猪粪便中PRRSV的流行病学调查
及ORF5基因的遗传变异研究
Jiankui Liu,Ye Xu,Zhifeng Lin,Jialin Fan,Ailing Dai,Xiaoying Deng,Wan Mao,Xiaozi Huang,Xiaoyan Yang,Chunhua WeiPMID: 33113239 DOI: 10.1111/tbed.13894
为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪场内/间通过粪便传播的情况,于2017-2019年在中国不同猪场随机采集360份猪粪便样本。从120份荧光定量PCR鉴定为PRRSV阳性的样本中,扩增出62个ORF5基因,并进行了测序。
基于ORF5基因的系统发育分析表明,这些毒株可分为4个谱系:谱系1(NADC30-like)、谱系3(QYYZ-like)、谱系5.1(VR2332-like)和谱系8.7(JXA1-like),其中NADC30-like毒株占62.9%(39/62),QYYZ-like毒株占21%(13/62),VR2332-like毒株占1.6%(1/62),JAX1-like毒株占14.5%(9/62)。此外,从这120份阳性粪便样本中共分离出14株PRRSV,包括谱系1、5.1和8.7,说明粪便可能是农场PRRSV传播的风险因素之一。全基因组测序结果显示,14株PRRSV相互间的同源性为83.1% ~ 97.7%,与NADC30的同源性为82.3% ~ 96.1%,与VR2332的同源性为83.2% ~ 99.7%,与QYYZ的同源性为79.6% ~ 87.2%,与JXA1和CH-1a的同源性为82.6% ~ 98.9%,与LV的同源性仅为60.1% ~ 60.7%。14株毒株中有6株发生了基因重组。
总的来说,本文的研究数据对了解PRRSV通过粪便传播有一定意义。此外,该病毒可从阳性粪便样本中分离,表明粪便可能是PRRSV在猪场传播的风险因素之一。
原文链接:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33113239/
PRRSV感染的肺泡巨噬细胞中
蛋白乙酰化的定量蛋白质组学分析
Jianyu Fang,Songlin Qiao,Keling Wang,Rui Li,Lei Wang,Haili Li,Gaiping ZhangPMID: 33296138 DOI: 10.1002/pmic.202000019猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重影响全球养猪业的病毒性疾病。由于缺乏有效的疫苗,因此,迫切需要开发新的抗病毒方法来弥补现有疫苗的低效性。赖氨酸乙酰化作为感染期间重要的翻译后修饰,在宿主抗病毒反应中起着关键的调节作用。
本研究通过富集乙酰化特异性抗体和液相色谱-串联质谱法分析了PRRSV感染的肺泡巨噬细胞(PAMs)中蛋白乙酰化的情况。结果在1421个细胞蛋白中鉴定出3731个赖氨酸乙酰化位点。不同乙酰化蛋白的生物信息学分析结果表明,乙酰化蛋白参与宿主免疫应答和能量代谢等多种生物途径。
以上发现将有助于了解PRRSV的发病机制,并确定PRRSV治疗的新细胞靶点。
原文链接:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33296138/
筛选免疫优势肽作为免疫原开发
针对PRRSV糖蛋白3的单克隆抗体
Chao Liang,Hongliang Liu,Jingming Zhou,Yumei Chen,Peiyang Ding,Xifang Zhu,Mengmeng Wang,Menghao Ding,Aiping WangPMID: 34333004 DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2021.07.168糖蛋白3(GP3)是一种高度糖基化的膜蛋白,是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的保护性抗原和次要结构蛋白,在病毒组装和感染中起着重要作用。在本研究中,研究人员合成了23个跨GP3蛋白序列的重叠肽,并通过间接ELISA方法鉴定了五种免疫优势肽:GP3-P3、P4、P5、P6和P7,将GP3-P4(P55LCPTRQAAAEILEPGKS72)与载体蛋白BSA耦连并用该耦连物免疫BALB/c小鼠,制备得到一株抗GP3的单克隆抗体1E5。通过western-blot、Dot-ELISA、IPMA和IFA鉴定1E5的特性。结果发现,1E5可与HP-PRRSV株发生特异性反应,但与C-PRRSV或NADC30-like PRRSV株均无反应。定点丙氨酸置换分析显示,8个氨基酸残基参与抗体结合过程,其中E65、L67和P69是单克隆抗体1E5识别的关键残基。
