伊犁地区某猪场猪支原体肺炎的诊断和综合防治措施

现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2023/3/31 9:28:16 关注：803 评论： 我要投稿

  伊犁地区某猪场猪支原体肺炎的诊断和综合防治措施

皮志媛，何晓杰，张海兰，吴晓荣，王传锋 *
  （伊犁职业技术学院，新疆 伊宁 835000）

  近年来，随着生猪市场发展的良好态势，伊犁地区生猪养殖业发展迅速，生猪的规模化养殖基本替代了传统散养户，生猪的繁育水平和出栏量也得到了稳定提高，部分规模化的猪场积极拓展繁育范围优化生产经营方式，逐步向生猪规范化养殖场方向发展。但随着饲养数量的不断扩大，生猪的引种和流通不断的扩大，将使动物疫情的防范和管理加大困难，产生潜在危害，特别是猪支原体肺炎感染，大量研究数据表明感染猪支原体肺炎的病猪除会引起饲养效率显著下降、产量和繁殖速率明显降低之外，还容易继发感染其他呼吸道疾病如猪流感、猪圆环病毒2型等，由此引发猪呼吸道疾病综合征（PRDC），是造成猪场经济损失的主要原因之一。在对伊犁地区生猪养殖场进行调研时，发现疑似猪支原体肺炎的病例，对其运用PCR技术进行确诊，分析提出本地规模化猪场对该病的综合防控方案，为本地规模化猪场预防和控制该病提供一定的理论依据。
  1  病例
  伊犁地区某猪场现有存栏繁殖母猪600多头，多为二元猪和三元猪，是本地区规模较大的生猪养殖场之一。2021年10月伊犁地区天气逐渐转凉，早晚温差变化较大，与此同时受疫情影响，猪只无法正常转运，圈舍密度较往常明显加大，发生呼吸系统症状情况更加严重，幼龄仔猪和繁育母猪多发，仔猪症状明显，体质较弱、症状严重的甚至可引起死亡。依据患病猪只的临床症状初步诊断多数病猪是以猪支原体肺炎感染所致，为进一步确诊Mps，现场采集发病症状明显的仔猪肺脏病料送伊犁职业技术学院动物疫病检测重点实验室进行诊断。
  2  临床症状
  患病仔猪多为断奶后的保育猪，病猪普遍出现干咳、特别是晨咳严重，同时伴有气喘、呼吸困难、腹式呼吸、食欲减退及背毛粗乱等症状，体温基本无变化，病情严重可引起仔猪窒息死亡，患病仔猪多生长缓慢，消瘦。剖检病死猪发现肺脏病变显著，界限分明，多在双侧肺的心叶、尖叶等部发生灰白色的虾肉样变。肺门淋巴结肿大，切面湿润。心脏、脾脏等其他组织脏器变化不大。
  3  实验室分子生物学诊断
  3.1 采样
  无菌采集发生明显呼吸道症状的病猪肺脏，共计10头份，置于无菌密封袋中，送至伊犁职业技术学院动物疫病检测重点实验室，于-20℃以下保存待检。
  3.2 试剂
  猪肺炎支原体疫苗株（购自南京天邦生物科技有限公司）；DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue Kit，采购自上海速徕生物科技有限公司；10×Buffer、25 mmol /L MgCl2、2.5 mmol /L Mg2+、dNTPs、2.5U Taq酶购自大连宝生物工程有限公司。
  3.3 主要仪器
  PCR仪（型号为 MG25+）购自上海珂淮仪器设备有限公司；凝胶成象分析系统（型号为ZF-258型）购自上海嘉鹏科技有限公司；酶标仪（型号为RT-6000）购自深圳雷杜生命科学股份有限公司；电泳仪（型号DYY-6D）购自北京六一生物科技有限公司；高速离心机（型号为TG16G）购自杭州川一实验仪器有限公司；涡旋振荡器（型号为Lab Dancer），购自深圳市科力易翔仪器设备有限公司；恒温水浴锅（型号为DZKW－S－8），购自北京亚欧德鹏科技有限公司。
  3.4 DNA提取
  采集的肺脏病料进行处理后待检，阳性对照选用猪肺炎支原体疫苗株。按照DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue Kit的说明书提取待检样品的DNA，用于PCR扩增。
  3.5 引物设计
  参照 GenBank中登录的基因序列，设计猪支原体肺炎引物，引物扩增长度为287 bp，引物序列为：P1：5'-CCGTTGAAGCCTTGCTGTAT-3'，P2：5'-CGGTTAGTGTCTCCCGTTATG-3'；引物由TaKaRa公司合成。
  PCR反应体系：PCR反应体系（ 25 μL ）：10 × Buffer 3 μL，10 mmol /L dNTPs 0.6μL，上下引物各1 μL，模板2 μL，Taq酶 0.3 μL，补ddH2O至25 μL。PCR反应条件为：94℃ 3 min；94℃进行变性30 s，54.6℃退火30 s，72℃延长40 s，30个循环，72℃延长10 min，4℃保持。PCR产物在1%琼脂糖凝胶电泳后用紫外凝胶成像系统拍照记录结果。
  4  结果
  从猪场10 头具有典型症状的病猪肺脏病料DNA 模板中均扩增出大小为287 bp的明显的条带，与阳性对照相符。说明这10头发病猪均为Mps感染。阴性对照为灭菌水，无任何扩增条带。
 
