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摘要：为掌握猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）在湖北省武汉市大型规模化养猪场的流行率，并探索该病的传播风险因素，从而为科学防控该病毒提供依据，2020年4—6月采取二阶段随机抽样方法，采集猪口腔液样品进行PCV2核酸检测。第一阶段，对武汉市所有大型规模化猪场，采用估计流行率的样本量计算方式，确定抽样场数后随机抽取猪场；第二阶段，在猪场内采取发现疫病的样本量计算方式，以栏舍为单位，计算需要随机抽取的栏舍数量。同时以调查问卷方式，对场点感染PCV2有关的风险因素进行调查。结果显示：共采集22个大型规模化猪场的330份猪口腔液样本进行检测，其中8个场的55份样本检出PCV2核酸阳性，场群表观流行率为36.4%，真实流行率为38.0%（95%CI，17.5%~58.5%），阳性场点分布在5个区（全部共6个区）；净道、污道不分开是场内PCV2感染的主要风险因素。结果表明，武汉市大型规模猪场的PCV2场群流行率较高，分布范围较广，各场需加强生物安全管理，以控制PCV2的流行与传播。
猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2，PCV2）被公认为是养猪业的重要病原，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原，也可引起猪皮炎肾病综合征（PDNS）、猪呼吸道疾病复合征（PRDC）、A2型先天性震颤（CT）及母猪繁殖障碍等疫病。PCV2对外界抵抗力非常强，可同时与猪细小病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原发生混合感染，导致整体致病性增强，使猪只死亡率明显升高，从而给养猪业造成巨大经济损失。当前，我国多地均有PCV2感染的报道。为掌握武汉市大型规模化养猪场的PCV2流行率，并探索其传播风险因素，2020年4—6月对武汉市22个大型规模化养猪场抽样采集猪口腔液样品，采用PCR方法进行PCV2核酸检测，以期为科学防控该病提供依据。
方法
目标群体
以武汉市的蔡甸、江夏、黄陂、新洲、东西湖、经济开发区等6个区作为调查区域，将这些区域内所有年出栏大于1万头的规模化养猪场作为目标群体。
样品采集及检测
以单个栏舍为单位，将灭菌粗棉绳系在栏舍栏杆上，并保持与猪身同高。猪只充分咀嚼粗棉绳0.5 h后，将棉绳取下，刮取和挤压绳上的口腔液，收集于灭菌离心管中保存，用于PCR检测。检测试剂盒，使用世纪元亨公司生产的猪圆环病毒PCR检测试剂盒。
抽样策略
本研究采取二阶段随机抽样方法。第一阶段，对武汉市所有大型规模化猪场，采用估计流行率的样本量计算方式，确定抽样场数后随机抽取猪场。全市共有28个大型规模化养殖场。参考前期监测数据，置信水平设为95%，可接受绝对误差设为10%，场预期流行率设为30%，计算得出抽样场点数应为21个，实际随机抽取22个。第二阶段，在猪场内采取发现疫病的样本量计算方式，以栏舍为单位，计算需要随机抽取的栏舍数量。因年出栏大于1万头的猪场，其存栏量应≥6 500头，假设每个栏位圈养20头，则整个猪场栏位应≥300个。采用发现疫病的方式计算，置信水平设为95%，试验敏感性设为95%，栏舍预定流行率为20%，当群体大于100头时，样本量均为14份，实际从每个场点随机采集15个栏舍的口腔液样本，重点选取圈养多头猪只的栏舍。
病例定义
阳性栏：采集到的口腔液样品，经PCR检测为PCV2核酸阳性的栏；低流行率场：阳性栏检出率＜20%的场点；高流行率场：阳性栏检出率≥20%的场点。
问卷调查
问卷内容包括，养殖场基本养殖情况、引种情况、免疫情况、消毒措施、发病情况等。采取现场填写、电话问询等方式进行。
