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摘要：为初步了解四川省绵阳市规模化养兔场的寄生虫感染情况，以便制定高效的防控策略，2019年5月应用饱和盐水漂浮法和循序水洗沉淀法，选取某大型规模化养兔场，随机采集111份肉兔新鲜粪便样品进行寄生虫检测，并进一步用麦克马斯特法对检测为阳性的粪便进行虫卵计数。寄生虫检测结果显示：111份兔粪便样品中，54份为阳性，平均阳性率为48.65%；共检出球虫和线虫两大类胃肠道寄生虫，其中球虫阳性率为47.75%，线虫为1.80%，混合阳性率为0.9%；小于3月龄兔的寄生虫阳性率（95.45%）高于3~6月龄兔（48.89%）和 6月龄以上兔阳性率（25.00%），差异显著（P＜0.05）；公兔的寄生虫阳性率为44.00%，母兔为33.33%，经卡方检验，得到卡方值为0.956，自由度为1，说明兔场寄生虫阳性率与宿主性别不相关。虫卵计数结果显示：54份阳性粪便样品中，球虫每克粪便卵囊数（OPG）最高为98 600，平均值为15 760；线虫每克粪便虫卵数（EPG）最高为1 000，平均值为800；小于3月龄患兔大多为重度感染，而大于3月龄患兔多数为低强度感染。结果表明，绵阳市兔场球虫感染率较高，以球虫感染为主，且感染与兔月龄密切相关其中幼龄兔感染最为严重，由此建议兔场重视幼龄兔的饲养管理并提前驱虫。
绵阳是四川省畜牧业大市，也是全省重要的生猪、家禽和奶源生产基地，在全省畜牧业经济中占据重要地位。自2018年以来，受非洲猪瘟疫情影响，猪肉长期短缺，由此产生的肉类缺口急需由其他畜禽补位。在此背景下，四川省大力发展养兔业，家庭兔场普遍扩栏30%~50%。绵阳作为兔养殖大市，年出栏约1 000万只。然而，兔易患寄生虫病，感染后常表现食欲减退、腹泻、贫血、消瘦、被毛粗乱等症状，甚至导致种群数量急剧减少，严重威胁和阻碍兔养殖业健康发展。
常见的兔寄生虫主要有球虫、线虫、贾第虫和隐孢子虫等。其中，贾第虫和隐孢子虫是常见的人兽共患寄生虫，寄生于兔等多种动物的小肠，引起宿主腹泻。球虫是家兔养殖中最常见的也是危害最严重的寄生虫之一，感染率可高达88%。多数的兔胃肠道寄生虫病为慢性经过，通过损害兔的肠道组织，导致兔饲料利用率低，严重影响兔的生产性能，并给养殖人员带来潜在感染风险。
在防控兔寄生虫病过程中，需要根据不同寄生虫病的流行特点和临床特征来制定对应的防治措施。为了解绵阳市规模化养兔场的寄生虫感染情况，以便制定高效的防控策略，本研究选择绵阳市某大型肉兔养殖场进行寄生虫流行病学调查，以期对类似规模兔场的寄生虫病防控提供参考。
材料与方法
样品来源与处理
本次调查的某养兔场为规模化养殖基地，养殖规模约1.5万只，兔舍环境卫生管理较好，平时定期驱虫。本次调查采用简单随机抽样方法，设预估流行率50%，可接受绝对误差10%，置信水平95%，使用Win Episcope 2.0软件进行样本量计算，得出本次随机抽样所需最低样本量为96份。
2019年5月，在兔场内随机采集111份肉兔新鲜粪便样品，每份30~50 g。采集样品时，尽量采集粪板中央的新鲜粪便；每采1份样品更换1次手套，并使用一次性塑封袋；采样范围覆盖全场。采样时，对肉兔的月龄（＜3月龄、3~6月龄、＞6月龄）和性别进行编号记录，然后将待检粪便装在洁净的塑封袋中带回实验室，置于4 ℃的冰箱中保存，待检。采样地点现场情况见图1。
主要试剂
4%的NaOH溶液：称取20 g NaOH固体，倒入装有480 mL蒸馏水的烧杯中搅拌均匀待用；饱和盐水：把食盐加入沸水锅内，直到食盐不再溶解出沉淀为止（即1 000 mL沸水中加入约400 g食盐），待冷却后溶液有NaCl晶体析出，即为饱和。
检测方法
饱和盐水漂浮法 取新鲜粪便2 g于铝杯中，倒入约占铝杯体积1/3的饱和食盐水，用竹筷搅碎粪便，充分混合均匀后，经80目铜筛网过滤到另一个铝杯中；将滤液倒入15 mL玻璃试管内，往试管中加饱和盐水至满而不溢，然后在试管口轻轻放置盖玻片，15 min后取下盖玻片，放置于载玻片上，于光学显微镜下观察并识别虫卵，主要识别绦虫卵、线虫卵和球虫卵囊。
循序水洗沉淀法 取新鲜粪便2 g于铝杯中，倒入约占铝杯体积1/3的清水，用竹筷搅碎粪便，充分混匀后，经80目铜筛过滤到另一个干净铝杯中内，加清水至铝杯口，静置20 min。倒掉上清液，保留沉淀物，再加满清水混匀后静置15 min；再次弃掉上清液，保留沉淀物。重复上述过程2~3次，直到上清液透明为止。最后弃上清液，用滴管吸取沉淀物，涂于载玻片上，使其形成薄的长方形宽涂片，再置于显微镜下检查并识别虫卵，重点识别吸虫卵。
