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摘要：近年来，新疆南疆地区开始引进国外安格斯肉牛养殖。为了解该地区集约化安格斯肉牛繁育场的主要疫病流行现状和存在的生物安全问题，采用现场调查、问卷调查和实验室检测相结合的方式，对新疆喀什地区4个大中型集约化安格斯肉牛繁育场进行了调查。结果显示：4个牧场安格斯肉牛表现的临床症状主要是腹泻，其次是肺炎；导致犊牛腹泻的病毒性病原主要是牛冠状病毒（BCV）、牛诺如病毒（BNoV），阳性检出率分别为19.93%、15.20%，导致肺炎的主要是牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛腺病毒3型（BAV-3），阳性检出率分别为28.24%、14.12%。4个牧场在防疫设施设备建设、消毒制度落实、人流物流管控、规章制度建设以及饲养管理、鼠害蝇害防控和无害化处理等生物安全方面均存在不同程度的隐患。结果提示，南疆地区安格斯肉牛繁育场要加强BCV、BNoV、IBRV、BAV-3等病毒感染的防控，通过加强免疫，降低牛群腹泻和肺炎的发病率，通过严格生物安全控制，防止外部病原传入。本调查为南疆地区国外引进安格斯肉牛的动物疫病防控提供了依据。畜禽养殖场生物安全是指为防止引起疾病的物质进入畜群或限制疾病在牧场传播而采取的一系列措施，包括保障外部生物安全（防止病原体进入）和内部生物安全（在畜禽群体内部传播）的所有措施。业已证明，畜禽养殖场生物安全计划的制定与各项措施的贯彻实施是保障动物健康与福利，提高生产率，减少治疗药物使用，控制疫病发生与传播的最重要系统工程。然而，受环境、养殖技术水平等客观因素影响，预期所需的劳动力、时间和经费投入较高；受主客观因素影响，采取的生物安全措施在不同畜群养殖场的实施水平与效果也大不相同。因此，不同类型和不同功能的畜禽养殖场，基于较常流行或影响较大的疾病，制定针对性的，符合基本情况的生物安全计划，可最大程度地防止疾病发生，降低疾病危害，显著提高养殖效益，保障养殖健康和可持续发展。近几年新疆南疆地区安格斯肉牛养殖发展迅速，已成为当地农牧民脱贫致富、乡村振兴的重要产业之一。但由于养殖历史较短，安格斯肉牛养殖技术水平有限，动物疾病问题日益凸显，严重制约了安格斯肉牛养殖业的健康发展。因此，本研究针对新疆南疆地区部分集约化安格斯肉牛繁育场常见疾病发生现状和主要生物安全问题开展调查，以期为该地区集约化肉牛养殖场制定科学合理的生物安全防控措施提供依据，从而保障养殖业健康发展。
调查时间、地点及对象
2021年对新疆南疆喀什地区4个集约化安格斯肉牛繁育场开展调查。
调查方法及内容
 调查采用现场调查、问卷调查和牧场疾病诊疗记录查阅相结合的方法，对牧场肉牛主要疾病临床症状、防疫软硬件建设、人流物流管控、兽医技术力量，以及牧工家庭养殖背景、饲养管理、鼠害蝇害防控、无害化处理等进行调查。实验室检测样品采集 分别于2021年1、5、7月，采集4个牛场1月龄患病犊牛肛拭子和鼻拭子，参考动物流行病学调查相关规程和方法，按每场出现临床症状犊牛5%以上的比例采样进行实验室诊断。