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摘要：为了解四川省主要养牛地区腹泻牛群中牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）感染情况，采集眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等6个市州53个场户的牛腹泻粪便样品共387份，采用荧光RT-PCR方法进行BCoV检测。结果显示：53个场点中，检出阳性场点11个，群体阳性检出率为20.8%；387份样品中，检出阳性样品65份，个体阳性检出率为16.8%。从群间分布看，规模场群体阳性检出率（72.7%）与个体阳性检出率（21.4%）均高于散养户（7.1%和3.1%），差异均极显著（P＜0.01）；牦牛个体阳性检出率为28.8%，高于黄牛（14.1%）和奶牛（11.1%），差异均有统计学意义，分别为P＜0.01和P＜0.05。结果表明，BCoV在四川省已形成一定的污染面，是造成牛腹泻的重要病原之一，需要加强对其流行的综合防控。
牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）是套式病毒目冠状病毒科冠状病毒属2a亚群的一种RNA病毒，同人类冠状病毒、猪凝血脑脊髓炎病毒、马冠状病毒、鼠肝炎病毒等同属于β-A群，可引起犊牛腹泻、成年牛冬痢以及呼吸道疾病。新生犊牛感染BCoV后发病率和死亡率均较高，成年牛发病率较高，但死亡率低。当BCoV与轮状病毒等发生混合感染时，病死率会增加，且病愈后犊牛生长、发育、生产性能，以及奶牛产奶性能等均会受到影响，并可长期带毒且在一定时期内持续排毒，给养牛业造成严重经济损失。1985年我国首次报道了由BCoV引起的犊牛腹泻病例。近年来的国外调查结果显示，牛群BCoV感染现象很普遍，呈世界性分布。国内山东、青海、西藏、新疆等省（自治区）的牛群血清学和病原学调查结果也显示BCoV阳性率较高。目前有关四川省牛群BCoV感染情况的报道主要是藏区牦牛的血清学调查。调查结果显示，藏区牦牛群BCoV感染现象很普遍。而四川省其他养牛地区、不同品种牛群BCoV感染情况，尤其是病原学调查报道较缺乏。本研究对采自四川省6个主要养牛市（州）的387份腹泻牛粪便样品进行了BCoV病原检测，以期了解四川省主要养牛地区的BCoV流行情况，为牛冠状病毒病防控策略的制定提供依据。
材料与方法
样品采集
2020年3—5月，从四川省眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等6个主要养牛市（州），采集有明显腹泻症状的发病牛粪便样品387份，其中眉山市30份、南充市30份、达州市30份、巴中市120份、雅安市97份、甘孜州80份。样品共采自53个场户，其中规模场11个、散户42个。样品来源牛群种类涉及黄牛、牦牛和奶牛，其中黄牛262份、牦牛80份、奶牛45份。样品采集后于-80 ℃冷冻保存。
检测方法
核酸提取 用棉签取适量的牛腹泻粪便样本放入装有500 μL PBS的1.5 mL EP管中，涡旋振荡使粪便样本充分混匀；反复冻融3次后，8 000 r/min离心5 min，取200 μL上清液，按照磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒说明书提取总RNA。
荧光RT-PCR 按BCoV荧光RT-PCR检测试剂盒说明书进行检测。
结果
基本情况
检测结果（表1）显示：6个市（州）53个场点的387份牛腹泻样品中，共有11个场点的65份样品检出BCoV核酸阳性，群体阳性检出率为20.8%，个体阳性检出率为16.8%。6个市（州）均有BCoV阳性样品被检出，其中甘孜州个体阳性检出率最高（28.8%），其次是巴中市（24.2%）、眉山市（16.7%）、达州市（10.0%）、南充市（6.7%），雅安市个体阳性检出率最低（3.1%）。
场点分布
本次调查涉及6个市（州）的53个场点，其中散养户42个、规模场11个。不同场点的检测统计结果（表2）显示：规模场的群体阳性率为72.7%，散养户群体阳性率为7.1%，差异极显著（P＜0.01）；规模场个体阳性率为21.4%，散养户个体阳性率为3.1%，差异也极显著（P＜0.01）。
品种分布
不同品种牛检测结果（表3）显示，各地不同品种牛腹泻粪便样品中，牦牛样品阳性检出率最高，为28.8%，其次为黄牛，阳性检出率为14.1%，奶牛最低，阳性检出率为11.1%。牦牛阳性检出率与黄牛、奶牛差异均有统计学意义，分别为P＜0.01和P＜0.05，而奶牛与黄牛差异无统计学意义，P＞0.05。
分析与讨论
四川省6个主要养牛市（州）均有BCoV阳性样品被检出，结合四川省已有的调查结果，表明BCoV在四川省已形成一定的污染面，牛群BCoV感染较普遍。
从采样场户类型来看，规模场无论是群体阳性检出率（72.7%）还是个体阳性检出率（21.4%）均显著高于散养户（7.1%和3.1%）。可能原因有以下两方面：一是BCoV主要通过呼吸道和消化道传播，而规模场饲养密度大，一旦发生感染，病牛未被及时隔离、环境未消毒等，就可能导致牛群BCoV感染率增加；二是由于本调查只采集了腹泻牛粪便样品，未采集健康牛样品，采样场点及样品数量较少，样品分布不均，如散养户样品均来自雅安市，而其他市州只采集了规模场样品，样品可能缺乏代表性。
从样品来源牛群种类来看，本调查中牦牛、黄牛和奶牛均有BCoV阳性样品被检出，与姚火春等的调查结果一致，表明不同种类牛群中普遍存在BCoV感染。本次调查发现，牦牛样品阳性检出率最高（28.8%），明显高于黄牛和奶牛（14.1%和11.1%），且采样的3个牦牛场均有阳性样品被检出。此前，四川省牦牛群感染BCoV的现象已有多次报道。何美琳等对阿坝州８个县采集1 070份牦牛血液样品进行检测，发现BCoV抗体平均阳性率为84.11%，且8个县均检出阳性；泽旺塔等检测了若尔盖县9个乡镇牦牛血清样本276份，发现BCoV血清阳性率为97.82%，且9个乡镇的感染率普遍较高；何琪富等检测川西北草原的125份腹泻牦牛粪便样本，发现BCoV检出率为71.20%。以上研究及本次调查结果表明，四川省牦牛群BCoV感染严重。这可能与牦牛养殖模式有关，高原地区牦牛多为放养，牛只直接暴露在粪污区域，导致感染概率增加。
四川是养牛大省，养牛业在畜牧经济中占有重要地位，做好牛冠状病毒病防控可以有效减少犊牛腹泻造成的经济损失。由于目前本病尚无商品化的疫苗，因此加强饲养管理是重要的预防措施。在日常管理中应密切关注犊牛的生长状态，一旦发现犊牛腹泻要及时采取有效的治疗措施并隔离病牛。在引进牛只时应进行严格的检疫，防止引入带毒牛。同时各地应根据当地特殊地理环境、不同牛种资源，制定防控BCoV流行的有效措施。鉴于目前牛冠状病毒病已在国内多个地区的牛群中形成一定程度的流行，建议加强对本病的监测以及疫苗研发。
结论
调查认为：四川省牛群中普遍存在BCoV感染，尤其以牦牛群感染最严重；BCoV已成为导致牛群腹泻的重要病原之一，对其流行的控制不容忽视，需要加强病原监测和疫苗研发。
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