  依据猪场发病经过、临床症状及PCR检测结果，均表明引起该场生猪发生呼吸道症状的病原是Mps，确诊为猪支原体肺炎感染。
  5  综合防治措施
  5.1 治疗措施
  猪支原体肺炎感染采用西药和中药联合给药对本病有较好的治疗效果。西药治疗主要选用药敏实验筛选出的对猪支原体肺炎敏感的药物如四环素类、林可酰胺类、喹诺酮类等，可使用替米考星+多西环素，同时联合中药板青颗粒，按照每吨饲料加入上述药物各1 kg进行拌料给药，共同使用对治疗本病效果较好；急性病例可交替使用林可霉素+恩诺沙星进行肌肉注射。预防给药主要针对分娩后及妊娠后期的母猪可用泰秒菌素，也可用中药预防。
  5.2 预防措施
  引起该猪场发病的主要原因是气温骤降情况下，饲养密度大，空气不流通，饲养管理不当。因此首要解决场内饲养管理问题，建议在做好场内生猪转运工作的同时考虑重新规划场区建设，对闲置的圈舍进行改建或加盖猪舍、保育舍并配备必要的仪器设备，保证圈舍温度适宜、空气流通和舍内的干燥度，减少圈舍养殖密度，合理分配生猪，必要时按不同体况和日龄分栏饲养，做好舍内卫生工作，粪便及时清理，使生猪能在较好的舍内环境下健康生长。对病猪要采取隔离饲喂，养殖圈内的所有用具及粪便等进行紧急消毒，对隔离圈每天都要进行消毒，圈内动物的分泌物、粪便和废弃物等也要实行无害化处置。
  对未发病的猪进行猪支原体肺炎疫苗接种，是预防支原体肺炎在场内大范围感染和传播的重要手段。猪场要重视猪支原体肺炎免疫接种工作，将其加入到场内日常免疫工作中，从疫苗的选择、采购到接种方法、免疫的剂量都要严格把控，制定合理有效的免疫接种方案，一般仔猪首免支原体活苗于 7～21 d之内在头颈部肌肉注射；灭活疫苗是仔猪14～21日龄在头颈部肌肉注射。为避免支原体肺炎的垂直传播，在母猪配种前还需进行一次疫苗免疫。与此同时猪场还要做好疫苗免疫的检测工作，对免疫失败的生猪进行复免。
  为进一步减少猪场在养殖过程中发生猪支原体肺炎的感染，猪场还需做好生猪的引种工作。猪场自繁自养是避免疫病发生的重要管理模式，如需引种，要做好引种地区的流调，加强引产地生猪的产地检疫、运输检疫，减少应激反应对生猪的影响。对进场的生猪进行严格的隔离管理，后备猪至少隔离8周以上，以此降低引种带毒猪的风险。同时猪场要加强场内人员的的管理，定期对人员进行培训，严格落实出入制度，减少外来人员进出，车辆进出做好消毒，避免疫病传播。
  采用上述治疗和预防措施后，该场病猪症状缓解、病症减轻，猪场整体发生支原体肺炎感染情况显著好转。后续追踪调查，该场生猪呼吸系统疾病明显减少，场区效益得到很大提高。
  6  讨论
  猪支原体肺炎是生猪养殖过程中呼吸道综合征的“门户病”，可继发感染多种呼吸道疾病，降低饲料利用率，造成生猪生长缓慢，影响猪场快速向好发展。因此养殖场应对本病予以重视，采用一系列科学合理的防疫对策，预防本病，提高经济效益。