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摘要
猪流行性腹泻病毒(PEDV)，是一种严重危害养猪业经济的肠道疾病。该病毒可感染所有年龄猪只，但它在新生仔猪中引起严重的临床疾病，死亡率高达100%。目前，市场上的疫苗并不完全有效，利用PEDV病料返饲的方法在预防再感染方面取得了一定的成功。
在感染PEDV的母猪的肠道和淋巴器官中，关于效应/记忆IgA和IgG抗体分泌B细胞反应的水平和持续时间的综合信息，以及它们与临床样品(如血浆、口液和粪便)中特异性抗体水平的关联是很重要的。因此，我们在这项研究中的目标是量化母猪感染PEDV后大约1个月和6个月的特异性IgA和IgG抗体分泌B细胞反应，包括头胎和经产母猪。
研究数据表明，评估血浆和口腔液样本中PEDV特异性IgA和IgG抗体水平有助于疾病诊断。感染母猪的肠道和脾脏中PEDV特异性B细胞反应在6个月后下降，这与血浆和口腔液样本中的特异性抗体水平有关；但在感染6个月后，血浆中的病毒中和滴度仍然很高。
总之，在感染PEDV的母猪中，在感染后6个月，血浆中存在效应/记忆B细胞反应和强病毒中和滴度，表明它们有可能保护母猪免受再次感染，并为新生仔猪提供母体免疫，但需要攻毒研究进一步来证实。
研究使用的母猪分组详细情况见表1。临床上，母猪在运往屠宰厂之前是健康的，并在前屠宰休息一天。通过检测血浆、口腔液和粪便样本中PEDV特异性IgA和IgG抗体反应，结果表明，感染后1个月和6个月的母猪血浆(图1A)和口腔液(图1B)中PEDV特异性IgA抗体的反应明显高于未感染的母猪，重组S蛋白包被板(图1D和E)中也出现了类似的趋势。令人诧异的是，在粪便样本中，针对PEDV全病毒衍生抗原(图1C)、S蛋白(图1D)和M蛋白(图1E)的特异性IgA抗体缺失。
尽管感染母猪血浆中PEDV特异性IgG抗体水平明显高于未感染母猪(图1F、I和J)，但未感染母猪的IgG背景光密度值高于各自的IgA水平(图1A、D和E)。在PEDV感染后6个月的初产母猪口腔液样本中，针对病毒全抗原和重组S、M蛋白的特异性IgG抗体水平显著高于未感染母猪和其他3个感染母猪组(图1G、I和J)。感染母猪粪便样品中没有PEDV特异性IgG抗体(图1H、I和J)。研究数据表明，对于母猪PEDV感染的诊断抗体分析，血浆和口腔液样品(但不包括粪便样品)是可靠和一致的。
图1 PEDV感染母猪临床样品中PEDV特异性IgA和IgG抗体滴度的定量测定
从未感染和感染PEDV后的母猪中收集样本，见表1。采用ELISA法测定PEDV特异性IgA (A-E)和IgG (F-J)抗体滴度，用全病毒抗原(A-C和F-H)、S蛋白(D, I)或M蛋白(E, J)包膜;血浆(A, D -F, I, J)，口腔液(B, D, E, G, I, J)和粪便(C-E和H-J)样本。每条线代表6头母猪的平均OD450值±SEM。小写字母表示未感染PEDV的母猪组与相应胎次感染PEDV的母猪组之间有统计学差异，星号表示PEDV感染母猪组之间有统计学差异(“a”或*代表P < 0.05，“b”或**代表P < 0.01，“c”或***代表P < 0.001)。
进一步，用IFA法测定感染母猪样品中抗PEDV的病毒中和抗体滴度。在该实验中，每个孔中使用了50个TCID50的PEDV，这表明在感染后24小时有大量的感染细胞(图2)。我们的数据显示，在未感染PEDV的母猪血浆中，病毒中和抗体滴度高达16。但是，在感染母猪中，所有四个感染组的病毒中和抗体滴度都非常高，滴度为512(图3A)，这表明即使在6个月后，初产和经产母猪的病毒中和抗体滴度在血浆中仍然很高。所有感染母猪口腔液和粪便样品中的病毒中和抗体滴度均<8(图3B和C)。
图2 图片显示PEDV感染母猪血浆样本中病毒中和抗体反应
A 用50个TCID50病毒进行中和抗体实验，感染24 h后免疫荧光(IFA)检测显示有相当数量的感染细胞。
B 将PEDV未感染母猪和感染母猪的代表性实验血浆样品分别按1:8 ~ 1:1024进行倍比连续稀释，混合PEDV的TCID50为50；用该混合物处理的Vero细胞进行IFA和200倍放大检查。病毒中和抗体滴度表示为测试样品的最高稀释比的倒数，该稀释比与病毒对照相比，病毒诱导的荧光焦点单位减少了90%以上。
图3 PEDV感染母猪的病毒中和抗体滴度
（A)血浆、(B)口腔液和(C)粪便样品采用免疫荧光法检测病毒中和抗体对PEDV的效价。病毒中和抗体滴度确定为测试样品稀释倍数的倒数，诱导大于90%的病毒感染抑制。每条线代表6头母猪的病毒中和抗体滴度平均值±SEM。小写字母表示未感染和感染PEDV的相应初产和经产母猪组之间差异有统计学意义(“a”P < 0.05，“b”P < 0.01)。
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