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云南省边境地区送检牛血清样品蓝舌病病毒抗体检测与血清型鉴定


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2020/11/8 16:49:07 关注:743 评论: 我要投稿

  摘要:为了解云南边境地区的蓝舌病流行和分布情况,采用竞争ELISA方法,2019年对云南省边境地区5个州市12个县(市)的1580份牛血清样品进行蓝舌病病毒抗体检测,同时从检出的阳性血清中,每县(市)随机选取15~55份,采用微量血清中和试验进行血清型鉴定。结果显示:12个边境县(市)均检出阳性血清样品,但有一定的地区差异,其中芒市最高(94.1%),沧源县最低(17.0%);本地牛和境外牛血清样品阳性率差异不大(P>0.05),均在70.0%以上;各县(市)均存在5个以上血清型的交叉感染。结果表明,蓝舌病在云南边境地区广泛存在,且呈多种血清型混合流行态势,需要持续开展血清学调查。本研究为我国西南边境地区蓝舌病防控提供了数据参考。
  蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)引起的,通过媒介昆虫库蠓传播的虫媒病毒病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为须通报动物疫病,我国将其归为一类动物疫病。该病主要发生在热带、亚热带地区,近年来有北移趋势,主要引起绵羊、牛等反刍动物发病,尚无有效的治疗方法。目前全球已报道27种BTV血清型,我国分离到BTV-1、2、3、4、5、7、9、12、14、15、16、21、24等13种血清型。不同血清型毒株在同一区域同时流行时,容易发生基因重组,且不同血清型之间缺乏有效的交叉免疫保护,这给BT防控带来了严峻挑战。
  云南省地处我国西南边陲,有5个州市25个县(市)与缅甸、老挝和越南交界,有11个国家级口岸、9个省级口岸及数百条边境通道,边境线长4060km,是我国通往东南亚、南亚的关口。近年来,由于国内肉类价格持续增高,每年有大量牛等活动物通过边境线进入我国境内,使云南省边境地区BT防控形势更为严峻。为掌握云南省边境地区BT流行情况,本研究采用BTV C-ELISA抗体检测试剂盒和微量血清中和试验方法,对2019年云南省边境5个州市12个县(市)送检的1580份牛血清样品进行了BTV检测和血清分型,以期为我国BT防控提供参考。
  材料与方法
  血清样品
  牛血清样品来自云南省边境地区5个州市12个边境县(市),其中德宏州(芒市、瑞丽市)365份,西双版纳州(景洪市、勐海县、勐腊县)649份,文山州(富宁县)31份,普洱市(孟连县、西盟县、江城县)255份,临沧市(沧源县、镇康县、耿马县)280份,均由所在县(市)的动物疫病预防控制中心送检。
  血清抗体检测
  按照BTV C-ELISA试剂盒说明书,对待检血清进行检测,读取OD450值,计算血清样品抑制率,判定血清是否为阳性。试剂盒质控标准:两个阳性对照孔OD450≤0.2,两孔间OD450差值<0.05,两个阴性对照孔1.0≤OD450<1.6,两孔间OD450差值<0.2。判定标准:按照抑制率(PI)=(阴性对照OD450平均值-样品血清OD450值)/阴性对照OD450平均值×100%;抑制率≥50%,判为抗体阳性,否则为阴性。
  统计学分析
  采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,以P<0.05为差异存在统计学意义。
  血清型鉴定
  从C-ELISA检出的BTV阳性血清样品中,每县(市)随机挑选15~55份进行微量血清中和试验;按Karber方法计算24个血清型标准毒株的半数感染量(TCID50);参照GB/T18636—2017中的方法,将24个BTV标准毒株与BTV抗体阳性血清进行中和试验,确定BTV血清型。
  结果与分析
  抗体检测
  地区分布。从各县(市)送检的1580份牛血清样品中,均检测到BTV抗体阳性血清(表1),共检出阳性血清1155份,抗体阳性率为73.1%,表明牛BTV感染在云南省边境地区普遍存在。各县(市)BTV抗体阳性率有所差异,其中芒市最高(94.1%),沧源县最低(17.0%)。各州市BTV总阳性率比较结果显示:临沧市最低(43.6%),与其他州市差异均显著(P<0.05);西双版纳州与德宏州比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。