实验室检测 采用PCR方法，对采集的296份肛拭子样品，检测4种腹泻相关病毒——牛诺如病毒（bovine norovirus，BNoV）、牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCV）和牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）；对采集的170份鼻拭子样品，检测4种肺炎相关病毒——牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis，IBRV）、牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛腺病毒3型（bovine adenovirus 3，BAV-3）和牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus type 3，BPIV-3）。病毒基因组DNA快速提取试剂盒，购自Omega Bio-Tek公司；DL 2000 DNA Marker、2×Taq PCR Master Mix琼脂糖，均购自天根生物有限公司；反转录试剂盒（prime script RT reagent kit），购自大连宝生物工程有限公司；Trizol，购自Invitrogen；Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（gDNA digester plus），购自翌圣生物科技（上海）有限公司。数据处理与统计运用Excel软件对数据进行统计分析，对主要疾病临床症状、病原检测以及牧工家庭养殖背景调查结果进行定量（百分比）统计分析，对其他调查结果进行定性描述。
调查结果
主要疾病临床症状从4个牧场的疾病记录来看，各场的总患病头数分别为1 533、1 667、1 647和970头，平均患病率分别为66.36%、74.39%、81.69%和30.68%；出现的症状主要有腹泻、肺炎、眼疾、弱犊、营养不良、腹痛，其中前5种症状占总临床症状的95%以上（表1）。在有疾病临床症状的犊牛群中，腹泻症状在各繁育场占比均较高，其次是肺炎，其他症状占比均较低。
主要病原检测检测结果（表2）显示，BCV、BNoV、BVDV和BRV的阳性检出率分别为19.93%、15.20%、0.03%和0.01%，IBRV、BAV-3、BVDV和BPIV-3的阳性检出率分别为28.24%、14.12%、7.06%和5.88%。结果表明，BCV和BNoV是引起犊牛腹泻的主要病原，IBRV和BAV-3是引起犊牛肺炎的主要病原。
生物安全调查消毒防疫硬件建设 在消毒防疫硬件建设方面，各牧场均存在基础设施设备不齐全，未严格区分净道和污道，兽医诊疗室配置不完整等问题。其中：4个牧场的正门均缺少车辆消毒池和高压水枪，车辆进出时只能进行喷雾消毒；部分场区缺乏消毒间及紫外线更衣室，人员消毒通道深度过浅，长度较短；消毒通道内喷雾装置运行不畅，冬季寒冷时易结冰；各牧场均未严格设定净道和污道。各牧场消毒设施设备配备情况见表3。各牧场兽医诊疗室基础配置不完整，基本的疾病诊疗、消毒防疫设施设备匮乏，无法开展免疫效果检测、药物敏感性试验等。缺乏高压灭菌设备，无法对有害物、手术器械等实施高压灭菌处理。图1为部分缺乏的设施设备。
人流、物流消毒情况 牧场环境及圈舍的消毒程序不规范，缺乏相应的检查制度，存在消毒随意性大、消毒药物单一和消毒前圈舍清洁不彻底等问题。生产区内有饲养人员串圈舍行为，且进出圈舍未经严格消毒。另外，门卫的消毒程序流于形式，外来人员和返场牧工以及外来车辆进入场区时，未严格消毒，甚至未消毒就进入场区。牧工家庭畜禽养殖背景 对牧场169名牧工的家庭畜禽养殖背景以问卷形式进行调查。结果（表4）显示：接近半数的牧工家庭中饲养畜禽，其中饲养牛、羊的接近90%，62.67%牧工对存在的动物疫病不了解，54.67%的牧工回家后直接接触畜禽，还有部分牧工回家和返场后不严格消毒，不洗澡更换衣物。