数据分析
使用Excel、WinEpi、SPSS等软件对数据进行整理，计算大型规模化养猪场PCV2的场群流行率；使用地图慧在线地图工具（http://e.dituhui.com/app）绘制场点空间分布图，并寻找该病传播的风险因素，进而分析原因并提出相应防控措施。
结果与分析
总体情况
在6个区的22个大型规模化养猪场的330份猪口腔液样本中，检测出55份PCV2核酸阳性（表1）。阳性样品分别来自8个规模猪场（表2）。所调查的6个区中有5个区均检测到PCV2阳性场点，场点空间分布见图1。
场群流行率
从22个猪场中检测出8个场为PCV2核酸阳性，场群表观流行率为36.4%（8/22）。设PCR的试验敏感性Se为95.0%，特异性Sp为100%，计算得出群敏感性HSe为95.8%，群特异性HSp=100%。通过真实流行率公式计算，得出武汉市大型规模化猪场PCV2病原群体真实流行率为38.0%（95%CI，17.5%~58.5%）。
风险因素
根据调查问卷，选择出8个因素（均为二分类变量）进行单因素分析，利用2×2表格，将数据进行Fisher确切概率法计算，结果仅1个因素即“净道、污道是否分开”具有统计学意义（P≤0.05），具体见表3。
讨论
口腔液采样方式
口腔液样品采集以栏舍为单位，在收集过程中可能混有环境样品，因此该种采样方式无法用于掌握动物个体流行率，而是更有利于更加全面掌握猪群及猪场的整体病原存在状况。为此本研究采取发现疫病的抽样策略进行抽样。此外，根据前期本实验室研究结果及PCV2侵入动物机体的特性，从口腔液中能够检测到的PCV2病原含量与从组织样品中的会存在一定差异，从口腔液中检测到病原的时间（疫病早期）可能更早，但能够从组织中检测到的PCV2数量可能更多。因此，该采样方式对判断场点的带毒情况还需做更深入研究。
加强生物安全管理
受全市大型规模化猪场数量的限制，本研究对象数量较少，对风险因素进行统计分析，仅找出1个与PCV2相关的风险因素“净道、污道是否分开”，而其他生物安全风险因素关联性较弱。但是“净道、污道是否分开”能够反映养殖场对生物安全防护的重视水平，说明加强生物安全管理是防控圆环病毒病的关键点之一，如场点远离交通要道、场内结构分区合理、污道净道分离、运输车辆使用专业洗消烘设备、自繁自养等措施，均能在一定程度上控制PCV2传播。
局限性
受新冠肺炎疫情影响，该横断面研究采样持续时间较长。且本市大型规模化养猪场总数为28个，数量较少，可能采取普查的方式进行采样监测结果会更加准确，但因采样时部分场点封村封路，未能对所有场点进行抽样。同时，因场点数较少，导致后续风险因素分析的置信度较低，找到的风险因素较少。
本研究在场内采用发现疫病的策略进行随机采样。根据前期本实验室检测结果与经验判断，将PCV2栏舍流行率预设为20%。因该预设数值较高，导致采样数较少。在后续统计分析中，未检测到阳性样品的场，并不代表一定是阴性场，只能说明该场PCV2栏舍流行率低于20%，仍有可能是阳性场。因此，本研究以场内PCV2阳性栏舍检出率20%为界，划分PCV2高流行率场和低流行率场，并进行风险因素分析，但全市大型规模化猪场PCV2实际的真实场群流行率可能更高。
受总体检测样品数量的限制，在研究设计阶段，未对场内猪群进行更加细致的规划采样。如根据PCV2的流行特点，在场内采取分层抽样方法，将猪群分为仔猪群、后备母猪群、经产母猪群、公猪群等，分别分析PCV2对不同种群的影响；针对PCV2不同毒株疫苗的使用，探讨疫苗对PCV2的影响。同时，在调查问卷中也需要增加更多疾病传播风险相关问题。
结论
调查发现：武汉市大型规模猪场的PCV2场群流行率较高，流行范围较广；净道、污道不分开是场内PCV2感染的主要风险因素。因此，各场需通过强化生物安全管理来控制PCV2的流行。
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