|
近日，最新发表在著名国际期刊《Veterinary Microbiology》上的一项研究发现，非洲猪瘟病毒在水蛭体内存活可达140天。
已有研究表明，非洲猪瘟病毒（ASFV）可通过水源传播。截止目前，水被ASFV污染的源头仍不清楚，其中一个可能的因素是感染猪的粪便和尿液。然而，在没有合适寄生物的情况下，ASFV在水中存活时间一般只有数天，是不可能在水中长期存在的。因此，寻找可以携带和传播非洲猪瘟病毒的水生生物显得非常必要。在自然环境中，水蛭是细菌、病毒、寄生虫的重要宿主。早在1913年，Boynton等已发现它在牛瘟的传播中具有重要作用。后续研究也发现，水蛭是动物病毒的跨宿主传播的载体之一。该研究对水蛭携带和分泌ASFV的能力进行了检测，并对水蛭分泌的ASFV的感染能力进行了分析。
实验分组
将水蛭分为两组。第一组的96条水蛭进行ASFV的携带研究。在猪感染ASFV 6天左右，让水蛭在感染猪的下腹部吸食血液，因为这个时期血液中的病毒载量相对较高。通过人为摘除，控制水蛭的吸食时间为10 min左右。同时用10条吸食过人血液的水蛭作为实验对照。第二组的96条水蛭用来进行ASFV的培养研究。将感染猪的脾脏提取物进行稀释后，以4.0 lg HADU??/ml ASFV的浓度对该组水蛭进行饲喂。同时用10条未进食的水蛭作为实验对照。模拟夏季的环境温度，该研究中水蛭的培养条件为22℃–25℃ 80天，26℃–32℃ 60天，24℃–26℃ 60天。
实验结果
通过检测水蛭的体液分泌物，该研究确认了两组的水蛭均携带了ASFV。在无水蛭的水环境对照中，HADU检测结果显示，ASFV在培养液中的失活与温度密切相关。30℃避光条件下，ASFV可至少存活12-14天，最长可达30-35天 （1 A）。PCR结果显示，ASFV DNA在水环境中可存在至少3-5周（1B）。
在水蛭实验组，HADU结果显示，直到160天，有50%的水蛭体内仍可检测到ASFV（表2）。HADU结果显示，我们发现实验开始阶段血液吸食组水蛭体内的病毒含量高于脾脏提取物培养组。60-80天后，血液吸食组水蛭体内的病毒含量开始下降，但一直持续至160天左右（1C）。PCR方法与HADU方法的结果基本一致，ASFV DNA在血液吸食组水蛭体内可存在150-160天，在脾脏提取物培养组水蛭体内可存在140-150天（1D）。
在水蛭实验组的培养液中，虽然ASFV滴度随培养时间延长有所下降，但直到实验结束，通过HADU和PCR方法均能检测到ASFV的存在（1E和1F）。另外，结果显示培养液沉淀物中的病毒拷贝数要明显高于培养液。
为了测试水蛭携带ASFV的感染能力，培养130-160天后，该研究用水蛭实验组的培养液、水蛭提取物的10倍稀释液对猪原代肺泡巨噬细胞进行感染。HADU和PCR结果均显示，接种后24-48 h病毒滴度明显增加。
该研究进一步测试了水蛭实验组携带的ASFV是否对猪具有感染能力，结果表明水蛭携带的ASFV通过口服途径感染猪是可能的，但是这种现象不能被有规律的重复，特别是在实验的后期阶段。从口服感染到发病，猪的潜伏期为12-15天，这与临床数据非常相似。
该研究表明，在相对比较高的温度条件下，水蛭体内的ASFV可存活达140天。可以推测，如果在相对低的温度条件下，该存活期可能会更长。根据这个发现，我们认为水蛭也是ASF流行的一个重要宿主。该发现对于放养猪和野猪的ASF季节性流行的原因，也提供了一个合理解释。目前，水蛭可使病毒长时间保持感染力的原因还不清楚，Al-Khleif等认为水蛭体内可能存在一些适合病毒生存的因子。病毒能够在水蛭体内存活并分泌到环境中，可能的原因是病毒能够在水蛭的组织细胞、未消化的血液中复制，或者水蛭组织细胞具有长期保存病毒的能力，并缓慢释放。然而，ASFV不太可能在水蛭摄取的血液中进行复制，因为两组间的病毒滴度接近。水蛭生长的水中能检测到ASFV，可能原因是它的分泌或排泄，该研究认为水蛭可能在维持ASFV病毒活性方面具有重要作用。
2018年8月3日，我国发现首例非洲猪瘟疫情，随后很快传播到全国大部分地区，已经造成巨大的经济损失。由于缺乏安全有效的疫苗，目前控制该病的唯一方法是实行严格的生物安全措施。因此，对ASFV的传播途径进行深入研究，有助于提高生物安全防控意识，增强防控手段。水蛭作为多种细菌、病毒、寄生虫的重要宿主，在疫病传播中具有不可忽视的作用。笔者认为，本研究关于水蛭可携带ASFV的发现，揭示了ASFV可在水中长期存在的一个重要原因。研究发现，水源是ASFV跨区域传播的一个重要因素，美国堪萨斯州立大学Niederwerder助理教授的研究小组发现，ASFV通过饮水引起感染的剂量很小，最低仅为100 TCID??。我国地域辽阔，地理环境复杂，物种种类多样。已有相关数据表明，1959-2009年我国大陆的人体水蛭病病例数达1003例，主要分布于广西、贵州、云南、福建、广东、湖北、江西、浙江等15个省（区）。目前虽然没有发现水蛭与ASFV在我国迅速传播的直接联系，但根据该研究提供的数据，我们应该提高警惕，重视养猪用水的净化，同时加强周边河流的监管，禁止死猪入河，共同构筑坚实的生物安全屏障。
原文链接：https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2019.108421（译者：勾红潮，单位：广东省农业科学院动物卫生研究所）
|
