摘要:屠宰企业的非洲猪瘟自检对切断病毒传播链条、打好非洲猪瘟攻坚战有着重要作用。为摸清四川省宜宾市屠宰企业的非洲猪瘟检测水平,对全市10个区县83家屠宰企业组织开展了非洲猪瘟检测能力比对工作。结果显示:屠宰企业检测人员偏少、岗位工作时间短、文化程度不高;不同区县、不同类别、不同组合的检测结果存在差异,有的差异较大。总的检测敏感性为49.72%,特异性为87.41%,准确率为66.56%。结果表明:屠宰企业的检测能力较为一般,监测风险预警效果不甚理想,有待加强。建议从保障人员队伍和加强操作培训两方面入手,提高屠宰企业非洲猪瘟检测能力。
屠宰环节是生猪产销的重要环节,屠宰企业的非洲猪瘟自检对切断病毒传播链条,打好非洲猪瘟攻坚战有着积极重要作用。为摸清四川省宜宾市屠宰企业非洲猪瘟检测水平,提升其非洲猪瘟检测能力,组织开展了全市屠宰企业非洲猪瘟检测能力比对工作。
材料和方法
比对对象
农业农村部212号公告中公布的宜宾市屠宰企业,共83家,其中定点屠宰企业(A证)9家、小型屠宰企业(B证)74家,在宜宾市10个区县的分布见表1。
样品、试剂和主要仪器设备
比对阳性样品来自四川省动物疫病预防控制中心,阴性样品来自宜宾市动物疫病预防控制中心,由宜宾市动物疫病预防控制中心统一编号,每组检测5份样品,其中阳性样品不低于2份。比对前,随机抽取部分样品,使用非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒进行验证,确认比对样品的真实性。
试剂、核酸检测仪、离心机、移液器等,均为企业自行采购,其中试剂需符合农业农村部《关于非洲猪瘟病毒检测试剂盒有关事宜的通知》和中国动物疫病预防控制中心《关于公布非洲猪瘟现场快速检测试剂名单的通知》的要求。经统计,在用的有6家品牌的试剂(荧光PCR类5家、恒温扩增类1家)和8家品牌的核酸检测仪(荧光PCR仪5家、恒温扩增仪3家)。
比对流程
现场准备。各区县负责场地布置和信息核查。合理设置检测台间距、隔离带、休息区,保障检测独立开展;核查人员、仪器、试剂,严防弄虚作假、徇私舞弊等。
样品发放与监督。各区县同期开展比对,样品由宜宾市动物疫病预防控制中心人员带至各区县现场。签到和准备完成后,检测人员依次抽取比对样品,并在发放登记表上签字,同时领取比对试验记录表,回到检测区独立完成。其间,监督员现场巡查,不许检测人员随意走动,接打电话,有意观看其他比对企业检测结果。
结果确认和报送。检测结束后提交检测记录和报告,并在结果报告表上签字确认后离开或到指定地点休息。宜宾市动物疫病预防控制中心人员负责结果统计、复核和报送。
结果与分析
检测人员比对
宜宾市10个区县83家屠宰企业共有检测人员100名,平均年龄39岁,平均岗位工作时间为4.9个月,文化程度初中及以下占45%,高中、中专占40%,大专占14%,本科及以上占1%(表2)。其中:A证屠宰企业共有检测人员10名,平均年龄38岁,平均岗位工作时间为4.8个月,文化程度高中、中专及以上占80%;B证屠宰企业共有检测人员90名,平均年龄39岁,平均岗位工作时间为5个月,文化程度高中、中专及以下占87%(表3)。总体来看,屠宰企业检测人员偏少、岗位工作时间短、文化程度不高。
不同区县屠宰企业比对
不同区县屠宰企业的检测结果差异较大,不同区县的成立率为44.44%~100%,敏感性为9.52%~70.83%,特异性为50.00%~100%,准确率为45.71%~76.67%;总体敏感性较差、准确率偏低,10个区县参与比对的83屠宰企业中,有64家比对检测成立,占比为77.11%,总检测敏感性为49.72%,特异性为87.41%,准确率为66.56%(表4)。
不同类别屠宰企业比对
