摘要:为评估REV-1、A19、M5布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗的牛羊免疫安全性和效果,选取农区和牧区两个调查点的10组牛羊,分别以皮下注射、结膜囊点眼方式接种,并分别于接种后30、90、180、240d采集血清样品,用国标方法进行抗体检测,比较阳转率变化,同时在接种疫苗后48h内,观察和记录免疫牛羊的健康状况。结果显示:接种48h内,接种牛羊未见不良反应;接种30d后,各组牛羊均产生较高的抗体;不同饲养方式下,阳转率变化趋势基本一致,30d最高,240d时大多降至0;皮下接种的转阳率普遍高于点眼接种。结果表明,3种疫苗均安全有效,无论是牧区还是农区,牛羊免疫30d后都能产生较好的免疫保护效果,且皮下注射方式效果优于点眼。本研究掌握了3种疫苗在不同饲养方式、不同畜种、不同接种方式下的安全性和有效性,为不同地区布鲁氏菌病疫苗的选择提供了参考,为布鲁氏菌病免疫工作的顺利推广奠定了基础。
布鲁氏菌病(以下简称布病)是呈全世界分布的人兽共患病,报告发生过布病的国家和地区已有170余个。据世界卫生组织统计,全世界每年的人间新发布病病例达50万例。人畜间布病的流行和传播,给全世界构成了严重的公共卫生威胁,对畜牧业健康发展和畜产品流通造成了严重阻碍。
20世纪90年代中期以来,我国人畜间布病疫情呈持续回升蔓延之势,人间年新发病例达5万余例。2012年,国家颁布了《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》和《国家布鲁氏菌病防治计划(2016—2020年)》,根据各省人畜间布病流行程度,进行了区域划分,对划分为一类的省份(重度流行区),实行以疫苗免疫为主的综合防控措施。
新疆被划分为布病一类地区。为确保全区布病免疫工作的顺利开展,经原自治区畜牧厅兽医局批准,自治区动物卫生监督所按照《2016年布病与包虫病疫苗免疫效果及安全性试点调查实施方案》的要求,于2016年4—12月在昌吉回族自治州昌吉市和阿勒泰地区福海县,选择分别代表农区和牧区两种饲养管理模式的场(群)以及3个疫苗厂家,联合开展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比对试验。
材料和方法
选用疫苗
A厂家:REV-1布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗;B厂家:A19布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗;C厂家:M5布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗、A19布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗。
调查地点
农区调查点:昌吉回族自治州昌吉市某规模场;牧区调查点:阿勒泰地区福海县牛羊规模场各2个。
试验分组
根据调查点、疫苗厂家、接种方式、动物种类,将试验动物分为10组,其中:牛20头2组,40头2组,共4组;羊30 只4组,60只2组,共6组。羊免疫REV-1和M5疫苗,牛免疫A19(A厂)、M5、A19(C厂)疫苗(表1)。
健康状况观察和基础抗体水平检测
健康状况观察。接种疫苗前,对试验动物健康状况进行询问调查和现场临床观察;接种疫苗后,对试验动物连续观察48h。
基础抗体水平检测。接种疫苗前,对所有试验动物采血,分离血清,采用布病虎红平板凝集试验(RBPT)进行抗体检测。
免疫后抗体检测和阳转率计算
抗体检测。分别于接种疫苗后30、90、180、240d采集血清样品,按照《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646—2018)规定的方法进行抗体检测。先采用虎红平板凝集试验(RBPT)进行初筛,检测为阳性的,再用试管凝集试验(SAT)进行确诊,SAT滴度达到1:50以上的,判定为阳性。
阳转率计算。阳转率=确诊为阳性的样本数/被检测样本总数×100%。
结果
临床健康状况
通过询问及现场观察,确定试验组牛羊在接种疫苗前及接种疫苗后48h内,均未见不良反应。
试验动物基础抗体水平
RBPT检测显示,在所有试验动物中,第10组的1头牛及第4组的2头牛为阳性,说明这3头牛接种疫苗前已感染布鲁氏菌,故将其从后续试验中剔除。
试验动物阳转率
