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猪繁殖与呼吸综合征病毒北美经典株感染导致仔猪腹泻的诊断、治疗
曹礼静 1 *，张立武 2
（1.重庆市荣昌区职业教育中心，重庆?荣昌?402460；2.重庆三杰众鑫生物工程有限公司，重庆?荣昌?402460）
前言
在实际生产中，腹泻是引起仔猪死亡的主要原因，饲养管理不善、细菌、病毒、寄生虫感染等均能引起仔猪腹泻。仔猪腹泻是多因一果，如无实验室检测确诊病因和采取针对性的治疗方案，将造成较高死亡率。2022年6月，四川省南充市某养殖场外购27日龄仔猪1356头，该批仔猪在进场后6 d开始零星发病，主要临床症状为消瘦、精神沉郁、发烧、食欲减退、拉稀糊样至水状粪便、被毛被粪便污染（图1），该场用多西环素、甲硝唑、黄芪多糖中药提取物等药物拌料给药治疗5 d无效并迅速波及全群，发病后4 d开始出现死亡病例，至发病后9 d，死亡仔猪293头，死亡仔猪消瘦、剖检见肠系膜和腹股沟淋巴结肿大以及间质性肺炎。发病后10 d，该猪场送病料至作者单位，经对常见致猪腹泻病原实验室检测，确诊致病病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒北美经典株。进行实验室诊断期间（发病后10-11 d），又新增死亡仔猪38头。于发病12 d后根据实验室诊断结果，采取针对性治疗，治疗后5 d，全群仔猪痊愈，治疗期间仅死亡17头重症病猪，现报道如下，供参考。
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材料与方法
1.1 血清与病料
用一次性无菌注射器经前腔静脉随机采病猪血液12份，采血量3-5 mL/头，转入灭菌离心管中密封，于4℃冷藏2 h后，于4℃条件下3 000 rpm离心25 min，吸取上层血清，用灭菌离心管盛装、标记；采集死亡猪肺脏和肠道内容物，各取样3头，用采样袋盛装、标记。上述病料于-20℃冷冻，加冰袋、用泡沫盒密封后送样检测。
1.2 致病性大肠杆菌分离鉴定
将肠道内容物用灭菌生理盐水按质量体积比1:5稀释，取适量分别在LB固体培养平皿和麦康凯平皿上划线，37℃培养24 h，取生长的单菌落分别进行革兰氏染色镜检、生化鉴定和与致病性大肠杆菌O25K19、O78K80、O138因子血清进行凝集试验，判断是否为致病性大肠杆菌。
1.3 血清抗体检测
病猪血清样品12份，分别用猪伪狂犬病毒gE抗体ELISA检测试剂盒、猪伪狂犬病毒gB抗体ELISA检测试剂盒、猪圆环病毒抗体ELISA检测试剂盒、猪繁殖与综合征病毒抗体ELISA检测试剂盒，按试剂盒操作说明，检测相应抗体滴度。
1.4致仔猪腹泻主要病毒检测
取死亡猪肺脏3份，按《SN/T 1446-2010猪传染性胃肠炎检疫规范》、《SN/T 1699-2017猪流行性腹泻检疫技术规范》、《SN/T 5196-2020猪轮状病毒感染检疫技术规范》、《GB/T 35912-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法》，对每份病料分别进行上述4种病毒的检测，检测用仪器为荧光定量PCR仪Archimed-X4，检测用试剂盒生产厂家/批号为全式金/Q20126。
猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒判定：在阴阳性对照成立条件下，FAM通道CT值≤35，且具有典型的S型扩增曲线，判为猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒核酸阳性；35＜FAM通道CT值≤40，判为可疑；FAM通道CT值＞40或无CT值，判为阴性。
猪繁殖与呼吸综合征病毒判定：在阴阳性对照成立条件下，FAM通道CT值≤35，且具有典型的S型扩增曲线，判为猪繁殖与呼吸综合征病毒北美经典株核酸阳性；VIC通道CT值≤35，且具有典型的S型扩增曲线，判为猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病变异株核酸阳性；35＜FAM/VIC通道CT值≤40，判为可疑；FAM/VIC通道无CT值，判为阴性。
