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摘要：为全面掌握山东省小反刍兽疫的病原分布和免疫效果，按照《山东省动物疫病监测与流行病学调查实施方案》，分别于2018年 和2019年，通过问卷调查结合实验室检测，在全省开展了小反刍兽疫专项流行病学调查。结果显示：2018—2019年山东省小反刍兽疫免疫抗体合格率均在80%以上，达到了国家和省级的要求，抗体水平平稳（χ²=0.003，P=0.95632，P>0.05）；病原学检测均未发现阳性样品。问卷统计结果显示：疫病方面，目前养羊场以细菌性疾病感染为主，没有发现小反刍兽疫疫情；饲养场（户）基本能够做到调入羊只的隔离、检疫，以及养殖场的定期消毒。结果表明，山东省羊群的小反刍兽疫免疫保护水平较高，防控措施执行较为到位，防控形势比较理想。今后需持续开展小反刍兽疫专项流行病学调查，从而为今后小反刍兽疫免疫政策的制定和强制免疫退出提供数据支撑。 小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）感染小反刍兽引起的一种严重的急性、烈性、接触性传染病，以高热、口炎、胃炎、腹泻和肺炎等为主要特征。PPR主要通过直接、间接接触传染和呼吸道飞沫传播，潜伏期为4~5d。世界动物卫生组织（OIE）将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。山羊感染PPRV后的症状较绵羊明显。本病一般可分为急性型、亚急性型和慢性型3种。其中：慢性型症状轻微，主要为体温升高，类似感冒；亚急性型症状为体温升高到40~41℃，高热不退，口腔炎症明显，有的出现严重腹泻等；急性型临床比较少见，发病迅速，往往发病后2d内死亡。 2007年PPR由境外首次传入我国西藏阿里地区，随后疫情迅速得到控制。2013 年底，PPR再次传入我国，并波及多个省（区、市）。为有效控制和根除PPR疫情，山东省根据《全国小反刍兽疫消灭计划（2016—2020年）》及《山东省小反刍兽疫消灭计划（2016—2020年）实施方案》的具体要求，对全省（青岛市除外）羊只采取全覆盖强制免疫政策。为准确掌握2018—2019年山东省境内的PPR免疫效果以及病原感染情况，分别于2018年11月和2019年11月，在全省开展了PPR专项流行病学调查，以期为山东省的PPR防控提供适用、科学、有效的防控措施。
材料与方法
相关定义
免疫合格样品是指经PPR阻断ELISA检测为抗体合格的血清样品，反之为免疫不合格样品；免疫合格群体是指免疫样品合格率≥70%的群体，反之为不合格群体；病原学阳性样品是指经PPR荧光RT-PCR检测为阳性的样品，反之为病原学阴性样品。 研究群和抽样单元 研究群。全省所有羊存栏量≥50只的规模饲养场以及有羊散养户的自然村，其中1个规模饲养场或1个自然村内所有散养户存栏羊作为1个群体。 抽样单元。群体层选择每个规模场和有羊散养户的自然村，群体内选择所有免疫PPR疫苗的羊。 抗体样品抽样量计算 根据全省养殖情况，采用两阶段抽样方法。 第1阶段，先计算全省专项流行病学调查所需的总抽样场数，用估计流行率方法，按 95%的置信水平、90%的预期免疫合格率（根据往年的测量结果确定预期免疫合格率）、5%的可接受误差、无穷大场群，利用公式（1）计算出的抽样场群数为139个，根据各市规模化羊饲养场和自然村的群体实际情况，按照比例分配到各地市。
其中p为预期合格率，z为置信水平，e为可接受误差。
第2阶段，计算所需的抽样羊只数量。仍采用估计流行率方法，按 95%的置信水平、90%的预期免疫合格率（根据以往的测量结果确定预期免疫合格率）、10%的可接受误差、群体数量无穷大，计算得出场群内需抽取不少于35只羊的全血。场内随机选羊，按系统随机方法抽样，如全群数量小于35只，则全部采样。
病原样品抽样量计算
