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作者：韩 强 闫聪聪 张小东 王永侠
导读：试验旨在探究饲粮中添加金银花黄芩提取物对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化和免疫功能、脂质代谢及蛋黄胆固醇含量的影响。选取产蛋率相近的70周龄新杨黑羽蛋鸡240只，分为2组，对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中添加金银花黄芩提取物（500 mg/kg），每组6个重复，每重复20只鸡，试验期70 d。结果表明：与对照组相比，①试验组全期产蛋率极显著提高（P<0.01），料蛋比极显著降低（P<0.01）；②试验组蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色显著提高（P<0.05）；③试验组血清谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶水平显著提高（P<0.05），总抗氧化能力极显著提高（P<0.01），血清丙二醛含量显著降低（P<0.05）；④试验组血清免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白G（IgG）含量极显著提高（P<0.01），免疫球蛋白M（IgM）显著提高（P<0.05）；⑤试验组血清三酰甘油含量显著降低（P<0.05），总胆固醇含量极显著降低（P<0.01），血清高密度脂蛋白胆固醇含量极显著提高（P<0.01）；⑥试验组蛋黄胆固醇含量极显著降低（P<0.01）。综上所述，饲粮中添加500 mg/kg金银花黄芩提取物可提高蛋鸡抗氧化和免疫功能，进而促进生产性能和蛋品质的提高，并同时改善蛋鸡脂质代谢，降低蛋黄胆固醇含量。
随着蛋鸡日龄的增长，产蛋率逐渐下降。另一方面，产蛋后期蛋鸡体内脂肪贮存会增多，易造成脂质过氧化，进而引起机体免疫功能下降，从而导致慢性炎症的出现[1-2]，也可导致产蛋率降低。此外，近年来，为了降低生产成本并同时更好地利用鸡舍设备，专家提出将蛋鸡和种鸡淘汰周龄升延至80周龄甚至100周龄的方案[3]。因此，如何提高蛋鸡产蛋后期的产蛋率，以及如何增强蛋鸡产蛋后期机体免疫力和抗氧化功能，是目前蛋鸡养殖业首要解决的问题。
金银花（Flos lonicerae）和黄芩（baikal skullcap）作为传统中草药在我国广泛种植[4]。金银花和黄芩提取物的主要活性成分分别是绿原酸和黄芩苷，具有抗菌、抗炎、抗氧化和增强机体免疫力等作用[5-8]。研究表明，饲粮添加300 mg/kg金银花提取物可显著提高京粉2号蛋鸡血清免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）、免疫球蛋白A（immunoglobulin A, IgA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GPX）水平，并有提高36~39周龄产蛋率的趋势[9]。另有学者研究证实，与对照组相比，1.0%黄芩粉组可显著提高海兰褐蛋鸡血清总抗氧化能力（total antioxidant capacity, T-AOC）和新城疫抗体效价及降低血清丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量，并有提高27~36周龄产蛋率的趋势[10]。
在全面禁抗新时代，绿色健康养殖受到广泛关注，植物提取物作为替代抗生素的新型饲料添加剂，具有预防动物疾病和促进动物健康生长的潜力，逐渐成为研究热点[11]。目前关于金银花和黄芩提取物对产蛋后期蛋鸡的影响鲜有报道。因此，本试验在饲粮中添加金银花黄芩提取物，研究其对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质、抗氧化能力、免疫功能、脂质代谢及蛋黄胆固醇含量的影响，为金银花黄芩提取物在蛋鸡生产中的应用提供依据。
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材料和方法
