养殖管理频道
养殖管理  畜禽资源  免疫防疫  疫病防治  疫病警报  饲料  兽药  
当前位置:首页疫病防治专家诊室 → 文章内容

山东省部分规模化驴场主要病原感染情况调查


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2022/11/20 15:52:23 关注:92 评论: 我要投稿

摘要:目前关于规模化驴场主要病原的流行数据极为有限。为了解山东省驴养殖密集区的主要病原流行情况,2019—2021年,从聊城、德州、滨州等地的9个规模化驴场(繁育母驴100头以上),无菌采集表现不同临床症状病死驴(驹)的心、肝、脾、肺、肠、肾等不同脏器病料共计742份,采用PCR与病原分离方法进行常见马属动物病原检测;采集296份临床健康驴血液样品,采用虎红平板凝集试验进行布鲁氏菌感染抗体检测。结果显示:在腹泻症状样品中,大肠杆菌检出率最高,为48.89%(132/270);在肺炎症状样品中,大肠杆菌检出率为24.10%(80/332),肺炎克雷伯氏菌检出率为29.82%(99/332),马链球菌检出率为22.29%(74/332);在流产症状样品中,沙门氏菌检出率最高,为44.29%(62/140);在临床健康驴血液样品中,未检出布鲁氏菌感染抗体。结果表明,导致规模驴场发生腹泻、肺炎和流产的主要是条件性致病菌,其中导致腹泻的主要是大肠杆菌,肺炎的主要是大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和马链球菌,流产的主要是沙门氏菌。因此,规模化驴场应通过加强饲养管理,提高养殖圈舍卫生水平,科学使用抗生素等措施,控制细菌性疫病流行。近年来,随着驴的劳动功能向肉、皮、奶转移,我国的驴养殖数量也不断增加,现代大规模、集约化驴养殖场越来越多。但在一些地区,驴和牛、羊一起饲养,且饲养家畜频繁异地采购,跨区域运输,大大增加了疾病暴发和流行风险。目前,驴疫病的基础和应用研究薄弱,驴疫病病原体变异和传播的风险评估体系尚未建立,驴疫病综合防控服务体系不健全。对驴的呼吸系统疾病、感染性腹泻和流产的综合防治研究滞后,迫切需要一套完善的健康养殖保健技术规范,为驴养殖的产业化和可持续发展提供技术支持。目前国内尚未大规模开展规模化驴场疫病种类及其流行情况的流行病学调查,缺乏驴疫病流行病学数据,这对制定马属动物疫病防控策略造成了障碍。近年来,山东省建立了200多个规模化养驴场和扶贫驴场。在驴养殖密度越来越高、流动更为频繁的背景下,一旦发生疫病,将会给养驴产业造成严重经济损失。为了解山东省驴群中流行的主要病原,2019—2021年在山东省驴养殖密集区的9个规模化驴场,对引发腹泻、肺炎和流产的主要病原感染情况进行了调查,以期丰富山东省驴疫病的流行病学资料。

材料与方法

样品与试剂样品采集 2019—2021年,从聊城、德州、滨州等地的9个规模化驴场(繁殖母驴100头以上),无菌采集表现不同症状病死驴(驹)的心、肝、脾、肺、肠、肾等脏器病料共计742份(表1);随机采集临床健康驴血液样品296份,颈静脉无菌采血,每头驴采血量不少于 3 mL,装入灭菌瓶中,带回实验室分离血清。

 

