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猪伪狂犬病净化策略与应用
何启盖
（华中农业大学，湖北 武汉 430070）
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猪伪狂犬病概述
伪狂犬病（Pseudorabies，PR；Aujeszky's disease，AD）是由狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一种多种动物共患传染病，呈世界性分布。对养猪业的危害最为严重。
猪伪狂犬病（PR）引起以下四大临床特征：1）繁殖障碍。妊娠母猪出现流产、产死胎和木乃伊胎，种母猪发生返情和空怀，屡配不孕；2）神经症状。15 日龄内仔猪出现神经症状，致死率100%，断奶仔猪出现神经症状和呼吸道症状，致死率10%～20%；3）生长猪和育肥猪出现呼吸道症状，增重缓慢、饲料报酬低；4）公猪出现睾丸炎性肿胀或萎缩，失去种用能力。
PRV属于疱疹病毒科，DNA病毒，基因组全长约143 kb，有生长必需基因和非必需基因；公认的毒力相关基因是：TK基因、gE基因，核苷酸还原酶基因（RR）等；弱毒疫苗可作为基因工程疫苗载体。
PRV可感染猪、牛、羊等家养动物，犬、猫等宠物，野猪、狼、狐狸等野生动物，家兔、小鼠等试验动物。除猪外，其他动物发病时均为散发，但以死亡为结局。动物感染PRV后终身带毒，ELISA检测野毒抗体阳性，中和抗体可能阴性；可激活潜伏感染病毒的因素。PRV可引起人急性脑炎，患者表现呼吸障碍和急性神经症状，运用高通量方法能够发现病原核酸，对病毒进行分离鉴定。
PRV具有嗜神经性，能够经黏膜上皮快速转移至外周神经（嗅神经或上额神经），最终进入中枢神经系统，建立潜伏感染。可被激活，间歇向外排毒。
PRV传播途径一是水平传播。
1）空气传播：经空气传入（2～3 km），是目前大多数猪场发生伪狂犬病的风险点。疫点周围1 km，OR值为5 000；2～6 km内，OR值为500垂直传播和其他动物传播；2）引进潜伏感染猪；3）购入带毒精液；4）猪流行性腹泻（PED） 返饲材料中含有PRV；二是垂直传播。胎盘传播：不同妊娠阶段均可发生；三是其他动物传播。包括鼠类、野猪。
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猪伪狂犬病流行情况
2.1 血清样品场阳性率和样品阳性率
2020年4月—2023年12月，
试验组采集的626个猪场20 361份血清样品中，场阳性率为13.20%（92/697）（95%CI:10.69%～15.71%），样品阳性率为4.46%（1 208/23 079）（95%CI:4.22%～4.71%）；其场阳性率和样品阳性率均呈逐年下降趋势。如图1和表1所示。
图1 gE抗体阳性率
2.2 不同阶段gE抗体阳性率
不同阶段gE抗体阳性率检测结果显示，2020年度保育猪抗体阳性率最高；2021年种产房仔猪抗体阳性率最高，其中仔猪抗体阳性多为母源抗体。2022年各阶段猪群抗体阳性率持续降低；2023年后备猪群gE抗体全部阴性。如图2所示。
图2 不同阶段gE抗体阳性率检测结果
2.3 不同季节gE抗体阳性率
不同季节gE抗体阳性率检测结果显示，秋季的场阳性率和样品阳性率均显著高于春、夏季节（P＜0.05）；冬季的样品阳性率则极显著高于春、夏季节，显著高于秋季，场阳性率虽高于春、夏季节，但差异不显著（P＞0.05）；表明秋冬两季天气变化较大且温度较低的季节猪伪狂犬病感染率相对较高。如图3所示。
图3 不同季节gE抗体阳性率检测结果
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新型猪伪狂犬病病毒的特点
2011年10月开始，PR在国内暴发，20多个省均有发病报道。发病母猪出现流产；仔猪出现划水样、转圈等神经症状；剖检结果显示：大脑出血；脾脏和扁桃体出现白色坏死灶，24.5%免疫Bartha疫苗的猪场出现PR。研究显示，相比经典毒株，新毒株对保育猪的致病力显著增强；SMX2012分离株能够导致50日龄仔猪的神经症状和死亡；SMX2012分离株导致严重的呼吸道症状；SMX2012分离株导致长时间的发热和精神沉郁。
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猪伪狂犬病诊断技术
4.1 流行病学诊断
繁殖障碍、呼吸道症状、神经症状等类似症状疾病的鉴别诊断。