1.1 试验材料
金银花提取物，绿原酸含量10%；黄芩提取物，黄芩苷含量90%；金银花与黄芩提取物的比例为3∶2；由北京生泰尔科技股份有限公司提供。
1.2 试验设计与饲粮
试验选用健康状况良好的同一批次68周龄新杨黑羽商品蛋鸡400只，预试期14 d后，选取产蛋率相似的蛋鸡240只，随机分为2组，对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中添加500 mg/kg金银花黄芩提取物，每组6个重复，每重复20只，正试期为70 d。金银花黄芩提取物添加量参照张虎[12]试验结果确定。
试验采用玉米-豆粕型基础饲粮，参照我国《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）和NRC（2004）配制。基础饲粮组成及营养水平见表1。
1.3 饲养管理
采用4层阶梯式笼养，每个笼子5只鸡，每重复之间相隔１个空鸡笼。每日喂料2次（08：00、16：00），自由采食和饮水；每日捡蛋和清粪各1次，16 h光照。
1.4 生产性能与蛋品质指标测定
1.4.1 生产性能
每日以重复为单位记录产蛋数和蛋重，同时每周以重复为单位记录饲料消耗量。试验结束后统计每重复产蛋率、软破蛋率、平均蛋重、日均采食量和料蛋比。
1.4.2 蛋品质
试验结束时，每组选取接近平均蛋重的鸡蛋36枚（每重复6枚），用蛋品质测定仪（型号DET-6 000，日本robotmation）测定蛋壳强度、蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色；用数显厚度表（型号547-301，日本三丰）测定蛋壳厚度；用蛋形指数测定仪（以色列NFN385）测定蛋形指数。
1.5 样品采集与制备
试验结束后，每组选取接近平均体重的鸡12只（每重复2只），空腹12 h（禁食不禁水）后翅静脉采血10 mL于促凝管中，静置后，3 500 r/min离心10 min分离血清，-80 ℃保存，用于后续相关指标的测定。
同时，饲养试验结束时，每重复随机取2枚接近平均蛋重的蛋，用蛋清分离器分离蛋清和蛋黄，收集蛋黄用于测定胆固醇含量。
1.6 指标测定
1.6.1 血清抗氧化指标测定
GPX、SOD和过氧化氢酶（catalase, CAT）活性及T-AOC和MDA水平均用试剂盒测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所有限公司。
1.6.2 血清免疫指标测定
IgA、IgG和IgM含量使用北京方程生物科技有限公司的试剂盒测定。
1.6.3 脂质代谢指标测定
采用南京建成生物工程研究所有限公司试剂盒测定血清总胆固醇（total cholesterol, TC）、三酰甘油（triglyceride, TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）含量。
1.6.4 蛋黄胆固醇含量测定
利用磁力搅拌器将蛋黄搅匀，称取蛋黄液1 g，加入9 mL匀浆介质（无水乙醇），冰浴条件下匀浆，4 ℃、3 000 r/min、离心10 min，取上清液用南京建成生物工程研究所有限公司试剂盒测定蛋黄TC含量。
1.6.5 数据分析
试验数据以“平均值±标准差”表示。所有数据用Excel 2019 处理后，采用SPSS 25.0中的独立t检验对数据进行分析。P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。
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结果与分析
2.1 金银花黄芩提取物对蛋鸡生产性能的影响
由表2可得，与对照组相比，饲粮中添加金银花黄芩提取物可极显著提高全期产蛋率和降低料蛋比（P<0.01），全期产蛋率提高8.12%，料蛋比降低9.03%，而对平均蛋重、平均日采食量和软破蛋率均无显著影响（P>0.05）。
2.2 金银花黄芩提取物对蛋鸡蛋品质的影响
