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摘要：为全面掌握云南省玉溪市小反刍兽疫（PPR）的病原分布和羊群免疫效果，根据2021年玉溪市PPR专项监测方案，在全市开展PPR监测和流行病学调查。采用多阶段调查的方法，从全市9个县区采集免疫羊血清样品1 631份、眼鼻棉拭子样品6 438份，分别使用阻断ELISA和实时荧光RT-PCR检测方法，进行PPR免疫抗体检测和病毒核酸检测。结果显示：2021年玉溪市PPR群体免疫合格率为82.98%，个体免疫合格率为83.62%，未检测到病原学阳性样品；不同养殖区域、不同性别的免疫抗体合格率均有统计学差异（P＜0.05），而不同养殖类型、不同企业疫苗的免疫抗体合格率差异均不显著（P＞0.05）。结果表明：玉溪市羊PPR整体免疫效果较好，所用PPR疫苗免疫原性较好，免疫程序合理，但部分县区的免疫合格率较低，因此应继续加强PPR的强制免疫及补免工作；在未引入新疫源的前提下，疫情发生风险较低，但应加大羊只引种检疫和调运监管力度。本次监测评估了玉溪市的PPR总体防控状况，为尽快实现消灭PPR的目标提供了数据支撑。
小反刍兽疫（peste des petits ruminants，PPR）由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起，又称为“羊瘟”，世界动物卫生组织（WOAH）将其列为须通报动物疫病，并列入2030年根除目标。PPR对羊群危害严重，引起的感染率和死亡率高达90%。PPRV属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus），具有高度传染性，主要通过密切接触传播，也可通过呼吸系统传播。PPR一年四季均可发生，但多发于雨季及干燥寒冷季节。PPR潜伏期通常为3~21 d，WOAH在《陆生动物卫生法典》中规定为21 d。2007年，我国首次发生PPR疫情，引发毒株为基因IV系，与周边国家流行的毒株属同一系。
目前，对PPR尚无有效的治疗方法，疫苗免疫是其主要防控措施。2014年4月初，云南省多个市州发生输入性PPR疫情，其中包括玉溪市。此后，玉溪市开始实施PPR强制免疫措施。有条件的规模养殖场，按本场免疫程序或结合群体免疫抗体监测情况进行适时免疫。而对散养户，每年开展春秋两季集中免疫，对所有种公羊、种母羊（空怀）、育肥羊、羔羊（1月龄以上）进行集中免疫，并及时进行补免、加强免；免疫接种人员主要为乡村兽医、动物防疫合作社成员和畜主，疫苗为政府统一购买的商品化活疫苗。近年来，玉溪市养羊业发展逐步加快，羊存栏量逐年增长。2020年以来，全市羊饲养量基本维持在35万只以上，年出栏30万只以上。其中，山区、半山区总存栏约占全市存栏的68%，以散养为主，多数贫困户依靠山羊养殖实现了脱贫。因此，切实做好PPR防控，事关玉溪市养羊业的持续健康发展，事关农户增收，意义重大。
为全面摸清玉溪市PPR流行情况及疫苗免疫效果，加快推进PPR无疫区建设及净化工作，2021年玉溪市动物疫病预防控制中心对全市羊群开展了专项监测，以期为该病的综合防控，免疫退出评估，最终实现消灭PPR的目标提供数据支撑。
材料与方法
监测目标群
2021年3月，玉溪市动物疫病预防控制中心对所辖9个县区分别统计羊存栏情况，将全市1 084个羊养殖场群（存栏100只以上的规模养殖场，1个行政村内所有散养户存栏羊作为1个群体）作为目标群。
监测单元
场群层面，抽样单元为每个规模场和行政村；场内层面，抽样单元为所有免疫PPR的羊只。
抽样方案
本次专项监测集中采样时间为2021年4—5月。根据全市养殖存栏情况，采用多阶段随机抽样方法，先抽取场群，再抽取个体，采集免疫血清和眼鼻棉拭子样品。
血清学样品 第一阶段，计算全市开展PPR免疫效果评估所需抽样的场点数。以估计流行率计算样本量，按照95%的置信水平、85%的预期免疫合格率（根据2017—2020年监测结果确定）、10%的可接受误差，利用公式（1）计算出抽样场点数。依据全市共有1 084个羊养殖场群，计算得出应采集47个养殖场点。根据规模场与行政村场点比例，按比例分配规模场点24个、行政村场点23个。再根据各县区场群比例，通过分层比例抽样，确定各县区抽取场点数。
 （1）
式中，n为抽样个数，p为预期流行率，z为统计量（置信水平为95%时，z2=1.962），e为可接受的最大绝对误差。第二阶段，计算所需的抽样羊只数量。采用预估流行率方法，按照95%的置信水平、85%的预期免疫合格率（根据2017—2020年监测结果确定）、10%的可接受误差，根据抽出场点的存栏确定具体采样数量。采样时，群内随机选羊，按系统随机方法抽样。
病原学样品 第一阶段，计算全市开展PPR病原学检测所需抽样的场点数。以发现疫病或证明无疫方法计算样本量的抽样策略，按照估计场点流行率3%、置信水平95%，依据公式（2）计算出抽样的场点数，运用按比例随机分层抽样的方式抽取监测场点。全市1 084个羊养殖场群，计算得出应采集95个养殖场点。根据规模场与行政村场点比例，按比例分配规模场点48个、行政村场点47个。再根据各县区场群比例，通过分层比例抽样，确定各县区抽取场点数。
