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血清驯化在规模猪场蓝耳病临床防控的进展


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2023/6/9 9:12:59 关注:685 评论: 我要投稿

新希望六和——生物环保饲料

  血清驯化在规模猪场蓝耳病临床防控的进展
  孙少辉 1,李 智 2,万 进 1,白东宁 3,马妮妮 1,朱光山 1,张少南 1,王  聪 1 *

(1.中牧实业股份有限公司,北京 100070;2.南京博维特健康管理有限公司,江苏 南京?210031;3.陕西省西安市动物疫病预防控制中心,陕西 西安 716100)

    猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS),俗称“猪蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)引起的一种严重危害全球养猪业的重要传染病。据美国行业协会统计,美国养猪业每年因PRRS导致的经济损失为5.6亿美元。PRRSV基因型分为基因1型(欧洲型)和基因2型(美洲型),而我国大多数流行毒株为基因2型,但在个别省份也有检测到基因1型。20世纪90年代初,PRRS在中国首次暴发,给中国养猪业带来巨大损失;2006年,高致病性猪蓝耳病毒(HP-PRRSV)的流行给我国养猪业再次造成严重影响,造成当时猪价居高不下。2013年之后,国内出现的类NADC30毒株及其衍生的重组毒株已成为我国田间主要流行毒株,且当前商业化的PRRSV疫苗对此类毒株不能提供完全免疫保护力。2017年发现的类NADC34株,致病性相对较弱,其与类NADC30毒株也有重组病毒,值得注意的是,高致病性毒株感染猪的血清无法中和类NADC34毒株,而类NADC30毒株驯化场,也会因为感染类NADC34毒株导致猪群流产。同时,国内不同种类PRRSV弱毒疫苗在猪场无序使用,促进了多种PRRSV毒株在猪体内的重组,使猪场PRRS防控越来越复杂化。面对PRRSV复杂多样的变化,目前尚无单独的一种方法或手段就能够有效控制住蓝耳病,临床生产中仍需要采取综合防控措施来降低或减少蓝耳病对猪群造成的经济损失,主要措施包括生物安全、疫苗免疫、药物保健、分点饲养、全进全出、封群管理和血清驯化等。
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  PRRS血清驯化的原理和方法介绍
  近年来针对某些棘手的猪病毒性传染病如猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)、PRRS,采用含有低剂量病毒载体感染猪群使猪群获得相应保护力的这一驯化方式已在业内开展应用,如针对PED的病料返饲、针对PRRS的血清驯化均已得到实例支撑。PRRS血清驯化已成为近些年规模化猪场临床PRRS防控有效手段之一,并得到越来越多的猪场负责人和兽医的选择支持。PRRS血清驯化即先借野毒感染或疫苗接种的契机,使得猪群感染某种特定血清型PRRSV毒株,然后收集该毒株阳性血清,按照一定稀释比进行稀释后接种感染至全群,产生整齐度高且具有保护力水平的抗体以阻断猪群排毒,并保护未感染的猪群,从而实现对猪场中PRRSV的控制。国内外已有多篇学术期刊详细报道了血清驯化对猪蓝耳病的防控效果,采用该方法的猪场相继成功建立起PRRS阳性稳定场,猪群生产成绩得到有效改善,取得了较好的经济效益和回报。杜兴乾等的研究详细阐述了该方法的步骤及注意事项:第一,猪群疾病感染状态的确定,对驯化用血清进行病原学检测,确保其他疾病如口蹄疫、猪伪狂犬、猪流行性腹泻、经典猪瘟、非洲猪瘟、猪圆环病毒等疾病病原阴性,仅PRRSV抗原阳性;第二,对PRRSV毒株进行测序,通过遗传演化分析毒株同源性差异及致病力,确认猪场感染的PRRSV毒株是否是本场或区域内近几年优势流行毒株类型,若该流行毒株致病力不强,则取感染猪的抗原阳性血清大量制备驯化用血清;第三,通过试验确定驯化血清最佳稀释比例,以保证驯化后猪群能在短时间内(2~3周)产生高水平抗体,同时确保PRRS临床症状较为温和,无严重应激、流产等症状。该研究通过对阳性血清以1:250的比例稀释后,对后备母猪进行肌肉注射,检测发现机体产生了高水平的PRRSV抗体,同时不会使后备母猪排毒。
