自1902年首次在动物胃肠道中发现了活性肽类物质(促胰腺素)以来,具有特殊功能的多种生物活性肽不断被发现,其作用效果的研究也随之不断深入。多年来,我国畜禽疾病频发及畜产品质量安全问题一直是困扰养殖业的难题,因而生物活性肽产品以其安全无毒及具多种生物学功能的优势早已引起国内外养殖业的关注。
目前有多种获得生物活性肽的途径,可以从生物体中分离获得天然活性肽,可以酶解蛋白质获得活性肽,还可以通过化学法和DNA重组技术合成生物活性肽。本试验研究了两种化学法人工合成的活性肽对肉鸡免疫功能的影响,旨在了解对肉鸡的免疫调节作用,为其临床推广应用提供理论依据。
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材料与方法
试验材料
两种合成活性肽。IgG、IgM、补体C3、IL-2和IFN-γ、溶菌酶检测试剂盒、新城疫抗原等。
试验方法
1 440只健康1 d AA肉仔鸡随机分为8个处理,每个处理6个重复,每个重复30只鸡。试验组分别于饮水中添加低、中、高(10、20、40 μg/kg体重)剂量的肽I及肽Ⅱ;杆菌肽锌对照组于基础饲粮中添加200 mg/kg杆菌肽锌;空白对照组不作任何添加。所有组别均饲喂基础饲粮,自由饮用自来水,按常规饲养,饲养管理条件一致。
检测指标与方法
分别于21 d和42 d每组每重复随机取2只鸡,心脏或翅静脉采血,离心分离血清,-20℃保存待测。
血清新城疫(ND)HI抗体效价
采用血凝及血凝抑制(HA-HI)试验测定ND抗体效价,结果以log2的平均值表示。
血清IgG、IgM及补体C3含量
血清IgG、IgM 及补体C3含量检测,按照酶联免疫试剂盒操作程序。
细胞免疫功能指标
血清IL-2、IFN-γ含量检测,按照试剂盒操作程序。
血清溶菌酶含量
按照血清溶菌酶含量检测试剂盒操作程序。
免疫器官指数
分别于21 d和42 d每组每重复随机取2只鸡,屠宰,取胸腺、脾脏、法氏囊,用电子天平准确称重,计算免疫器官指数。
计算公式:免疫器官指数(g/kg)=免疫器官重/体重2
结 果
两种生物活性肽对肉鸡血清新城疫抗体效价的影响试验鸡血清新城疫抗体效价结果见表1。21 d时,血清新城疫抗体效价肽I高剂量组最高,分别较肽I低组、杆菌肽锌组和空白对照组高18.66%、12.58%和8.69%(P<0.05);20 μg/kg体重肽I组及40 μg/kg体重肽Ⅱ组显著高于杆菌肽锌组和空白对照组(P<0.05)。42 d时,血清新城疫抗体效价各试验组均略高于空白对照组(P>0.05)。
两种生物活性肽对肉鸡血清IgG和IgM 含量的影响试验鸡血清IgG和IgM含量见表2。其中,IgG含量在21 d时肽I和肽Ⅱ高剂量组(40 μg/kg体重)显著高于空白对照组(P<0.05),42 d时10、20、40 μg/kg体重肽I组和20、40 μg/kg体重肽Ⅱ组均显著高于杆菌肽锌组和空白对照组(P<0.05)。
两种生物活性肽对肉鸡血清细胞因子IL-2、IFN-γ含量的影响试验鸡血清细胞因子IL-2和IFN-r含量见表3。
两种生物活性肽对肉鸡血清溶菌酶和补体C3含量的影响试验鸡血清溶菌酶和补体C3的含量见表4。
两种生物活性肽对肉鸡免疫器官指数的影响
试验鸡免疫器官指数见表5。
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讨 论
生物活性肽对肉鸡体液免疫功能的影响
抗体效价常用于判断肉鸡的免疫效果以及鸡群的健康状况,在很大程度上反映了机体对病毒感染的抵抗力水平。血清免疫球蛋白为抗体的重要组成成分,IgG和IgM是机体的主要免疫球蛋白,其血清含量是机体免疫力的重要反应指标。韩雪娇等报道,饲粮中添加抗菌肽可显著提高肉鸡血清IgG含量( P<0.05),对血清IgM含量也有一定的提高作用。本试验所用活性肽为人工合成的短链肽,与上述报道所用肽来源和结构不同,但对肉鸡体液免疫功能的增强作用与之一致。
生物活性肽对肉鸡细胞免疫功能的影响
细胞因子是免疫细胞和组织细胞分泌在细胞间,具有传递信息作用的一类小分子可溶性多肽蛋白质,通过结合相应受体调节细胞生长、分化和效应,从而调控免疫应答。白细胞介素2和γ干扰素由Th1细胞分泌,属于Th细胞亚群,参与细胞免疫,辅助T细胞分化,介导免疫应答。李金莲发现添加抗菌肽可以显著提高42日粮肉鸡血清IL-2和IL-6含量。本试验结果与上述研究结果一致。
生物活性肽对肉鸡非特异性免疫功能的影响
血清溶菌酶和补体C3是机体重要的非特异性免疫因子。溶菌酶具有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复等作用,补体C3是存在于血清和组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质。韩雪娇等研究发现抗菌肽对肉鸡血清溶菌酶含量有提高作用。本试验结果与上述报道一致。可见,上述不同来源和结构的活性肽均具有提高机体非特异性免疫因子生成的作用。
生物活性肽对肉鸡免疫器官指数的影响
免疫器官指数是反应免疫器官发育状况的指标之一。都海明报道,饲粮添加4000 U/kg抗菌肽使肉鸡法氏囊指数和胸腺指数分别提高41.48% (P<0.05)和69.91% (P<0.01),但王静研究报道日粮中添加抗菌肽对肉鸡免疫器官指数未产生明显影响。本试验结果显示,肽I和肽Ⅱ分别对提高肉鸡胸腺指数和法氏囊指数有显著效果,但对脾脏指数无显著影响。上述研究结果的不一致,可能与肽的种类、使用剂量等不同有关。
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