兽医技术人员 牧场兽医技术人员数量不足，各兽医人员对应预防和治疗的牛只数量较多，人均超过600头，且技术人员的兽医专业知识水平参差不齐。各牧场兽医人员配备情况见表5。
牧工生物安全意识 牧场牧工大多数为当地农民，文化程度较低，专业知识匮乏，对规模化养殖场的操作规范熟练程度较低，消毒防疫意识淡薄，很多牧工家中饲养畜禽或有饲养畜禽的经历，习惯于自家散养方式，主动严格执行消毒程序的意识不高。调查发现，大多数牧工对消毒不重视，消毒程序不规范。场区工作人员进出生产区时，不执行严格消毒程序，有些为了方便甚至绕过消毒通道直接进入生产区，部分牧工从生产区返回到生活区时不更换衣服、鞋帽。饲养与管理情况 （1）规章制度建设。牧场的人员管理、车辆管理、消毒管理、饲养管理、防鼠防虫管理、用药管理、档案管理等各项管理制度普遍不健全，并且存在制度措施落实不到位问题。（2）饲料及卫生清理。部分青贮窖顶层存在约15 cm厚的青贮饲料霉变现象（图2-A），饲喂时不清理干净，就与正常青贮饲料混合饲喂；圈舍清理不及时、不彻底，可见死亡、流产胎儿，胎衣随意丢弃（图2-B），圈舍水槽没有定期清洗、换水。（3）犊牛初乳管理。对安格斯初产母牛初乳产量进行抽样测定评估（n = 20）发现，初产母牛初乳平均产量为731 mL，但个体差异变化范围较大，为160~4 050 mL（图3），提示部分安格斯母牛初乳产量不高，导致新生犊牛初乳摄入不足，而牧场又缺乏相应的犊牛初乳补饲管理技术措施。
鼠害蝇害情况 调查发现，牧场存在老鼠、蚊蝇以及鸟类等有害生物入侵现象。在生活区、精料库和圈舍内均有老鼠出没的踪迹，精料库内可见部分精料袋被老鼠咬破（图4-A）。夏、秋季节，在生活区、圈舍、兽医室等场所蚊蝇较多（图4-B）。牧场缺少防鸟设施设备，鸟类可自由出入牧场，在生活区、生产区和牛舍运动区自由飞行。
粪污清理及无害化处理情况 调查发现，场内工作人员忽视对养殖环境卫生的控制和改善，对圈舍及运动场清理不充分，对粪尿混合物清理不及时，导致圈舍、活动场内的粪便堆积严重，卫生环境较差，存在疫病传播风险。各牧场的无害化处理方式均为直接深埋，处理方式单一；牧场对病死牛尸体处理不规范，病死牛随意放置（图5）；掩埋点距离场区较近且处理区域无标识；病死牛无害化处理过程中，操作人员未做好防护措施。
讨论
引发腹泻、肺炎的主要病毒流行情况BCV、BNoV、BVDV等是导致犊牛腹泻的主要病毒，感染程度因国家、区域、牛种类（奶牛或肉牛）以及诊断技术不同而异。Lorenzetti等调查发现，巴西肉牛BCV牛群感染率达61.5%；刘蓉菁等研究发现，我国新疆、青海、西藏等地区牛群BCV感染率普遍较高，平均血清抗体阳性率达80%以上。2003年以来，相继被证实BNoV是美洲、非洲和亚洲地区导致犊牛腹泻的重要病毒。Guo等2018年首次报道在我国牛群中检测出BNoV。BVDV在世界范围内均有分布，牛群感染风险较高，自20世纪90年代以来，欧洲许多国家的BVDV阳性率平均在50%以上。王新平等对国内不同地区的牛群粪样进行BVDV检测，发现感染率为16.5%~89.0%，表明我国某些地区BVDV感染率较高。BVDV不仅引起犊牛腹泻，还与牛呼吸道和生殖疾病相关。引发牛呼吸道疾病综合症（bovine respiratory disease complex，BRDC）的病毒性病原包括IBRV、BAV-3和BPIV-3等。BRDC常导致奶牛产奶量降低，肉牛胴体品质下降，犊牛肺炎发病率和死亡率上升，治疗成本增加，给全球养牛业造成巨大经济损失。