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布鲁氏菌病监测和诊断技术的研究进展
现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2010/6/11 22:39:39 关注：2202 评论： 我要投稿
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布鲁氏菌病（Brucellosis）是布鲁氏菌（Brucella）属的细菌侵入机体引起的传染病，他是一种严重的人畜共患传染病。该病不仅严重危害畜牧业生产，而且引起人的波状热和慢性感染等疾病，这些疾病至今尚无根治方法；同时该病还造成严重的公共卫生安全问题，因此，在医学和兽医学领域，乃至政府部门都极为重视该病的发生、控制和根除。
迄今为止，已确定的布鲁氏菌有7个种（牛种、羊种、绵羊附睾种、猪种、犬种、沙林鼠种、海洋种）。在自然条件下，布鲁氏菌病的易感动物范围很广，目前已知有60多种驯养动物、野生动物是布鲁氏菌的宿主，其中主要以畜产品附加值高的家畜动物为主，例如羊、牛、猪等。人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品均可被感染，特别是对羊布鲁氏菌最为易感的绵羊、山羊和牛，是人类最主要的感染源。虽然布鲁氏菌属的7个种均可引起感染，但各种家畜布鲁氏菌的发病机理极为相似，即通过粘附、侵入、定植、传播四步骤完成对宿主细胞的感染，其中主要通过气溶胶感染寄生于单核巨嗜细胞内，破坏机体的免疫系统，在脾脏、肝脏、骨髓、乳腺、性器官、淋巴结等部位扩散和增殖，给布鲁氏菌病治疗带来了很大的困难。
布病的潜伏期较长，一般为14～180 d，且多为隐性感染，症状一般不明显，明显的病畜临床症状主要表现为流产、关节炎、乳房炎和睾丸炎等。流产可发生在妊娠的任何时期，但最常发生在第6～8个月，已流产过的母畜可再次流产，一般比第一次流产的时间要迟。流产时除在数日前表现精神不振，食欲下降，时起时卧，阴唇肿胀等分娩预兆外，还有生殖道的发炎症状，从阴门流出黄红色或灰褐色的黏液，乳房肿胀。流产的胎儿多为死胎或弱胎，母畜子宫内膜发炎，导致胎衣不下。有的病畜虽治愈，但可能出现不孕症。人感染布病后，出现发热、多汗、关节痛、肝脾肿大、睾丸炎、滑囊炎和腱鞘炎；还可出现皮疹、头痛、失眠、坐骨神经痛等神经系统症状及恶心、呕吐、腹泻、便秘、咳嗽等全身症状，且反复发作，病人终身难愈，迁延者可丧失劳动能力，严重的可以造成死亡。
目前，在布病的诊断、监测中主要采用有病原学和血清方法，但这些传统方法存在着检测时间长、阳性率低以及假阳性和假阴性的出现，同时也对实验人员的健康安全构成一定的威胁。因此，随着科学技术的发展，一些免疫学新技术和分子生物学技术已经越来越多地被应用到布鲁氏菌检测当中。本文将对这些诊断方法的研究进展进行简要的综述。
一、监测和诊断方法的研究
（一）病原学诊断 通常采取流产胎儿的实质器官（心、肝、脾、肺、肾）、胎盘、阴道分泌物、血液和乳汁进行细菌的分离培养。对可疑菌进行形态、生化和毒力鉴定。
1.培养基及菌落形态。布鲁氏菌是需氧菌，能在弱酸或弱碱环境中生长，其生长最适pH 6.6～7.4，适宜温度为34℃～37℃。常用基础培养基有肝琼脂、含10%健马血清的马丁琼脂、马铃薯琼脂、血清葡萄糖琼脂（SDA）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）等。若材料有污染可用选择性培养基，常用的有Farrel氏SDA，改良Thayer-Martin培养基等。血样培养常用双向培养法，20～30 ml琼脂培养基高压灭菌后制成斜面，加入灭菌的5%枸橼酸钠、10%葡萄糖和1%甘油肉汤5 ml。使用时无菌取血样加到双向培养基的肉汤内，轻轻混匀后，倾斜使被检血样及肉汤很好的铺在琼脂斜面上，置37℃温箱培养，3 d后观察。
布鲁氏菌菌落小的直径有0.5～1.0 mm，大的可有3～4 mm，隆凸，边缘完整。在透射光下：平滑型菌落呈浅黄色光泽，在折射光下，菌落呈蓝白色，略显乳白色。若疑似布鲁氏菌菌落可做变异检查，即将菌落浮于0.1%（W/V）吖啶磺溶液中，粗糙型菌落出现凝集，或做结晶紫染色，粗糙型染成红色，光滑型呈浅黄色。
2.布鲁氏菌染色及形态。布鲁氏菌常用鉴别染色方法有：改良Ziehl-Neelsen氏法（布鲁氏菌被染成红色，背景兰色）；改良Koster氏法（布鲁氏菌染成红色，背景兰色）；柯兹洛夫斯基法（布鲁氏菌被染成红色，其他菌绿色）。
布鲁氏菌为革兰氏阴性球杆菌或短杆菌，无运动性、无鞭毛、无夹膜、一般不形成芽孢，涂片多散在，边缘稍圆或直。革兰氏染色呈现红色，姬姆萨染色呈现紫色。
3.动物接种试验。接种豚鼠分离布鲁氏菌的成功机率比直接培养要高，还可以克服病料被污染所造成的困难，不影响布鲁氏菌的分离。其具体方法如下：通常以胎儿组织或是胎盘组织的乳剂、阴道洗液或全奶作接种材料。接种剂量：1～3 ml，通过皮下或腹腔接种豚鼠。检验牛奶时，可于注射后数天，采同一母牛的奶给豚鼠做第二次注射，接种3～5周，剖杀，取淋巴和脾作分离培养。剖杀前可做变态反应和血清凝集反应试验。出现阳性或可疑变态反应和凝集价在1:5以上的可分离出布鲁氏菌。
4.生化试验鉴定。布鲁氏菌各个种是根据其血清学特性（特异性单向血清A、M凝集试验、粗糙型），生长特性（硫化氢的产生，是否需要二氧化碳），对某些染料的抑制作用和对Tb噬菌体裂解作用的感受性，以及糖发酵试验等进行鉴定的。
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种别 |
型别 |
CO2 |
H2S |
染料
抑菌 |
单向血清凝集 |
RTD时噬菌体裂解 |
宿主 |
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硫堇 |
复红 |
A |
M |
R |
Tb |
Wb |
Bk |
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