口腔及回肠、直肠黏膜等部位的分泌物棉拭子，或者采集血液标本，也可采集淋巴结、扁桃腺、脾、肺、大肠等组织，然后用原代绵羊或者山羊胎肾细胞、新生羊睾丸细胞或非洲绿猴肾( Vero) 细胞对病毒进行分离培养。
  病毒抗原检测
  琼脂凝胶免疫扩散试验：相对简单，样品可选择组织病料（淋巴结、脾脏或肺等）、眼鼻拭子等。
  夹心ELISA(S-ELISA)或捕获ELISA:可用于活体动物或剖检后的诊断，样品可选择口腔、鼻腔、直肠拭子、泪液、粪便或组织病料。特异性强，操作简单方便。
  侧向流试纸条（LFD）：样品采集口鼻拭子，特异性较高，可在几分钟内得到检测结果。
  病毒核酸检测
  RT-PCR: 灵敏度是常规病毒滴定法的1000倍，5h内可得到实验结果，扩增后基因测序分析遗传演化。
  实时荧光RT-PCR：灵敏度高、交叉污染少、易实现高通量、易于标准化，但仪器相对昂贵。
  RT-LAMP：该方法在恒温条件下进行目的核酸片段的大量扩增。灵敏性比普通ＲT－PCＲ 高 10 倍，与荧光ＲT－PCＲ的灵敏度相当。其特异性较高，只能特异性地检测目的病毒，与其他同属的病毒或类似病毒无交叉反应。耗费低，不需要昂贵的仪器设备，反应迅速，其反应结果易于观察，检测结果可以直接用肉眼判断。可以满足现场检测的需求，具有较高的实际应用价值，但读取结果主观性强。
  病毒抗体检测
  病毒中和试验：是金标准，是国际贸易中指定的PPRV 检测方法。灵敏度高、特异性强，但其耗费时间较长，一般需要 10 ~12 d，最短也要7 d 才能得到结果，劳动强度大，很难实现大规模样品的检测。
  竞争ELISA(C-ELISA):相对于传统的病毒抗体检测，该方法更加方便快捷，可以进行大批量检测，被OIE 指定为 PPR标准检测方法之一。
  综上所述，具有快速、特异、灵敏和高通量等特性的ＲT － PCR、荧光 ＲT － PCR 以及多种 ELISA 等检测技术将成为PPR的常用检测方法。另外，实验操作相对简单、耗时短、无需昂贵的仪器、可应用于野外和现场快速检测的技术(如RPA) 也将得到广泛应用，这些技术将会为 PPR的监测和防控提供技术支持。
  鉴别诊断

  三、我国小反刍兽疫流行情况
  2007年我国在西藏阿里地区首次发现该病，2010年8月在阿里地区日土县再次发现小反刍兽疫疫情。2013年末，该病传入我国新疆地区，并迅速传播至全国22个省份，对我国养羊业造成严重危害。通过疫苗免疫和移动控制等措施，该病目前在我国已得到有效控制。