综上所述,本研究提供了一种利用免疫优势肽作为靶点制备针对病毒蛋白特异性单克隆抗体的新思路,并且单克隆抗体1E5可能有助于开发一种区分HP-PRRSV与C-PRRSV和NADC30-like PRRSV的快速检测方法。
原文链接:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34333004/
PRRSV可促进MARC-145进入细胞周期S期
Xuexia Wen,Xinna Ge,Lei Zhou,Yongning Zhang,Xin Guo,Hanchun YangPMID: 33869322 DOI: 10.3389/fvets.2021.642095猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是严重影响全球养猪业最具经济意义的病原体之一。尽管科学家们从未停止过研究,但影响PRRSV在宿主细胞中复制的机制尚未完全阐明,因此需要进一步的研究。在本研究中,研究人员首次发现PRRSV感染可导致MARC-145细胞内源性p21蛋白表达下调,且呈病毒剂量依赖性。之后,利用流式细胞仪分析敲除p21基因对细胞周期进程的影响,发现敲除p21可促进MARC-145细胞进入细胞周期的S期。有趣的是,PRRSV感染也能促进MARC-145细胞进入S期。随后,科研人员将MARC-145细胞分别同步至G0/G1期、S期和G2/M期,并测定PRRSV在这些细胞中的复制情况。结果显示,同步进入S期的MARC-145细胞相比同步于其他时期的细胞,PRRSV病毒滴度最高。此外,为了更可靠地分析内源性p21蛋白在PRRSV复制中的潜在作用,利用CRISPR/Cas9技术构建了p21基因敲除MARC-145细胞株(p21-/-),并评价其促进PRRSV复制的能力。研究结果表明,敲除p21有助于PRRSV在MARC-145细胞中的复制。此外,通过构建一系列表达PRRSV单个蛋白的真核质粒,证明了PRRSV的非结构蛋白11 (nsp11)可介导p21降解。值得注意的是,通过诱变分析,进一步证明了nsp11的核糖核酸内切酶对p21的降解至关重要。
本文的研究结果不仅揭示了PRRSV新的发病机制,也为新的抗病毒策略开发提供了见解。
原文链接:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33869322/
新型重组PRRSV毒株HBap4-2018
对仔猪具有高致病性
Pengfei Chen,Xiangmei Tan,Mengqin Lao,Xia Wu,Xiongwei Zhao,Shuting Zhou,Jiarong Yu,Junrui Zhu,Lingxue Yu,Wu Tong,Fei Gao,Hai Yu,Changlong Liu,Yifeng Jiang,Guangzhi Tong,Yanjun ZhouPMID: 34635987 DOI: 10.1007/s12250-021-00453-0目前,世界范围内出现了各种具有不同遗传特性和致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变种,增加了PRRS防控的难度。在本研究中,研究人员从2018年中国河北省患有严重呼吸道疾病的猪群中分离到一株命名为HBap4-2018的PRRSV毒株。
HBap4-2018的基因组长度为15003个核苷酸,与NADC30-like PRRSV相比,HBap4-2018的nsp2额外连续缺失了5个氨基酸。基于全基因组和ORF5的系统发育分析表明,HBap4-2018属于PRRSV-2谱系8,其基因组高度可变。然而,根据nsp2的系统发育分析,HBap4-2018被划分为谱系1,与NADC30-like PRRSV具有较高的氨基酸同源性(85.3%-85.5%)。进一步的分析表明,HBap4-2018是一种新的天然重组PRRSV,基因组中有三个重组片段,其中高致病性PRRSV(HP-PRRSV)为主要亲本毒株,而NADC30-like PRRSV为次要亲本毒株。接种HBap4-2018后,仔猪表现出典型的临床症状,死亡率为60%,并在肺部观察到高水平的病毒血症和明显的组织病理学损伤,表明HBap4-2018对仔猪具有较高致病性。
原文链接:
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34635987/
|