1.5 发病仔猪治疗
根据上述检测结果，制定相应的治疗方案如下：（1）带猪对圈舍用聚维酮碘溶液消毒2 h后，将全群病猪转移至另外一栋经消毒处理的空置保育舍，每个保育床约20头，加强饲养管理（圈舍每日消毒2次、清扫1次，圈舍通道口搭建临时紫外线消毒室、设消毒脚垫）；（2）在饲料中按说明书用量添加泰乐菌素和强力霉素连续饲喂5 d控制细菌继发感染；（3）全群猪肌注转移因子2 mL+猪干扰素α30万U/头，每天1次，连用3 d；（4）对个别发烧超过40℃的猪肌注30%安乃近注射液5 mL/头，仅用1次；（5）用温的补液盐水按体积质量比3:1稀释治疗仔猪腹泻中药散（重庆三杰众鑫生物工程有限公司研制），以治疗仔猪腹泻中药散质量计，全群病猪灌服8-10 g/头，每天1次，连用3 d。
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结果
2.1 致病性大肠杆菌分离鉴定
3份死亡猪肠道内容物在LB固体培养平皿和麦康凯平皿上培养，生长的单菌落经革兰氏染色镜检、生化鉴定和致病性大肠杆菌O25K19、O78K80、O138因子血清凝集试验，排除了致病性大肠杆菌。
2.2 血清抗体检测
12份病猪血清样品的猪伪狂犬病毒gE抗体、猪伪狂犬病毒gB抗体、猪圆环病毒抗体、猪繁殖与综合征病毒抗体结果见表1。结果说明该批仔猪的伪狂犬病毒阴性，但伪狂犬病毒抗体阳性率偏低，存在被感染风险；猪圆环病毒抗体阳性率较高，可抵御猪圆环病毒感染；猪繁殖与综合征病毒抗体阳性率高且离散度大，提示该抗体的产生可能来源于猪繁殖与综合征病毒野毒感染而非疫苗接种，但有待于猪繁殖与综合征病毒核酸检测的进一步确认。
2.3 致仔猪腹泻主要病毒检测
3份死亡猪肺脏的猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病变异株均为阴性，猪繁殖与呼吸综合征病毒北美经典株均为阳性（表2）。
2.4发病仔猪治疗
开始治疗前，剩余猪的数量是1 025头，全群猪精神沉郁、水样腹泻、采食量。与治疗当日比较，治疗后1 d开始，全群猪精神状态、粪便形态、采食量逐日好转或提升，死亡率逐步下降，至治疗后3-5 d，全群猪各项指标基本恢复正常，无猪死亡（表3）。观察至60日龄，全群猪均未复发腹泻和未再死亡，猪发育良好（图2）。
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讨论
猪繁殖与呼吸综合征病毒有2个血清型，即美洲型和欧洲型，我国分离到的毒株为猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型及其变异株，该病毒对酸、碱都较敏感，尤其很不耐碱，一般的消毒剂对其都有作用，断奶仔猪染病后，主要表现为厌食、嗜睡、咳嗽、呼吸困难，有些猪双眼肿胀，出现结膜炎、腹泻、关节炎、耳朵变红、皮肤有斑点等。猪繁殖与呼吸综合征的诊断依赖于血清抗体核酸检测，临床上没有特效药物用于猪繁殖与呼吸综合征病毒病治疗，只能采取消毒和退烧、抗病毒、止泻、防细菌继发感染等对症治疗的办法加以控制。
在本发病猪场中，通过剖检病死猪、采集肠道做组织切片观察，发现肠道上皮绒毛几乎完全脱落，肠道已基本失去消化、吸收功能，饲料在肠道内不能被消化吸收，进一步造成了代谢性腹泻，从而加重了仔猪脱水，进而导致死亡。基于实验室检测结果和发病仔猪的临床症状、病理变化，采取了对圈舍和病猪消毒的方式来减少环境中的病毒载量，对个别发烧严重的猪肌注安乃近注射液退烧，在饲料中添加抗生素控制细菌继发感染，用转移因子、猪干扰素肌注增强机体抵抗力、非特异性地抑制病毒复制从而达到减少机体的病毒载量，用口服补液盐水稀释治疗仔猪腹泻中药散。上述综合方案到达了缓解症状、控制继发感染、增强机体免疫力、抑制病原、清热燥湿、泻火解毒、利水消肿、生肌收口、收敛止痢、修复受损伤的肠道上皮细胞，达到快速止泻的目的，产生了较好的治疗效果，全群猪采食量逐步上升至正常水平，停止腹泻和死亡。
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