 （2）
式中，n为抽样个体数，CL为置信水平，Se为检测方法的敏感性，N为群体数，D为阳性动物数（群体数与预定流行率的乘积，即D = N×p）。第二阶段，计算所需的抽样羊只数量。采用证明无疫的方法，按照3%的预期流行率、95%的置信水平，计算出每个规模场（村）所抽取的羊只数量。采样时，群内随机选羊，按系统随机抽样方法。
检测方法与试剂
对采集的血清样品，采用PPRV阻断ELISA抗体检测试剂盒（科前生物公司）和酶标仪（型号anthos 2010，安图生物公司）进行PPRV免疫抗体检测。
对采集的棉拭子样品，采用探针法荧光PCR试剂盒（TakaRa One Step PremixScriptTM RT-PCR kit）、荧光定量PCR仪（ABI QuantStudio 7 Flex）进行PPRV核酸检测。
结果与分析
免疫抗体检测
总体情况 按照估计流行率计算样本量的抽样策略，计划采集免疫血清样品1 641份，实际采集并检测免疫血清样品1 631份，检出PPRV抗体合格样品1 364份，免疫个体合格率为83.62%，达到了国家要求的抗体合格率70%以上的标准。共检测47个养殖场点，合格场群39个，群体合格率为82.98%。
不同养殖类型 本次血清学监测涉及47个场点，其中规模场24个、行政村23个，群体免疫合格率分别为83.33%、82.61%，个体免疫合格率分别为82.50%、84.83%。不管是从场群水平（P = 0.95＞0.05），还是从个体水平（P = 0.20＞0.05）看，差异均不显著。具体结果见表1。
不同养殖区域 不同县区的统计结果（表2）显示：最高的PPRV免疫抗体个体合格率为97.13%，最低的为63.73%，不同区域间免疫抗体水平有差异，部分县区差异显著（P＜0.05）。
不同企业疫苗 本次采集的羊血清样品，涉及2个厂家生产的2种疫苗，分别是A公司生产的“小反刍兽疫弱毒活疫苗（Clone9株）”和B公司生产的“小反刍兽疫-山羊痘二联活疫苗（Clone9+AV41株）”。本次采样流调中，明确记录免疫疫苗厂家的羊血清样品1 208份，2个企业生产的PPR疫苗免疫合格率均高于国家规定的最低70%的保护水平，且不同企业疫苗的免疫抗体合格率差异不显著（P = 0.06＞0.05）。具体结果见表3。
不同羊只性别 本次监测评估明确记录性别的羊血清样品1 517份，其中公羊458份、母羊1 059份，个体合格率分别为88.86%、81.96%，具有统计学差异（P＜0.01）。具体结果见表4。
病原学检测
9个县区涉及95个场点（规模场48个、行政村47个），共采集羊眼鼻棉拭子样品6 438份，均未检测到PPRV核酸阳性样品。
讨论
不同养殖规模免疫情况
监测发现，不同养殖规模免疫群体合格率与个体合格率均超过国家规定的最低标准70%，且不具有统计学差异，说明玉溪市对散养户的PPR免疫重视程度越来越高。随着动物防疫合作社的普及，合作社专业队伍为散养户进行统一免疫，免疫效果逐步提升，春秋两防免疫工作开展有一定成效。
不同区域免疫情况
玉溪市9个县区中，仅1个县区的PPR个体合格率低于70%。通过对比发现，该县区不同养殖类型的场点抗体合格率均较低。该县区多为山地散养，村落分布较散，这给羊群免疫带来了诸多不便，可能存在漏免现象；同时部分村落因路途较远，可能存在因疫苗保存不当，造成疫苗失效的情况。后期需要继续加大对散户免疫的重视力度，配备完善的疫苗免疫设施和工具，同时加大对基层防疫员的免疫技术培训，使其规范免疫操作。对于免疫抗体较低的地区，要重点监测和监管，及时做好补免工作。
不同厂家疫苗免疫情况
两个企业的PPR疫苗免疫合格率均高于国家规定的保护水平，表明两个企业生产的PPR疫苗免疫原性良好，能够起到抵御PPRV感染的效果，建议后期持续监测两种疫苗的免疫效果。
不同性别免疫情况
公羊免疫抗体水平明显高于母羊。这是因为公羊大多作为种羊来饲养，免疫重视程度相对较高，且饲养周期长，免疫次数多；而母羊饲养周期相对较短，加之母羊怀孕期间不建议免疫，且部分畜主怕影响母羊的生产性能拒绝免疫，可能出现漏免情况。因此，在每年春秋两季集中免疫的基础上，应根据免疫记录，及时对漏免的孕、幼畜进行补免，使应免羊只免疫密度长期保持较高水平，同时加大对养殖户免疫知识的宣贯，充分落实其免疫主体责任。
病原检测情况
本次监测未检测到PPRV核酸阳性样品，说明发生PPR的风险较低。目前玉溪市最大的风险来自于未经检疫外购羊只的流入，今后应重点加强引入羊群的检疫监督工作，加大活羊调运监管力度，加强引种及外购羊的检疫检验，防止发生输入性疫情。
图片
小结
玉溪市PPR免疫效果整体较好，辖区内发生的PPR风险较低，但部分县区免疫合格率偏低。因此，应持续做好该病的免疫和监测，加大防疫知识宣传力度，提高养殖户免疫意识，加强防疫人员培训，整体提高玉溪市疫病防控能力，尽快实现消灭PPR目标。
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