虫卵计数方法
采用麦克马斯特计数法。该方法主要计数相对密度小的虫卵或卵囊。称取检测到球虫或线虫的粪便2 g于烧杯中，加入10 mL饱和盐水搅散，再加入50 mL饱和盐水，混匀后经80目的不锈钢粪筛过滤；用移液管把混匀的滤液加入麦氏计数板的2个计数室中，然后把计数板放在显微镜载物台上静置1~2 min，对2个计数室内的虫卵或卵囊进行镜检计数。按每克粪便虫卵或卵囊数量（EPG/OPG）=2个计数室内的虫卵或卵囊数×100，得到每克被检粪便中的虫卵或卵囊数量。
数据处理
数据采用Excel 2010软件进行处理和统计，使用SPSS 25.0软件进行常规卡方检验。
结果
总体感染情况
本次调查共采集111份新鲜肉兔粪便样品，其中检出寄生虫阳性54份，平均阳性率为48.65%。共检测出两大类胃肠道寄生虫虫卵或卵囊，分别是球虫卵囊（图2）和线虫卵（图3），其中球虫阳性率为47.75%、线虫为1.80%，混合阳性率为0.90%（表1）。
不同月龄及性别情况
小于3月龄肉兔的寄生虫阳性率为95.45%，3~6月龄为48.89%，大于6月龄为25.00%（表2）；公肉兔的寄生虫阳性率为44.00%，母肉兔为33.33%（表3）。
检测阳性强度
经麦克马斯特计数法计算，54份阳性兔粪便样品中，球虫每克粪便卵囊数（OPG）平均值为15 760，最高为98 600，最低为100；线虫每克粪便虫卵数（EPG）平均值为800，最高为1 000，最低为200。
分析与讨论
抽样及检测
本次调查通过系统采样设计、随时更换一次性手套、使用一次性塑封袋收集粪样、采集粪板中央新鲜粪便、4 ℃冷藏保存等措施，保证了抽样样品的质量及调查抽样结果的可信性。采用的饱和盐水漂浮法和循序水沉淀法是传统的寄生虫检测方法，通过在显微镜下观察虫卵特征即可辨别所感染的寄生虫种类，较为简单、直观，是目前寄生虫病诊断中广泛使用的方法。
经调查，绵阳市兔养殖主要以存栏量500只以上的专业大户或规模场为主。其中多数规模场与本次调查的兔场在饲养管理、笼舍设置、驱虫周期等方面相似。因此，由本养殖场的感染情况，可以推测绵阳市兔规模场的寄生虫病感染率在50%左右。而家庭养殖户由于没有定期驱虫和相对较差的饲养环境可能有更高的感染率。
寄生虫感染种类
本次调查的兔养殖场粪便寄生虫平均阳性率为48.65%，其中球虫和线虫阳性率分别为47.75%和1.80%。相较而言，球虫阳性率低于近年报道的四川省兔球虫感染率（61.00%~71.11%），而线虫阳性率与金兆庆等和Epe等报道的线虫感染率相近。球虫是造成养殖场大面积寄生虫感染的主要原因，其属于胞内寄生，种兔感染后难以治愈并长期带虫，成为隐性传染源。环境中的球虫卵囊在潮湿阴暗的条件下易孢子化，且球虫卵囊对化学消毒剂有较强的抵抗作用，因而会污染环境并难以清除。
感染风险因素
月龄为兔感染寄生虫的风险因素之一。任志军等、叶勇刚等报道，四川省1~3月龄幼兔的球虫感染率及感染强度都明显高于 4~6 月龄商品兔和 6 月龄以上种兔；吴平山等也报道，各月龄阶段的兔均可感染寄生虫，且1~3月龄和4~6月龄集中感染；崔平等报道，随着兔月龄增长，其寄生虫感染率会降低。本次调查显示，小于3月龄兔的粪便寄生虫阳性率（95.45%）显著高于3~6月龄肉兔（48.89%）和大于6月龄肉兔（25.00%）；而且小于3月龄患兔大多为重度感染，而大于3月龄患兔多数为低强度感染。这可能与随着月龄增加，兔个体免疫力提高，对寄生虫有更强的免疫力有关。因此，兔养殖场应加强幼龄兔的饲养管理，定期驱虫，只有这样才能降低寄生虫感染率，避免损失。
本次调查结果显示，公肉兔的寄生虫阳性率为44.00%，母肉兔为33.33%。经过卡方检验，得到卡方值为0.956，自由度为1，在95%的置信区间中，该兔场的寄生虫阳性率与宿主性别不相关，说明性别不是影响兔感染寄生虫的主要风险因素。
结论
调查表明：绵阳市兔场寄生虫感染率较高，以球虫感染为主；兔胃肠道寄生虫感染与其月龄密切相关，幼龄兔感染最为严重。因此，建议兔场重视幼龄兔的饲养管理并提前驱虫。
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