根据全省规模场和自然村的养殖情况，采用两阶段抽样方法。
第1阶段，计算全省所需的总抽样场数，采用证明无疫的方法，按照估计场点流行率1%，置信水平95%，依据公式（2）计算出调查的场点数不少于299个，根据各地市规模化羊饲养场和自然村的群体实际情况，按比例分配。
其中n为抽样个数，CL为置信水平，D为群内个体数与预定流行率的乘积，即群中的阳性动物数，N为群内个体数，Se为检测方法的敏感性。 第2阶段，计算所需的抽样羊只数量。仍用证明无疫的方法，按95%的置信水平、3%的预期流行率、群体数量无穷大计算，则场群内需抽取不少于99只羊的鼻拭子。场内随机选羊，按系统随机方法抽样，如全群数量小于99只，则全部采集。 调查方式与内容 采用现场询问、查阅档案记录、填写调查表和采样检测等方式，主要调查养殖场（户）的基本信息、养殖情况、防疫措施、无害化处理和PPR发病情况等。 采集样品按照NY/T 541—2016标准中的相关要求，妥善保存和运输。PPRV抗体检测，采用ELISA方法；病原学检测，采用荧光RT-PCR方法。
结果与分析
采样及现场调查 2018年共采样检测畜场1481个，包括规模羊场763个、散养户716个、市场2个，共采集免疫血清样品30688份、病原学样品8703份；2019年共采样监测畜场2284个，包括规模羊场1380个、散养户904个、市场59个，共采集血清样品31769份、病原学样品13867份。2018—2019年各地市采样检测场群数量见表1。
问卷统计结果显示：疫病方面，养羊场以细菌性疾病为主，没有发现PPR疫情；调运检疫方面，饲养场（户）对外调羊只基本能做到隔离观察，确保健康后合群饲养，隔离期一般为3~5d；卫生方面，饲养场（户）基本能做到定期消毒，规模场措施更为得当，一般能做到每日消毒，散养户消毒时间间隔稍长。 实验室检测 抗体检测。2018年共检测羊免疫血清样品30688份，抗体合格28826份，平均抗体合格率为93.09%；2019年共检测羊免疫血清样品31769份，抗体合格29666份，平均抗体合格率为92.90%（表2）。整体来看，山东省PPR免疫效果较好，各市免疫抗体合格率基本都在90%以上，远超过了国家和省级的最低要求，可以确保免疫动物处于有效保护状态。2018年与2019年免疫抗体合格率卡方检验显示无显著差异（χ²=0.003，P=0.956 32，P>0.05），表明全省PPR免疫措施得当，抗体水平平稳。但个别地市PPR抗体水平有待提高，比如济宁市2018和2019年的样品合格率仅为83.15%和79.19%，需要进一步加强免疫。 病原学检测。2018—2019年所有病原学样品检测全部为阴性。
讨论
本次调查发现，大多数养殖场（户）比较重视PPR防控，对PPR免疫持乐观态度，从流行病学调查的总体情况看，全省PPR免疫状况良好，未检出病原，也未发现临床病例，说明全省PPR防控形势较好，疫情发生风险较低。但本次调查中的场内抽样采用证明无疫方式计算样本量，设定的预期流行率为3%，相对较高，导致样本量稍低，即使未检测到病原学阳性，也无法确定全省不存在病原感染。 虽然山东省的PPR防控形势较好，但随着活羊及其产品的全国流通，PPR的传入风险依然存在，因此PPR防控工作不可松懈，需要增强防控意识，尤其是散养户，要严防从疫区引入羊只，从外地引入的羊只要严格隔离、检疫。今后还需持续开展PPR专项流行病学调查，以便为PPR免疫政策的制定和将来PPR强制免疫退出提供更加有力的数据支撑。
结论
调查认为，山东省PPR强制免疫效果较好，免疫抗体水平远超过国家和省级的最低要求，养殖场（户）防控意识较强，防控形势比较理想，PPR发生风险较低。但仍需继续加强免疫和调入羊群的隔离检疫，持续开展流行病学调查，从而为全省尽快消灭PPR奠定基础。
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