本研究所调查的喀什地区4个牧场为2018年新建的安格斯肉牛繁育场，当年开始从澳大利亚引进安格斯牛，所有引进的肉牛均经过严格的海关检疫和隔离检疫，为无疫牛群。而本次调查发现，牧场均有腹泻、肺炎等临床症状的犊牛出现，且引起腹泻的病毒以BCV和BNoV为主，引起肺炎的以IBRV和BAV-3为主。无疫牛群引入国内后发生腹泻和肺炎疾病，可能与国内相关病原流行率较高，牧场基础设施不完善，消毒防疫不到位，人员、物流管控不严等相关。防控建议完善牧场基础设施 调查发现，部分牧场缺少消毒池，消毒设备不完善，消毒更衣室配置不完整，缺少捕鼠、防鸟装置等。由于当地条件所限，牧场在建设时许多基础设施尚未完善，这可能是导致牧场出现各种疾病的重要因素。建议牧场根据自身基础设施建设情况，完善基础设施配置。加强管理和人员培训，提高生物安全意识 调查发现，牧场的牧工多为当地农民，文化程度和专业知识水平较低，主动消毒防疫意识不高，同时牧场管理制度不健全，对牧工缺少培训。牧工家庭畜禽养殖背景调查发现，近一半牧工家庭饲养牛、羊等家畜，其中一半以上牧工对自家饲养畜禽的健康状况不了解，且在归家后直接接触畜禽，而且还存在部分牧工归家返场不消毒、不更换衣物等行为。这些行为都可能是牧场疾病引入的原因。建议各牧场加强管理制度建设，定期进行人员培训，严格落实安全防护措施，定期抽检各牧场生物安全措施关键点的落实情况，查漏补缺，保护动物、环境和牧工自身的安全。加强人流、物流管控与消毒 调查发现，牧场均存在人员、车辆、投入品进出消毒隐患。牧场正门的消毒流于形式，来访人员及外来车辆未经消毒即可出入牧场，牧工进出生产区不消毒或消毒不严格，在生产区内频繁串圈。这些行为都可能造成病原在牧场内传播。建议牧场加强牧工及外来人员管控，对人员、进出场车辆及投入品严格执行消毒程序。规范消毒和无害化处理程序 调查发现，各牧场均缺乏规范的消毒程序，人员及车辆物流的消毒存在较大漏洞，这会对病原的引入或病原在牧场间的传播带来风险，也是导致犊牛腹泻和肺炎等的重要因素。建议各牧场根据自身情况，制定适合本牧场的消毒程序和管理制度，确保牧场工作人员认真遵守并执行到位。另外，各牧场存在处理方式单一、掩埋点距离场区较近、处理区域无标识等诸多无害化处理不规范问题，导致病原传入风险较高。建议各牧场严格按照相关规程进行无害化处理。建立合理的免疫方案 牧场在引入安格斯肉牛时，虽然进行了IBRV免疫，但本次调查对有肺炎症状的犊牛进行病原检测发现，IBRV感染率较高，其他病原如BNoV、BCV、BAV-3也存在较高的感染率。牧场未建立合理的免疫方案，可能是导致疫病发生的潜在原因。因此，各牧场应建立合理规范的免疫程序，加强疫病防控，降低疫病发生风险。局限性生物安全风险因子与动物患病或检测结果之间存在一定关联，但本研究未进行此方面的定量统计分析。下一步，需要对每个场的患病与健康动物群体进行单因素或多因素风险分析，找出生物安全的高风险环节和因素，“一场一策”制定对应的生物安全控制措施。同时，结合病原检测结果，开展科学防治。
结论
新疆南疆地区安格斯肉牛繁育场的腹泻和肺炎发病率较高，主要由BNoV、BCV、IBRV、BAV-3等病原引发，其原因是牧场在防疫设施设备建设、消毒制度落实、人流物流管控、规章制度建设以及饲养管理、鼠害蝇害防控、无害化处理等生物安全控制方面存在隐患。因此，各牧场应针对病原流行情况和存在的生物安全问题，制定并实施合理的控制方案和确实可行的生物安全措施，控制腹泻、肺炎等疾病的发生和流行，提高经济效益。
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