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北京某猪场断奶仔猪呼吸道疾病的诊断


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2022/11/15 8:22:30 关注:81 评论: 我要投稿

  北京某猪场断奶仔猪呼吸道疾病的诊断
  陈泓岑,刘世洲,王乐,常可欣,卢天航,雒星辰,邓杨,李子萱,刘博文,张永红*,崔德凤*

(北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京102206)

  病毒、细菌和环境应激等诸多因素可诱发呼吸道疾病综合征。呼吸道疾病综合征发病猪的主要症状为较高的体温,同时伴有咳嗽、体型消瘦、喘气、呼吸困难、食欲减退等症状,最终导致降低经济价值或死亡。本病主要发生于断奶仔猪,发病率高达30%~80%,且病死率高达5%~30%。呼吸道疾病综合征(PRDC)主要与规模化养猪场的密集养殖、通风不良、卫生环境不良和环境应激刺激等诸多因素有关。
  01
  疾病简介
  1.1猪传染性胸膜肺炎
  放线杆菌可导致高传染性、高致死率的猪传染性胸膜肺炎。呼吸困难是该病导致猪死亡的主要原因,病死猪皮肤往往呈现蓝紫色。该病在我国流行的血清型为1型、5型和7型。
  1.2猪支原体肺炎
  猪肺炎支原体又称猪气喘病。有研究表明,该病在春冬季节的阳性检出率高,分别为66.67%和77.78%;育肥猪以及繁育母猪阳性率较高,分别为63.41%和86.49%。
  1.3猪圆环病毒
  病猪圆环病毒(PCV)是已知最小的动物病毒之一,现已知有四种血清型,主要病原为PCV2。PCV2可以造成母猪生殖障碍;生长发育猪呼吸道疾病;皮肤炎症和肾衰;仔猪先天震颤,该病可直接、间接、垂直传播。
  1.4猪繁殖与呼吸综合征
  猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起病猪的皮肤发绀、呼吸障碍和双耳皮肤变蓝,所以又称为“蓝耳病”,可直接、间接和垂直传播。
  02
  材料与方法
  2.1样品采集
  选取北京市某规模化养猪场病猪进行前腔静脉采血10mL,于4℃3000r/min离心20min分离得到血清,用于后续病毒DNA、RNA的提取与鉴定。将病死猪进行剖检,采集肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、气管及支气管分泌物、扁桃体及渗出液进行常见病原检测。
  2.2主要试剂及仪器
  LB营养琼脂、血琼脂平板、血清琼脂平板和巧克力琼脂平板、革兰氏染色液、细菌核酸提取试剂盒、病毒DNA/RNA提取试剂盒、2×ProTaq预混液、EvoM-MLV反转录预混型试剂盒、PCR引物、电泳仪、PCR仪、全自动高压灭菌锅。
  2.3实验方法
  将猪场采集的病猪组织切成小块,用剪刀剪碎,放入组织匀浆器中,加入适量灭菌PBS缓冲液反复研磨,置-80℃的超低温冰箱内反复冻融3次以上,最后将组织匀浆离心,提取上清液。进行病毒核酸提取、纯化,将得到的DNA和RNA保存于-20℃冰箱中备用。将提取的病毒RNA根据反转录试剂盒说明书进行PT-PCR扩增,制备该病毒的cDNA置于-20℃冰箱保存。PRRSV和PCV2的检测都选择20μL的反应体系。各自分别使用10倍稀释的自建标准质粒进行绝对定量PCR扩增。PCR扩增,取5μL扩增终产物进行琼脂糖凝胶电泳,电泳条件110V,30min。
  从病死猪采集的脏器等样品,处理后进行细菌纯培养,细菌形态观察和细菌16SrRNA鉴定。采用细菌16SrRNA通用引物和特异性引物,详见表1,按照细菌常规方法进行PCR扩增,凝胶电泳成像,观察结果。

  03
  结果与分析
  根据本研究设计的以PRRSVORF7基因为目的片段的引物,对19个血清样品进行了PRRSV检测,PRRSV阳性样品可于434bp处看见高亮条带。如图1。

 对PRRSV阳性样本进行实时荧光定量PCR检测病毒载量,检测结果见图2。

  PCV2检测结果如图3。

  对PCV2阳性样本进行实时荧光定量PCR检测,结果见图4。

  通过细菌分离培养,PCR扩增SS、App、Pm、MH的核酸,病原菌均未检出,结果都为阴性。
  在检测的19例断奶仔猪的样品中,有12例感染PRRSV和5例感染PCV2,检测样品中未捡出SS、Hps、Pm、Bb等病原。经基因序列比较,结果显示,PRRSV和PCV2与接种疫苗的基因序列存在很大的差异。
  04
  讨论
  猪呼吸道传染病是集约化猪场养殖中的大问题,猪场因此病引发的经济损失也是不可估量的。该病的发病率约在30%~80%之间,病死率在5%~30%之间,甚至会超过上限值。在该猪场的19例病猪中,PRRSV的检出率是63.15%,PCV2的检出率为26.3%,虽然该猪场已经接种过疫苗,但是由于基因型不一致而导致免疫效果不理想,而无法起到有效的保护作用。
  养猪场在疫病防治上不能松懈,在加强硬件设备基础的同时应着重加强对病毒的管理,加强对疾病的防治。同时,兽医应适时、有序地对猪场的免疫情况进行监控、评价,并制定出一套科学、有效的疫苗接种方案,这对提高养猪场的经济效益、提高生产的稳定性起到了关键作用。从养猪的饲养管理上,对存在的问题进行及时的补漏,才能达到预防或减少疫情发生的目的。


文章来源:猪业科学     文章编辑:一米优讯     
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