4.2 实验室诊断
4.2.1 抗体检测
乳胶凝集试验，PRV-ELISA，gB-ELISA，gE-ELISA，中和试验（研究目的）；化学发光检测方法（新）。
4.2.2 抗原
免疫组化试验。
4.2.3 核酸检测
PCR，qPCR。设计引物时，要考虑不同毒株的gE基因缺失片段。
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猪伪狂犬病疫苗研究和免疫程序优化
5.1 疫苗保护力试验
疫苗保护力试验结果显示，1）Bartha-K61疫苗可对经典毒株提供完全保护力，对变异毒株不能提供完全保护力；2）变异毒株的基因缺失弱毒株可以对变异毒株提供完全保护力。如表2所示。
5.2 新毒株对阴性保育仔猪的致病力研究
SMX2012分离株对50日龄保育猪的感染试验结果见表3。
5.3 不同基因缺失疫苗免疫
不同基因缺失疫苗免疫结果见表4。结果显示，用不同基因缺失疫苗免疫，可产生针对新流行毒株的中和抗体，但水平有差距。
5.4 免疫后中和抗体水平测定
免疫后中和抗体水平测定结果显示，Bartha-K61疫苗产生的抗体不能很好地中和变异毒株SMX2012；HB2000产生的抗体对经典毒株还是变异毒株，中和效价显著高于Bartha-k61疫苗；这个差距在中和变异株上尤其显著；HB98和鄂A株灭活疫苗均能产生显著高于Bartha-K61疫苗的中和抗体。如图4和图5。
图4 SMX2012特异性中和抗体效价
图5 Bartha-K61特异性中和抗体效价
研究显示，猪伪狂犬活疫苗HB-98株/HB-2000均能抵抗新PRV的攻击。28日龄免疫一次；免疫4周后攻毒；攻毒剂量：1.0 ×107.0TCID50。
5.5 不同免疫策略攻毒后PRV排毒量比较
SMX2012攻毒后，连续14 d监测PRV排毒量发现：未免组>灭活疫苗+灭活疫苗>弱毒疫苗+弱毒疫苗>弱毒疫苗+灭活疫苗。确定伪狂犬疫苗免疫的最佳策略为：弱毒疫苗+灭活疫苗。
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猪伪狂犬病的防控措施
6.1 猪伪狂犬病阴性场如何防止病毒入侵？
1）引入猪伪狂犬病阴性种猪或精液；2）注意生物安全措施：人员（淋浴设施）和车辆消毒（强调正确的消毒程序）；3）母猪一年免疫3～4次活疫苗；4）了解周围2～3 km内猪场的健康状况，避免病毒经空气传入；5）猪场的净道与污道要分开；6）监控100～120日龄的生长猪，尤其是呼吸道症状的猪。
6.2 正在发病的猪场如何控制？
1）无害化处理死亡猪；2）公猪和母猪紧急接种活疫苗；3）发病猪群紧急接种活疫苗；4）新生仔猪滴鼻接种活疫苗；45日龄灭活疫苗免疫；70日龄（120日龄）灭活疫苗免疫；5）减少病原在场内的交叉传播（生物安全）。生产流程是：重点在容易转阳的阶段，全部清空1～2批，彻底消毒，空栏时间足够。
6.3 稳定猪场如何净化伪狂犬病？
1）对种母猪和种公猪1年进行4次规范免疫；2）对于仔猪：活疫苗滴鼻免疫，45日龄灭活疫苗免疫；70日龄（120日龄）灭活疫苗免疫；3）选择gE抗体阴性后备猪，补充种猪群体；4）淘汰野毒感染种猪；5）定期灭鼠。6）生产流程管理：重点在容易转阳的阶段，全部清空1～2批，彻底消毒，空栏。
6.4 猪伪狂犬病根除计划
1）材料准备阶段：疫苗和检测试剂；2）抽样调查阶段：确定野毒感染率高低（10%；10%～20%；20%），确定根除计划的步骤；3）加强免疫阶段。4）检疫淘汰；5）清群阶段；6）监测与认证（设立哨兵猪）；7）维持阶段：不免疫，不感染，不发病。
评估流程与内容：1）现场评估（按照评选条款逐一查看，评分；必备条件6项；其他69项；其中关键项不能扣分，否则不通过）；2）69项：人员管理（5分）、结构布局（10分）、栏舍设置6分、卫生环保6分、无害化处理9分、消毒管理12分、生产管理8分、防疫管理9分、种源管理12分、监测净化14分、场群健康9分；3）实验室检测：gE和gB抗体检测；4）综合评估：通过，不通过；5）农业农村部发文公布。
猪伪狂犬病净化的关键：1）基因缺失疫苗+鉴别诊断方法，选用匹配性强的疫苗，敏感性高的诊断方法；2）注重生物安全（减少外部风险）；3）淘汰野毒感染母猪和公猪；4）淘汰生产成绩差的母猪；5）净化维持后期，使用基因缺失灭活疫苗：环境中不存在活病毒；6）实现不免疫无疫，真正净化。
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