  采用上述方法驯化后备母猪一个月后,PRRSV抗体转阳的比例逐渐升高,3个月后,接受驯化的60头母猪全部产生对PRRSV有保护力的抗体,驯化一年后该猪场能繁母猪存栏数、母猪流产比例、平均每月母猪死亡数、产木乃伊比例、窝均断奶仔猪数等相比驯化前均有所提升。
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  应用PRRS血清驯化法的典型案例
  阳性血清中的PRRSV病毒载量的选择是整个血清驯化过程中核心点之一,合理的阳性血清稀释比例对驯化成功起着至关重要的作用。刘德清等通过倍比稀释法将原始血清稀释,获得了一系列梯度(1:100—1:3 000)浓度的稀释血清,随即对各梯度血清提取RNA,采用Quantitative Real-time PCR(qPCR)方法对RNA物质进行扩增,试验结果发现,当稀释度大于1:1 200时qPCR检测不出病原,其将检测限1:1 200的10倍浓缩量,即1:120设为最终的驯化血清稀释比。该试验团队利用1:120稀释比例驯化后备母猪,无排毒现象,猪群健康度与疫苗免疫后备母猪组(对照组)相同,试验组与对照组的N蛋白抗体阳性率分别为100%和99.3%,其中疫苗免疫组产生抗体水平集中度高、离散度低,血清驯化组抗体S/P值高,两个组别母猪的生产成绩及仔猪的育成率均较好,且两者之间生产成绩差别不大。杨玉坚等研究表明,将阳性血清以50倍浓度稀释,对每头后备母猪肌肉注射2 mL,虽表现出很好的驯化结果(抗体阳性率100%、PRRS病程显著缩短),但是猪只初期PRRS症状明显,有一定风险。周庆华等对高致病性猪蓝耳病病毒感染猪场进行的阳性血清驯化试验表明,血清驯化能使种猪群短时间内获得较好的PRRS抗体水平(试验猪群阳性率100%,30份血清S/P值平均值2.13),能大幅缩短种猪群PRRS感染的持续时间,此外该试验母猪群产活仔率也较驯化前大幅提升,母猪的繁殖性能也有提升。该猪场在使用血清驯化后的两年内都获得了良好繁殖与生产性能,使用血清驯化方案约两年后,该猪群PRRSV抗体阴性比例持续上升,猪群出现PRRS感染风险。周庆华的研究表明,血清驯化是猪场控制PRRS的一种切实可行的方案。杨玉坚等对HP-PRRSV感染的阳性猪场的血清驯化表明该方法的紧急防控效果优于疫苗免疫法和自然恢复法,虽然驯化前期有一定损失,但可以显著缩短疾病持续时间。
  伍少钦等对广西良圻原种猪场十多年的血清驯化防控PRRS经验表明,对于空气过滤猪场,通过加强生物安全防控,引入PRRS双阴(抗原和抗体)性种猪,是可以长期保持猪场PRRS阴性。对于非空气过滤猪场,通过对后备母猪采用阳性血清驯化,对保育猪部分清群的措施,是可以达到保持猪场PRRS稳定的目的的。对于一直使用疫苗免疫的猪场,突然改用血清驯化,初期会有后备母猪流产等波动现象,但驯化结束以后生产很快趋于稳定。该研究指出,为了达到蓝耳驯化的良好效果,应提前做好引进后备母猪的计划,避免出现猪群配种生产断档现象,对条件满足的猪场,建议一次性补足6个月后备母猪,驯化后蓝耳抗原阴性(抗体阳性)猪只方可进入配怀舍,封群驯化期间21 d、42 d分别采血检测,驯化后最快38周可生产阴性猪。
  因未严格执行PRRS血清驯化法的所有步骤从而导致驯化失败的案例亦有报道。孙龙等的试验团队通过制备的两个驯化血清(血清A、血清B)与疫苗进行对比,分析驯化4个月后的生产数据,发现疫苗组、血清A组、血清B组的断奶仔猪存活率分别为89.07%、76.30%、81.26%,临床观察发现血清驯化组母猪出现一定比例的流产、产死胎、产木乃伊胎,而疫苗免疫组则安全性较高。该研究未详细介绍驯化血清的制作过程,未考虑驯化血清的PRRSV病毒载量及毒株类型这两个关键因素,驯化血清中病毒载量高可能是造成驯化血清“毒力大”的原因。
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  血清驯化成功的“关键点”
  同时,有专家学者对阳性血清驯化中的四个关键点给出了“提示”。首先,进行阳性血清驯化前应该严格检测血清中非洲猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环、猪瘟、猪流行性腹泻等疾病病原为阴性,防止后期驯化时造成上述疾病传播;其次,用来制备阳性血清的种公猪必须保证PRRS抗原抗体阴性,以排除种公猪体内原有PRRS抗原抗体对注射的阳性血清产生干扰作用;再次,驯化血清稀释比例问题,稀释比例过高或过低都将产生潜在风险。稀释比例过低将导致血清PRRSV病毒载量过高,极大可能导致后备母猪产生严重的蓝耳临床症状。稀释比例过高将导致PRRSV病毒载量低,可能无法刺激后备母猪短时间内产生高水平抗体,PRRSV的抗体依赖性增强效应(Antibody-Dependent Enhancement,ADE效应)将导致PRRS的暴发;最后,对待血清驯化的后备母猪需在驯化前进行抗生素保健,如在驯化前一周使用阿莫西林和泰万菌素对猪群进行饮水加药,以控制细菌继发感染和抑制后备母猪体内PRRSV病毒复制,解除猪只的免疫抑制,为后续驯化操作提供较好的猪群状态。