对比发现,A证企业检测的成立率、敏感性和准确率均高于B证。参与比对的9家A证企业中,有8家检测成立,占比为88.89%,总检测敏感性为68.18%,特异性为83.33%,准确率为75.00%;74家B证企业中,有56家检测成立,占比为75.68%,总检测敏感性为47.10%,特异性为88.00%,准确率为65.36%(表5)。
不同仪器试剂组合比对
按仪器品牌划分,8种设备(A—H)和6种试剂(a—f)组成了8种检测组合(A1—A8)。组合A7只有1家因机器调试原因导致检测不成立,其他家屠宰企业不同组合的成立率为57.14%~100%,敏感性为25.00%~73.08%,特异性为83.78%~100%,准确率为55.00%~100%(表6)。需补充的是,除组合A1、A7外,其他组合均有准确率100%的企业(组合A2和A6有3家,组合A3有2家,组合A4、A5、A8各有1家)。
按试剂划分,6种试剂(a—f)和8种设备(A—H)组成了6种检测组合(B1—B6)。不同组合的成立率为60.00%~100%,敏感性为31.25%~100%,特异性为50.00%~100%,准确率为63.33%~100%(表7)。需补充的是,除组合B3、B4外,其他组合均有准确率100%的企业(组合B1有6家,组合B2、B6有2家,组合B5有1家)。
综合分析,不同组合的检测结果差异较大,有10种组合(10/14)检测完全准确,但完全准确的企业数比例偏低(11/64)。虽然选择“恒温扩增类”组合的企业数量明显多于“荧光PCR类”,但后者的成立率、敏感性、特异性、准确率均高于前者。
讨论
此次比对表明,宜宾市屠宰企业检测的敏感性较差,准确率一般,检测能力有待进一步提高。原因分析如下:一是屠宰企业检测人员少,岗位工作时间短,队伍文化程度不高,检测人员大多只有1名,有的为兼职,有的年龄偏大,之前也未接触过核酸检测,操作经历大多不足半年,熟悉程度有待提高,这与唐小明等的调查类似。二是平时自检在企业内部进行,检测人员对场地、环境都较熟悉,而此次比对采用现场集中检测方式,有监督员全程巡查,考验了参比人员的心里素质和临场发挥能力。现场中,人员出现对仪器设置不熟、加样手抖、操作不规范不到位等,同时规定只能进行1次检测无法复检(有的样品准确率较好,但对照不成立),这些在较大程度上影响了结果。此次比对发现,各有9家企业出现阳性、阴性对照不成立,提示人员操作水平有待提高。三是不同仪器的价格不等,质量和稳定性不一,操作难度有差异,检测前有的仪器还未完全调试好,甚至出现现场故障。四是不同的试剂,敏感性和特异性也有差异,带至现场途中保存不当等,也可能会影响试剂性能。
据了解,检测平台上,荧光PCR类检测主要应用探针法,而部分恒温扩增类应用染料法。探针法在检测敏感性和特异性上一般优于染料法。同时,仪器性能主要取决于内部的光学元件、荧光收集系统和温控系统,这受价格限制,而“恒温扩增类”仪器的价格低于“荧光PCR类”,这些可能是此次“荧光PCR类”组合的企业检测成立率、敏感性、特异性、准确率均好于“恒温扩增类”的原因。
对比发现,也有一些检测能力较强的企业,这些企业大多数检测人员年龄适宜,配置的仪器价格相对较高,而且参加了数次培训,因而现场操作比较规范。
此次比对虽不能反映各屠宰企业的真实水平,但一定程度上反映了各企业的检测能力。建议从保障人员队伍和加强操作培训两方面入手,提高屠宰企业非洲猪瘟检测能力。提升核酸提取等加样操作水平来提高敏感性,注意防污染措施提高特异性,选用更可靠的检测组合、更有针对性的采样,最终提高准确率,确保结果客观。
结论
综上所述,宜宾市屠宰企业非洲猪瘟检测能力较为一般,监测风险预警效果不甚理想,有待加强。
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