由表3可知，试验组蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色较对照组显著提高（P<0.05），分别提高了6.70%、3.87%和6.98%。蛋形指数、蛋壳强度和蛋壳厚度试验组与对照组之间无显著差异（P>0.05）。
2.3 金银花黄芩提取物对蛋鸡血清抗氧化指标的影响由表4可知，与对照组相比，试验组显著提高了血清GPX、SOD和CAT活性（P<0.05），并极显著提高了血清T-AOC水平（P<0.01），GPX、T-AOC、SOD和CAT分别提高了14.60%、12.14%、9.37%和7.52%。试验组血清MDA含量比对照组降低了8.10%（P<0.05）。
2.4 金银花黄芩提取物对蛋鸡血清免疫指标的影响由表5表明，试验组比对照组提高了血清IgA（P<0.01）、IgM（P<0.05）和IgG（P<0.01）的含量，分别提高了11.74%、6.82%和14.02%。
2.5 金银花黄芩提取物对蛋鸡脂质代谢和蛋黄胆固醇含量的影响由表6可见，与对照组相比，试验组降低了血清TG（P<0.05）和TC（P<0.01）水平，提高了血清HDL-C（P<0.05）含量，TG和TC水平分别降低了11.91%和14.93%，HDL-C含量提高了8.22%。试验组与对照组之间血清LDL-C含量差异不显著（P>0.05）。试验组蛋黄TC含量比对照组降低了20.01%（P<0.01）。
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讨论
3.1 生产性能
金银花和黄芩提取物中的有效物质分别是绿原酸和黄芩苷[5]，在改善动物生产性能方面具有积极作用。张瑞仙等[13]在罗曼粉蛋鸡饲粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%和2.0%金银花，与对照组相比，1.0%、1.5%和2.0%金银花组较对照组均显著提高了29~38周龄产蛋率和降低了料蛋比。Zhao等[14]的研究显示，饲粮中添加1 000 mg/kg绿原酸可显著提高白羽肉鸡平均日增重和饲料转化效率。张虎[12]在68周龄京粉蛋鸡饲粮中连续添加500 mg/kg山银花黄芩提取物4周，结果发现，山银花黄芪提取物可显著提高蛋鸡平均蛋重和全期产蛋率及降低料蛋比。龙彬[9]在京粉2号蛋鸡饲粮中添加100、200 mg/kg和300 mg/kg金银花提取物，结果表明，300 mg/kg组比对照组显著提高了蛋重。本试验结果显示，饲粮中添加金银花黄芩提取物可极显著提高蛋鸡产蛋率和饲料转化效率，这与上述研究结果基本一致。金银花和黄芩提取物改善动物生产性能可能是由于其活性成分绿原酸和黄芩苷具有较强的抗氧化、抗菌、抗炎和抗病毒的能力[6-8，15]，从而提高蛋鸡免疫力，改善了蛋鸡肠道与生殖道环境，因而有效提高了蛋鸡生产性能。
3.2 蛋品质
本试验结果表明，蛋形指数、蛋壳厚度和蛋壳强度试验组与对照组之间均无显著差异，这与张瑞仙等[12]的研究报道一致。但与对照组相比，试验组可显著提高蛋白高度和哈夫单位，这与龙彬[9]的研究结果一致。鸡蛋蛋白主要由输卵管膨大部分泌，金银花黄芩提取物活性物质绿原酸和黄芩苷具有很好的抗氧化能力，有助于维持膨大部细胞膜的正常生理功能，进而促进了浓蛋白的分泌，但具体机制尚不完全清楚，有待于进一步研究。研究表明，蛋黄颜色的深浅主要取决于家禽从饲粮中摄取的类胡萝卜素的数量和种类[16-17]。类胡萝卜素主要是含有羟基的叶黄素类，家禽自身不能合成，必须从饲粮中摄取。叶黄素被氧化可失去着色能力，从而使蛋黄颜色变浅[18]。另一方面，饲粮中的脂肪被氧化可降低脂溶性色素在体内的转运、吸收和利用，也可降低蛋黄颜色。本试验结果显示，与对照组相比，试验组显著提高了蛋黄颜色，这可能是由于金银花黄芩提取物提高了机体的抗氧化能力，抑制了叶黄素和脂质的过氧化，从而增加了蛋黄色素的沉积。
3.3 抗氧化
黄芩苷和绿原酸具有较高的抗氧化能力[15，19]。李文娜等[20]研究表明，绿原酸可有效地清除活性氧自由基。He 等[21]在研究黄芩苷对小鼠酒精性肝损伤的作用时发现，黄芩苷改善了由酒精引起的肝脏氧化应激、肝细胞凋亡、脂肪变性和炎症。Miao等[22]研究表明，金银花提取物能激活Nrf2信号通路，降低四氯化碳诱导的小鼠肝脏氧化应激，缓解肝损伤。Chen等[23]在断奶仔猪饲粮中添加1 000 mg/kg绿原酸，可显著提高断奶仔猪十二指肠和空肠黏膜GPX和CAT的活性。在本研究中，试验组较对照组可显著提高血清抗氧化能力，这与上述研究结果及左兆云[10]在蛋鸡上和张国华等[24]在肉鸡上的研究报道一致。