 

  群间分布。本地牛和入境牛BTV血清抗体统计结果(表2)显示:本地牛和入境牛血清BTV抗体阳性率差异不大(P>0.05),分别为74.1%和72.9%。


  血清型鉴定
  BTV血清型分布。对随机选取的541份BTV抗体阳性血清样品进行血清微量中和试验检测。结果(表3)显示:共鉴定出17种血清型,数量在100份以上的依次是BTV-1、16、3、5、21、15。各县(市)均存在5个以上血清型分布,其中:景洪市最多,有14个,沧源县最少,有5个,其他县(市)在6~11个之间。各州(市)优势血清型并不相同,德宏州2个市均存在BTV-3、5、15、16、17、18、21、24型8个血清型;西双版纳州1市2县均存在BTV-1、13、16、21、24型5个血清型感染,普洱市3县均存在BTV-4型,临沧市3县均存在BTV-3、5、21型3个血清型。

        BTV血清型混合统计。对各县(市)存在的16个BTV血清型进行混合感染统计的结果(表4)显示:在541份血清型定型样品中,存在77种两种血清型混合感染,其中BTV-3型与BTV-5型混合感染样品数量最多,有18份,占定型样品总数的3.3%;其次是BTV-16型与BTV-21型混合感染,有15份,占定型样品总数的2.8%,BTV-3型与BTV-16型、BTV-5型与BTV-16型混合感染均有14份,占定型样品总数的2.6%。


   讨论
  虫媒病毒病防制极为困难,全球每年因BTV感染而导致的经济损失高达30亿美元。我国对BT等动物虫媒病的研究相对滞后。1979年张念祖等首次在云南省师宗县发现BTV,此后湖北(1983)、安徽(1985)、四川(1988)等省份分别报道发现BTV。2017年血清学和病原学流行病学调查发现,我国11个省份63个市区检测到BTV抗体阳性。BTV可能会因库蠓移动传播、新血清型传入和致病性增强等引起牛群大规模发病,影响牛产业健康发展及相关畜产品贸易,因此加强BTV血清学调查对该病的预防与控制极为重要。
  本次检测在云南省边境地区5个州市12个县(市)的送检牛血清样品中均检测到BTV抗体,表明BTV在云南边境地区流行广泛。本研究的云南省12个边境县(市)均位于热带或者亚热带地区,与越南、老挝、缅甸接壤,年均气温较高、日照时间较长、降雨量较多,适于各类库蠓生长和繁殖,有利于BTV传播。由于本次检测样品数量有限,且均为送检样品,检出结果可能不能真实反映该地流行情况,但对于了解BTV在该地的流行状况和特点具有参考意义。来源地为本地和境外的牛血清样品间抗体阳性率差异不显著(P>0.05),说明云南边境地区BTV流行态势与缅甸、老挝、越南类似,这可能与云南边境地区气候环境、传播媒介等与上述三个国家类似有关。
  本研究应用微量血清中和试验,进行BTV血清型鉴定,发现各市县均存在5个以上的血清型分布,这可能与不同血清型BTV毒株在同一区域或宿主机体感染时易发生基因重组的特性有关。此外,在各州(市)流行的优势血清型也不同,这可能与地理位置和传播媒介库蠓的种类差异有关。
  结论
  检测发现,BT在我国云南边境地区流行广泛,且流行血清型复杂,多种血清型混合感染较严重,需要持续开展血清学调查。

文章作者:寇美玲等 中国动物检疫     文章编辑:一米优讯     
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