主要试剂耗材 PBS缓冲液、2×Taq PCR Master Mix、ddH2O、DL-2 000 DNA Marker,均购自北京天根生化科技有限公司;EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit,购自北京全式金生物技术有限公司;FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit柱式DNA/RNA共提取试剂盒、M-MLV(H-)Reverse Transcriptase逆转录试剂盒,均购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司;虎红试剂以及布鲁氏菌阴阳性对照血清,购自中国兽医药品监察所。检测方法样品处理 脏器病料组织匀浆:称取0.2~0.5 g病料组织块,用预冷的生理盐水冲洗后,放入离心管中,用小剪子剪碎;加入组织研磨专用钢珠和预冷的生理盐水,用高通量组织研磨器10 000~15 000 r/min研磨制成10%组织匀浆,-80 ℃保存,用于提取样品的RNA和 DNA。腹泻症状样品检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和轮状病毒,肺炎症状样品检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、马链球菌、金黄色葡萄球菌、马流感病毒和马疱疹病毒,流产症状样品检测大肠杆菌、沙门氏菌、马疱疹病毒和马动脉炎病毒。血清制备:将非抗凝血液,室温或37 ℃环境下倾斜放置,待血液凝固后,3 000 r/min离心 5~10 min,上清液即为血清,小心将上清吸出,-20 ℃保存备用。样品DNA提取 按照EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit试剂盒说明书,进行病料组织匀浆的DNA提取。样品PCR检测 以提取的样品DNA为模板,以大肠杆菌、沙门氏菌、马链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌的特异性引物(表2)进行PCR扩增。反应体系(25.0 μL):2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL,ddH2O 9.0 μL,上下游引物各(10 mmol/L)1.0 μL,模板1.5 μL。反应程序:95 ℃预变性5 min;95 ℃变性40 s,57 ℃退火30 s,72 ℃延伸40 s,35个循环;72 ℃延伸8 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。

 

样品RNA提取 按照FastPure Viral DNA/RNA Mini Kit 柱式DNA/RNA共提取试剂盒说明书,进行病料组织匀浆的DNA/RNA共提取。RT-PCR检测 按照M-MLV(H-)Reverse Transcriptase逆转录试剂盒说明书进行逆转录后,对马疱疹病毒、马流感病毒和马动脉炎病毒和轮状病毒进行PCR扩增,产物经1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。引物序列见表3。

 

血清样品检测 按照虎红平板凝集试验说明书,对样品血清进行虎红平板凝集试验(RBPT),检测布鲁氏菌感染抗体。在阴、阳性对照血清成立时,方可进行样品血清的结果判定。血清在5 min内出现凝集现象,判定为阳性(+),无凝集现象,呈均匀一致粉红色,判定为阴性(-)。

结果与分析

病料样品PCR检测3年的统计结果(表4)显示:在腹泻症状样品中,检出大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和轮状病毒,检出率分别为48.89%、21.85%、11.48%和10.37%;在肺炎症状样品中,检出肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、马链球菌、金黄色葡萄球菌、马流感病毒和马疱疹病毒,检出率分别为29.82%、24.10%、22.29%、2.41%、12.65%和1.81%;在流产症状样品中,检出沙门氏菌、大肠杆菌和马疱疹病毒,检出率分别为44.29%、18.57%和3.57%。所有流产临床症状样品中均未检出马动脉炎病毒。

 

混合感染结果统计检测发现,同一样品中存在混合感染情况(表5),主要表现为大肠杆菌与其他病原的混合感染。

 