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  血清驯化法的优缺点
  4.1 血清驯化法优点
  杜兴乾的试验发现,血清驯化能缩短种猪群PRRSV的持续感染时间,使种猪群在较短时间内获得较高的抗体水平,该发现与周得清等的试验结论基本一致。
  此外,血清驯化可以确保猪群PRRS感染的一致状态,驯化血清的毒株单一性可以得到一致性抗体,能一定程度提升母猪群的繁殖性能和生产成绩;单一毒株的血清驯化可以使猪群获得高水平保护力,虽然对类NADC30毒株的交叉保护有限,但猪群已处于PRRSV阳性稳定场,驯化毒株已成为猪群PRRSV优势流行毒株,可降低或阻止其他PRRSV毒株的感染风险。
  张宁等研究发现在确定猪场只有一种PRRSV毒株流行时,是十分适合用血清驯化方法代替疫苗免疫方案达到防控PRRS的目的,该方法同时具有成本低廉、操作简单的优势。
  4.2 血清驯化法缺点
  驯化血清的病毒毒力难以精准定量,毒力过强可能导致猪群出现严重的临床表现,毒力过弱可能影响驯化效果。曹玉美的研究表明,20个PRRS病毒拷贝数就可使PRRSV阴性猪成功感染,24 h后即可检测到PRRSV抗原阳性,一周后即可检测到PRRSV抗体阳性。因此,通过荧光定量PCR法确定驯化用血清中的病毒载量以及小群临床实验确定血清最佳稀释比例(最低病毒载量)是血清驯化中比较安全的操作选择。
  血清驯化后,该场流行毒株有可能出现毒力返强风险,进一步加重PRRS的影响。PRRSV是易突变的RNA病毒,在猪场持续传播多代后有毒力返强的风险,所以在实际驯化操作中,需时刻关注猪群驯化后临床症状,如何降低本场驯化用PRRSV毒株的毒力,同时提高病毒的感染能力,达到用较低剂量的病毒即可使猪群转阳,且不导致严重的临床症状,是临床生产中要考虑的重点问题之一。
  血清驯化对猪场的疾病健康管理、生产管理以及团队的自信心要求很高,一般规模化的猪场多种疾病迸发,生产管理水平欠缺,技术体系薄弱将不利于血清驯化的成功。
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  血清驯化法的未来应用前景
  综上,随着PRRSV在国内的流行不断变异,我国猪场PRRS防控压力仍然很大,也给科研人员、临床兽医和疫苗研发者不断提出挑战,仍需更多临床实践和理论研究相结合。对猪场而言,PRRS防控需要结合猪场自身实际情况以及PRRS感染状态进行综合考量,实现PRRS稳定乃至净化的目标。当前行业内,尽管净化母猪群和生长猪群中的PRRSV是一种可行且有效的控制策略,但是对很多规模化猪场来说,净化蓝耳病依然是极具挑战性的。猪群实现蓝耳病的净化可以通过多种不同的策略来实现,例如:清群/重新组群或免疫-封群管理等。通常来讲,猪场生产模式、病毒特征、生物安全条件与团队执行力是净化PRRSV时需要考虑的主要因素。一般来说,对于曾祖代或祖代育种核心场,尽可能维持PRRSV抗原/抗体双阴性,若发生PRRSV感染,则考虑重新净化。而对于商品化猪场,通常猪场都位于养猪密集区域且引种频繁,商品化母猪场不建议进行净化PRRSV,只需要让母猪群建立并维持较高的免疫力,做到抗体阳性稳定。通常的方法是使用蓝耳弱毒疫苗对后备及基础母猪群每年进行持续免疫,或者在引种后的隔离适应期利用蓝耳野毒阳性血清对后备母猪进行驯化,等待驯化后后备母猪康复并在进入基础母猪群之前停止排毒即可。经过调查和研究,国内诸多猪场采用阳性血清驯化法成功控制了猪场的蓝耳病问题,蓝耳稳定或净化后的猪群取得了很好的生产成绩和经济效益,这必将给我国养猪业提供更多启示和借鉴。血清驯化法作为防控PRRS行之有效的一种工具,规模化养猪企业可以根据自身条件进行合理选择来进行蓝耳病防控。

文章来源:猪业科学     文章编辑:一米优讯     
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