3.4 免疫
B淋巴细胞产生的免疫球蛋白在体液免疫中发挥重要作用[25]。IgM是初级免疫产生的，可中和病毒及抗菌；IgG是次级免疫产生的，可清除病原微生物；IgA是机体分泌的主要抗体活性形式，能有效清除黏膜上的病原微生物[26]。因此，血清中免疫球蛋白含量可直接反映机体的免疫功能状况。在本试验中，饲粮中添加金银花和黄芩提取物可显著提高血清中IgM、IgA和IgG含量，说明饲粮添加金银花和黄芩提取物能起到提高蛋鸡免疫功能的作用，这与靳二辉等[27]报道肉鸡饲粮中添加金银花和黄芪促进免疫器官发育及提高血清IgG和IgM含量的结果一致；也与龙彬[9]报道蛋鸡饲粮中添加金银花提取物显著提高血清IgG和IgA含量的结果一致。金银花和黄芩提取物对免疫功能的增强作用推测与其提高机体抗氧化能力有关。机体抗氧化功能的提高可保护免疫细胞不受氧自由基损伤[28]，进而改善了免疫细胞自身的功能，增强机体的免疫性能。
3.5 脂质代谢
血清TG、TC、HDL-C和LDL-C含量可反映机体的脂质代谢情况[29]。LDL-C是TC转运至肝外组织的主要载体，是导致动脉粥样硬化的主要致病因素；HDL-C可将TC从肝外组织转运到肝脏进行代谢，从而降低心血管疾病的风险。本试验结果发现，与对照组相比，试验组血清HDL-C含量显著提高，而血清TG和TC水平显著降低。与此相似，龙彬[9]在京粉2号蛋鸡上的研究表明，饲粮添加200、300 mg/kg金银花提取物可显著提高血清HDL-C水平及降低血清TG和TC含量；而在肉鸡饲粮中添加山银花黄芪提取物同样发现血清TG和TC含量显著降低[30]。本试验结果提示，饲粮中添加金银花黄芩提取物对脂质的运转有一定的调节作用，可降低蛋鸡体内脂质积累。
肝脏是蛋鸡体内胆固醇合成的主要场所，合成的胆固醇通过血液循环进入卵巢沉积于蛋黄中[31]。本试验结果表明，饲粮添加金银花黄芩提取物极显著降低了蛋黄TC含量，这与龙彬[9]和左兆云[10]的研究结果一致。造成此现象的可能原因是：①金银花黄芩提取物可能通过影响与胆固醇合成相关的酶活性及基因表达来影响蛋黄TC水平。内源性TC合成的重要限速酶是β-羟基-β-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（β-hydroxy-β-methylglutaric acid monoacyl coenzyme A reductase, HMGR），HMGR表达降低可导致内源性TC合成下降[32]，而肝脏TC合成减少可降低蛋黄TC含量[33]。李文娜等[34]研究证实，绿原酸较对照组可显著抑制猪肝脏HMGR的效价。Wan等[35]在大鼠上的研究表明，高胆固醇饲粮组比正常饲粮组可显著提高血浆TC水平；而在高胆固醇饲粮的基础上添加10 mg/kg绿原酸后，发现与高胆固醇饲粮组相比，可显著降低血浆TC水平及肝脏HMGR mRNA相对表达水平。②金银花和黄芩提取物可通过提高血清HDL-C含量，促进内源TC的逆向转运，增强胆汁酸排泄。血清HDL-C介导了逆胆固醇转运过程，即将外围组织中胆固醇逆转运至肝脏形成胆汁酸通过粪便排出。因此，本研究中试验组蛋黄TC含量降低也可能与金银花黄芩提取物提高了血清HDL-C水平有关。
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结论
本试验结果表明，饲粮中添加500 mg/kg金银花黄芩提取物可提高蛋鸡产蛋后期血清抗氧化和免疫功能，进而促进产蛋率、蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色的提高及料蛋比的降低。同时，饲粮中添加金银花黄芩提取物可通过提高血清HDL-C含量，促进胆固醇逆向转运，进而降低蛋黄胆固醇含量。
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