血液样品布鲁氏菌抗体检测对296份血液样品进行布鲁氏菌虎红平板凝集试验,未检出抗体阳性。

讨论

调查发现,目前危害山东省驴场生产的最主要疫病是细菌病,而条件性致病菌是主要病原,其发生率多数与驴舍环境、养殖密度、饲料质量和管理水平等有直接关系。细菌病给驴的规模化养殖带来巨大经济损失,因此规模化养殖条件下如何科学防控细菌病值得关注。细菌性病原导致的腹泻在驴养殖场普遍发生,主要致病菌是大肠杆菌。大肠杆菌不仅是引起肠炎和败血症的主要病原,也是引起驴驹严重腹泻、肺炎,造成驴驹大量死亡的病因,病死率为15%~20%。1982年,河南省发生了大规模马属动物腹泻疫情,41 374只马属动物中,有437只发病,发病率为1.1%,死亡319只,死亡率为73%,疫情的发生与饲养管理条件差密切相关,加上天气变化导致消化道内菌系失调,致病性大肠杆菌急剧增殖产生大量毒素,最终因败血症而死亡。2015—2018年研究发现,位于山东、新疆、辽宁和内蒙古的49个规模驴场4 755头驴驹的腹泻发病率为67.3%,病原为大肠杆菌。这与本调查得出的大肠杆菌为腹泻主要病原的结果一致。调查发现,在流产症状样品中,最主要的致病菌是沙门氏菌。研究发现,造成2013—2014年新疆地区2 768匹马发生流产的主要病原也是马流产沙门氏菌。近年来,欧美国家由于严格的养殖卫生政策,马流产沙门氏菌病发生率得到了很好的控制,但是该疾病在非洲和亚洲国家的马属动物中很常见,仍然是一个急需解决的问题。调查发现,不同症状样品中存在一定的病原混合感染,主要为大肠杆菌与其他病原的双重混合感染。混合感染可以加重病情,并导致出现复杂临床症状,这给疾病防治增加了困难。本调查未检测出布鲁氏菌阳性抗体,表明山东省规模化驴场布鲁氏菌流行率较低,同时也说明布鲁氏菌并非导致驴流产的主要病原。当前,对细菌病的预防与治疗更应注重科学。对于细菌病的预防,必须加强饲养管理,保证驴舍良好的环境条件,同时也可以通过接种疫苗来降低疾病发生风险。在治疗方面,细菌病主要通过抗生素药物进行治疗,但细菌极易产生耐药性,因此需要科学合理用药。在临床治疗中,建议用药前通过药敏试验筛选敏感抗生素类药物,同时配合中药以及噬菌体和益生菌等进行辅助治疗。

结论

调查发现,导致山东省规模驴场发生腹泻、肺炎和流产的主要是条件性致病菌,其中导致腹泻的主要是大肠杆菌,肺炎的主要是大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和马链球菌,流产的主要是沙门氏菌。因此,规模化驴场应通过加强饲养管理,提高养殖舍卫生水平,科学使用抗生素等措施,控制细菌性疫病流行。

文章来源:中国动物检疫     文章作者:高星熠等     文章编辑:一米优讯     
进入社区】【进入专栏】【推荐朋友】【收藏此页】【 】【打印此文】【关闭窗口
 相关信息
2021年我国驴业发展概况、现实困境与突围之路2022/10/27 9:16:03
聊城市组织开展全市驴良种高效繁育及配套饲养技术集成与示范项目中期验收和综合绩效评2022/7/18 18:33:56
驴对饲料的消化特点有哪些?2022/6/21 7:27:23
 发表评论   (当前没有登录 [点击登录])
  
信息发布注意事项:
  为维护网上公共秩序和社会稳定,请您自觉遵守以下条款:
  一、不得利用本站危害国家安全、泄露国家秘密,不得侵犯国家社会集体的和公民的合法权益,不得利用本站制作、复制和传播下列信息:[查看详细]
  二、互相尊重,对自己的言论和行为负责。
  三、本网站不允许发布以下信息,网站编辑有权直接删除:[查看详细]
  四、本网站有权删除或锁定违反以上条款的会员账号以及该账号发布的所有信息。对情节恶劣的,本网将向相关机构举报及追究其法律责任!
  五、对于违反上述条款的,本网将对该会员账号永久封禁。由此给该会员带来的损失由其全部承担!
声明:本网刊登的文章仅代表作者个人观点,文章内容仅供参考,并不构成投资建议,据此操作,风险自担。如果转载文章涉嫌侵犯您的著作权,或者转载出处出现错误,请及时联系文章编辑进行修正,电话:010-65283357。本网原创文章,转载请注明出处及作者。感谢您的支持和理解!

您可能感兴趣的产品更多>>

版权所有 现代畜牧网 Copyright©2000-2016 cvonet.com All Rights Reserved 京ICP备10042659号