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闫之春：非洲猪瘟弱毒株的田间多样性
现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2023/4/5 19:31:37 关注：541 评论： 我要投稿
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非洲猪瘟弱毒株的田间多样性
2023年3月24日，在第11届中国李曼养猪大会期间，山东新希望六和集团首席科学家闫之春老师也给大家带来了《非洲猪瘟弱毒株的田间多样性》的报告，现将听课内容整理如下。
非洲猪瘟在我国暴发流行已经有四年多时间了，经过养猪人及兽医从业者的努力，我国总结了一套较为有效的非洲猪瘟防控方案，即通过“全面检测+精准清除”来保证大多数阴性猪群不被感染及扑杀，为保障生猪的产能供给作出了重要贡献。
但从2021年10月开始，非洲猪瘟的流行又出现了一些新的特性01
新特性主要表现有
（1）从2021年10月开始，东北、华北等北方平原地区，新发生疫情的母猪场急速增多；发病猪群的临床症状轻微，检测的阳性样品Ct值较高。
（2）采用原来的净化处置方法，净化阳性场所需时间明显变长。阳性场处置转阴之后，经过15-25天，又会转阳，甚至多次反复。
（3）有的场没发现异常猪，就莫名检测到ASFV核酸阳性。有轻微临床症状的猪样本，检测发现病毒含量很高，Ct值可低至24。确诊发现是野毒!
（4）检测发现Ct值在25左右，很多猪没有症状，也没有死亡。低Ct值猪只，剔除后多天仍未见死亡。
（5）在首次检出阳性1周后，猪舍灰尘中经常检出病毒核酸。
针对以上非洲猪瘟出现新的问题，闫老师从非洲猪瘟的病原学特点、变异情况、感染方式、临床症状、检测手段等方面提出一些疑问，并从实验研究数据和田间观察到的一些数据及分析中，得出了一些结论。
新流行非瘟疑难问题及分析
01
是否存在低剂量感染造成轻微症状 ，
异常猪难以发现？
非洲猪瘟的典型症状必须依靠对阴性猪进行攻毒试验来观察确定，攻毒后症状包括厌食、发热、躺卧、皮肤出血/紫绀、关节肿胀、呼吸困难、腹泻/血便等。在生产和临床上，每次出现的症状会有差异。
对阴性猪的攻毒实验观察结果显示：不同攻毒剂量下，病毒血症开始出现的时间即是临床症状出现的时间节点；攻毒剂量不影响病毒血症出现的时间和临床症状出现的时间。病毒血症与发烧等临床症状同时出现。
02
生产条件下“检测+清除”，
是否会导致大量不间断的交叉污染？
这个疑虑从之前的“全面检测+清除”的经验来看，可以打消，因为并未造成大面积的猪群感染及规模缩减。迅速全检风险很小，不会造成大的污染。非洲猪瘟在群内传播很慢，个别猪感染后，在群内往往只感染临近猪。如果只采样检测异常猪不能完全消除传染源。在7天潜伏期内，再次检测基本可消除隐形感染猪。
补充一下个人观点，在异常场线全面采样的操作细节中，也有一些值得注意的事项。口鼻拭子个体采样，需要逐头更换工具及手套，采完一头消毒后再采下一头。避免做保定猪只采血等容易造成交叉污染的操作，可以采用尾根采血的方式。
03
是否ASF病毒出现了很大变化?