农区试验动物组。分别接种A、B、C 3个厂家的疫苗,试验动物抗体阳转率消长曲线见图1。接种疫苗后30d,试验动物阳转率均达到85%以上,其中B厂家的A19疫苗(牛)阳转率最高为100%,其次为C厂家的M5疫苗(羊),点眼和皮下注射的阳转率均为93.33%,阳转率最低的是A厂家的REV-1疫苗(羊),为85.19%。接种疫苗后90d,B厂家的A19疫苗(牛)阳转率降低幅度最小,从100%降至76.90%;C厂家的M5疫苗(羊),点眼比皮下注射接种的阳转率下降幅度多9.50%;A厂家的REV-1疫苗(羊)阳转率下降幅度最大,下降83.34%。接种疫苗后180d,B厂家的A19疫苗(牛)阳转率下降至13.51%,比90d时下降了63.39%,下降幅度最大;C厂家的M5疫苗(羊),点眼和皮下注射接种阳转率均比90d时略有升高;A厂家的REV-1疫苗(羊)阳转率没有变化。接种疫苗后240d,试验动物阳转率均低于10%,其中A厂家的REV-1疫苗(羊)阳转率为0,无法为动物提供任何抗体保护。
牧区试验动物组。分别接种A、B、C3个厂家的疫苗,试验动物抗体阳转率消长曲线见图2。接种疫苗后30d,试验动物阳转率均高于85%,其中:B厂家A19疫苗(牛)和C厂家M5疫苗(羊)阳转率均达到100%;C厂家M5疫苗(羊)阳转率(96.60%)略大于C厂家M5疫苗(牛)的阳转率(95.00%)和A厂家REV-1疫苗(羊)的阳转率(93.33%);C厂家A19疫苗(牛)的阳转率最低,为85.00%。接种疫苗后90d,A厂家REV-1疫苗(羊)阳转率下降幅度最大,下降83.33%;C厂家A19疫苗(牛)阳转率下降幅度最小,下降25.00%。接种疫苗后180d,各组试验动物阳转率明显下降,均低于50%,其中C厂家M5疫苗(牛)阳转率下降至0。接种疫苗后240d,各组试验动物阳转率持续下降。
不同动物、不同接种方式比较。汇总农区、牧区10组试验动物接种疫苗后30、90、180、240d阳转率情况见表2。对羊阳转率来说,C厂家M5疫苗皮下注射>C厂家M5疫苗点眼>A厂家的REV-1疫苗点眼,说明C厂家M5疫苗皮下注射方式效果最好。对牛阳转率来说,接种疫苗30d时,B厂家A19疫苗皮下注射>C厂家M5疫苗皮下注射>C厂家A19疫苗皮下注射;90d时,B厂家A19疫苗皮下注射>C厂家A19疫苗皮下注射>C厂家M5疫苗皮下注射;180和240d时,C厂家A19疫苗皮下注射>B厂家A19疫苗皮下注射>C厂家M5疫苗皮下注射。因此,30d时,B厂家的A19疫苗对牛免疫效果最好,90~240d时,则C厂家的A19疫苗对牛免疫效果最好。
讨论
新疆作为布病一类地区(重度流行区),在实行以疫苗免疫为主的综合防控措施时,选取适合新疆实际的布病疫苗至关重要。此次试验按照《2016年布病与包虫病疫苗免疫效果及安全性试点调查实施方案》联合3家布病疫苗生产厂家,分别在农区和牧区开展了家畜布病疫苗安全性和免疫效果比对试验,掌握了3种疫苗在不同饲养方式、不同畜种、不同接种方式下的安全性和有效性的第一手材料,为科学选取适合新疆地区的布病疫苗提供了参考,从而为全区布病免疫工作的全面顺利开展奠定了基础。
在此次对比试验中,免疫3个厂家的布病疫苗后,未见免疫牛羊出现不良反应,说明3个厂家的布病疫苗是安全的。
接种布鲁氏菌弱毒冻干活疫苗后,绝大多数被接种家畜在抗原刺激下,逐渐产生抗体。农区和牧区两种饲养方式下的牛羊,在接种布病疫苗后,随着时间的推移,阳转率变化趋势基本一致,30d最高,随后逐渐降低,至240d时大多接近0,说明饲养方式对布病疫苗阳转率几乎没有影响。
此次试验发现,皮下注射接种方式下的两种疫苗转阳率在30、90、180、240d时,大多高于点眼方式,说明皮下注射接种能更好地刺激动物机体的免疫应答,从而产生更多的抗体,抗体持续时间更长。总体来看,接种疫苗后30d是评价布病免疫效果的最佳时期。
本研究也存在一些不足,如在评估3种布病疫苗的安全性时,仅关注了疫苗接种后的临床反应,但对牛羊身体机能、生产性能的影响未进行评估。同时,仅关注了被接种牛羊的安全性,未对接种疫苗的基层防疫员健康状况进行跟踪评估。另外,对于牧区来说,放牧时无法避免不同畜群的混群和接触,因而无法完全排除野毒感染使试验动物阳转率变高的可能性。
结论
研究发现:3个厂家生产的布病疫苗安全性较高,不同免疫方式都可使农区或牧区牛羊产生较好的免疫效果,但皮下注射方式效果更佳;牛羊免疫后30d 即可产生较高的免疫抗体,此时是最佳的免疫效果评价期。
|