近期,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家非洲猪瘟专业实验室研究发现,基因I型非洲猪瘟病毒已入侵我国田间猪群,并可引起慢性感染发病。
国家非洲猪瘟专业实验室科研人员在流行病学监测及病原学研究过程中,从山东和河南两地猪场临床发病猪样品分离出两株基因 I 型非洲猪瘟病毒SD/DY-I/21和HeN/ZZ-P1/21,两株病毒均无血吸附活性。全基因组进化分析表明,这两株病毒与上世纪葡萄牙分离的基因I型低致死毒株NH/P68和OURT88/3 高度相似。
目前欧亚大陆国家主要流行2007年格鲁吉亚疫情同源的基因II型病毒,2018年以来我国流行的也是基因II型病毒。基因 I 型病毒曾于上世纪50-90年代入侵并流行于葡萄牙、西班牙、古巴、巴西等国家。而且葡萄牙和西班牙已于九十年代彻底根除非洲猪瘟,目前NH/P68和OURT88/3仅保存于国外少数几个实验室,限于严格生物安全条件下开展相关基础与应用研究。此类病毒通过何种途径侵入我国,有待进一步了解。
历史流行情况
非洲猪瘟病毒目前所发现的24种基因型,全部存在于非洲大陆。2018年进入我国,是目前在亚欧大陆流行的毒株为基因II型。而基因I型在1957年进入葡萄牙,传播至欧洲和美洲多国家,20世纪90年代在全球受基因Ⅰ型影响的地区基本完成了病毒净化。
两例基因I型的确诊
2021年在河南省的一个猪场,育肥猪出现了慢性感染症状,包括体重减轻、间歇性发热、皮肤溃疡和关节炎,还观察到零星死亡,对四头死猪的样本进行收集。
在山东另一猪场,一头重约80公斤的育肥猪出现麻痹症状,进行剖检,ASFV检测。所有样本均通过针对病毒p72基因的qPCR确认为非洲猪瘟阳性。
对p72基因的进一步序列分析表明这些样本中的非瘟病毒均属于基因Ⅰ型。
基因Ⅰ型毒株攻毒的症状
为了确定所分离到的基因I型毒株的致病性,研究者把所分离的山东株在活猪上进行了测试。每组6头SPF猪分别肌注103TCID50和106TCID50剂量的病毒。在接种后的第3-18天,所有被攻毒的猪都不同程度表现出间歇性发热,出现关节病,开始跛行,出现局灶性皮肤坏死和在颈部、耳后、腹部甚至全身的皮肤上出现丘疹。在28天的观察期内,所有的猪都存活了下来。
基因Ⅰ型毒的排毒
为了评估病毒脱落和病毒血症的情况,对实验猪进行了口腔拭子、直肠拭子和血液样本的采集,每隔一天使用 qPCR 检测ASFV基因组DNA。对于接种了106TCID50山东株的猪,在第5天的口腔拭子、第7天的直肠拭子和第7天的血液中可检测到病毒 DNA。对于接种了103TCID50病毒的猪,在接种后第 9 天的口腔拭子、接种后第 11 天的直肠拭子和接种后第 7 天的血液中可检测到病毒 DNA。在所有接种猪感染后超过 28 天,在口腔和直肠拭子中检测到病毒 DNA。一般来说,与直肠拭子相比,口腔拭子中的病毒脱落更早且水平更高。
非瘟病毒基因Ⅰ型的可能来源
1、与葡萄牙毒株类似但有差异。研究者认为,此次对基因I型非洲猪瘟的发现和鉴定为国内首次。基于全基因组序列的系统发育分析表明,所发现这两毒株与 NH/P68 和 OURT88/3(两种基因I型葡萄牙早期分离株)高度相似。NH/P68 于1968年在葡萄牙从一头具有慢性临床症状的家猪中分离出来,而 OURT88/3 于1988年从葡萄牙养猪场的软蜱(Ornithodoros erraticus)中分离出来。尽管如此,河南株(HeN/ZZ-P1/21)和山东株(SD/DY-I/21)在整个基因组的核苷酸突变、缺失、插入和短片段替换方面与 NH/P68 和 OURT88/3 显示出显着的遗传差异。
2、河南株和山东株的全基因组序列差异较大,说明可能是两次独立的引入事件带来这两种毒株。
3、1960年代,基因I型非洲猪瘟在葡萄牙曾经通过在骨髓细胞中连续传代进行弱化,获得的弱毒株曾经开展疫苗实验。但是由于接种之后出现慢性症状,实验即被迅速叫停。此后就有NH/P68 和 OURT88/3两种毒株时而在现场检出。经过30多年的努力,到了1990年代,葡萄牙以及西班牙成功完成非瘟的净化,从那以后两种毒株就没有再在现场检出过。基因I型的始发地非洲也有可能从强毒力的基因I型慢慢进化出低毒力。
4、国外不慎引入的YM毒?
防控思考
自2018年以来,高毒力的格鲁尼亚株 II型非洲猪瘟在中国流行。2020年在田间发现自然突变型II型低毒力毒株。目前已出现了毒力较弱的基因型II型病毒NH/P68-和OURT88/3-like I型流行毒株。这些低毒力的非洲猪瘟病毒潜伏期较长,传播能力强,可引起轻微感染和慢性疾病。受感染的猪持续释放病毒并出现低水平病毒血症,这使得在现场早期诊断比弱毒株II型病毒更困难。
同时,在II型毒力病毒、减毒病毒和I型病毒中可能出现新的毒力未知的重组。因此,基因型I型非洲猪瘟病毒的出现将给中国的ASF根除带来更多的问题和更大的挑战。新出现的I型非洲猪瘟病毒一旦在猪群中传播或感染种猪和公猪,可能会给养猪业造成严重而持续的经济损失。因此,迫切需要对全国范围内的I型非洲猪瘟病毒进行监测,以最大限度地减少其感染在中国造成的损失。
参考来源:
https://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/22221751.2021.1999779。综合华南猪病防控、猪相关。
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