ASFV全基因组长度约170-193 kbp，基因组中段为125kb的保守段，其中就有编码P72蛋白的B646L基因。P72、P54、P30蛋白均与病毒侵入细胞有关。基因组两端为多变的多基因家族（MGF），MGF区的突变、缺失是病毒毒力致弱的基础。CD2v是由EP402R决定的44个氨基酸，CD2v与宿主CD2v相似，与红细胞吸附感染细胞有关。
基于高通量基因组测定新技术，对非洲猪瘟病毒的毒株流行情况，有了新的认识。2021年10月首次检出野毒的田间自然变异株，有些毒株的毒力明显降低。存在着高毒力野毒和自然变异弱毒并存的现象。在难以处理的猪场阳性生产线，ASFV毒株存在明显的MGF段的大段缺失+多处基因突变。
根据张桂红研究室/国家ASF南方中心的接样检测数据发现，传统野毒、人为基因缺失毒株、自然缺失毒株、嵌合毒株都有检出。由于自然变异/缺失株的出现，通过传统的鉴别检测试剂盒来排除野毒或疫苗毒株、以及进行分型（I/II）的方法，已经没有意义。
同时，可以认识到：
（1）自然缺失毒力大为减弱，感染猪临床无异常；（2）“常规的异常猪”检测手段，难以及时发现猪群已经感染。
（3）仅仅剔除异常猪不能快速及时净化。
04
是否采样方法/样品不对，导致难以发现抗原阳性猪？
通过弱毒场线栏位表面环境采样与血清采样的检测结果比较发现，弱毒场线栏位表面环境检测特异性高，敏感性低（阴性相符的特异性为95%，阳性相符的敏感性为25%）。为提高弱毒检出率，采用两次全群采血间筛查，可有效判断猪只是否处于阴性状态。血样仍是最适合的检测样本。
05
是否感染猪存在间歇性散毒，导致阳性猪有时成了阴性？
临床检测数据发现：（1）弱毒感染猪血清持续阳性，但鼻拭子、肛拭子和咽拭子出现间歇性排毒情况，可以说明猪只是阳性但是咽拭子检测不到。（2）同居猪的血清检出率较低，但是鼻拭子、咽拭子与攻毒猪也出现同样的病毒检出时间双峰，其原因可能是感染猪排毒时同居猪在摄入病毒。
弱毒的临床症状非常轻微，几乎所有样品中都存在间歇性排毒。单一样品、一次全检不一定能检出，因为每次全群检测时阳性猪不一定正在散毒。发现弱毒感染的场线，首次采样最好“咽拭子+血液”双来源，同时一个潜伏期内检测2次。
传统野毒与多毒力基因缺失的野毒株的感染，处置方法完全不同。发现阳性感染后，应尽快鉴定毒株类型，可大大节约检测与清除的资源，决定净化效果。
06
其他国家的是否也发现弱毒株？有基因变异吗？什么特点？
其他国家也有报道发现ASFV弱毒株，在波罗的海地区的爱沙尼亚，发现的弱毒株，其5’端MGF区存在缺失，3’端存在反转。使用发现的弱毒株，攻毒12头小型猪，5头家猪，5头野猪。结果，75%的小型猪和所有家猪均在出现急性症状后，存活了。但是所有野猪17天内陆续死亡。
弱毒株攻毒后，检测口咽拭子、肛拭子qPCR阳性出现的时间晚，持续时间短。
也有研究报道，在格鲁吉亚出现了新的、低毒力的毒株，这使得被动检测发现感染猪，变得更加困难。
总结
（1）2021年下半年开始，已发现多种非洲猪瘟田间毒株的基因组中，毒力基因出现多处缺失，致病性已经变异、变弱，防控形势正在发生重大变化。不再是“高致死力野毒＋人工缺失弱毒”并列，而是已经出现多种、多基因自然缺失的弱毒株，高致死力的野毒已经不再常见。
（2）各种受控试验和在我国的田间观察均发现，无论是强野毒、人工（单/双/多）缺失弱毒，还是自然大段缺失的弱毒，猪群均无法与之共存。弱毒感染猪，经过更长时间，均会出现严重的ASFV发病症状。
（3）通过“全群检测+精准清除”，均有成功净化的范例。“全群检测+精准清除”成功的关键是，确诊后24h内完成全群检测+离群。每晚一天都会付出超大代价。
（4）需尽快改进的方法：①尽早发现感染的快速方法；②快速全群检测的方法；③快速无污染将感染猪/接触猪隔离或离群的方法。
（5）中期看，有效预防、控制ASF，仍将是养猪业盈亏/存亡的不二法门图片
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| 文章来源：中农华大检测平台 文章编辑：一米优讯 |
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