本文对武进地区鸭传染性浆膜炎进行病原流行病学调查,分析该地区鸭疫里氏杆菌的血清型状况,以期为本地区该病防控找到方法。
一 材料与方法
1 细菌的分离
从武进区4个乡镇30个规模养鸭场收集疑似鸭传染性浆膜炎的病料,无菌剖取病鸭的大脑,接种于鲜血琼脂平板,37%:烛缸培养24小时,并挑取疑似菌落进行纯化培养。
2 分离菌株鉴定
将疑似菌株接种于胰酪胨大豆琼脂(TSA),37℃烛缸培养24小时后的培养物进行革兰氏染色,光学显微镜下观察细菌的形态和染色特性。
将疑似菌株分别接种于普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、鲜血琼脂平板、TSA平板及含2%犊牛血清的胰酪胨大豆肉汤(TSB)中,并分别置37℃恒温箱和烛缸内培养24~48小时,观察细菌的生长情况、菌落特征及溶血情况等。
采用微量发酵管进行葡萄糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、甘露糖、蔗糖、尿素酶、H2S和硝酸盐还原试验;吲哚、MR、V—P、过氧化氢酶试验等参照文献进行;运动力测定采用半固体穿刺法,同时设RAF2作对照。
3 血清学鉴定
将PCR鉴定的菌株24小时培养物按文献介绍的方法进行玻板凝集试验,鉴定其血清型。
4 药敏试验
将分离的纯培养细菌分别致密划线于绵羊血琼脂平板,将10种药敏纸片贴于琼脂平板表面,倒置平板,37℃培养24小时观察药敏效果。
二 结果
1 细菌分离
共采集520份疑似鸭传染性浆膜炎病样,将所获得病鸭的大脑组织接种于鲜血琼脂平板,经37℃厌氧培养24小时后,共有279份样品长出病原菌,其中94份病料分离出乳白色透明微凸起的圆形菌落,菌落大小约1mm左右,且不溶血。弃去长有4mm左右的灰白色菌落或其它杂菌落的其余病料。
2 形态观察
其纯培养物经革兰氏染色结果为阴性的短杆菌,不形成芽孢,单个或成双排列,偶见稍长的丝状菌,瑞氏染色,大部分呈两极浓染。
3 培养特性
接种在普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板上均不生长;接种于鲜血琼脂平板于烛缸中培养24~48小时,菌落直径达1~2mm,边缘整齐、透明,均不溶血;而常压通气条件下培养形成的菌落数量比竹缸内培养的明显减少,且菌落也较小;接种于TSB(含2%犊牛血清)培养基37℃培养24~48小时表现均匀浑浊,不形成菌环、菌膜。
4 生理生化特性
疑似菌株不能发酵糖类,明胶酶、尿素酶和过氧化氢酶阳性,不产生吲哚和H2S,不能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
5 血清学鉴定结果
疑似菌株与鸭疫里氏杆菌1、2阳性诊断血清进行凝集反应后,不能鉴别的菌株再与鸭疫里氏杆菌1、2阳性诊断血清以外的其他血清进行玻板凝集试验。结果显示,疑似菌株中有32株与2型阳性血清出现凝集反应,有25株与1型阳性血清出现凝集反应,余下37份疑似菌株除12份与已知1-15血清型不能反应外,其余25份分别与5、7、12等血清型菌株的阳性血清出现凝集反应。阳性对照菌分别与相应血清出现凝集反应,空白对照不出现凝集。
6药敏试验
对分离到的细菌进行药敏试验发现,对氨苄青霉素、复方新诺明、庆大霉素、氟哌酸、阿米卡星、环丙沙星耐药;对氟苯尼考、头孢他定、头孢噻肟、头孢西丁中度敏感。
三 讨论
本实验对江苏武进地区鸭传染性浆膜炎进行了流行病学调查,发现该地区鸭疫里氏杆菌流行菌株除传统的血清1、2型外,血清5、7、12型也有一定的比例,用常规的血清1型灭活疫苗免疫预防效果肯定有限。同时,分离菌株中除鸭疫里氏杆菌外,大肠杆菌等细菌亦是常见的病原菌,也可引起鸭的死亡。在该次病原流行病学调查中,鸭疫里氏杆菌的病原分离比例偏低,可能与病料保存时间偏长或鸭群曾大量使用药物有关。
由于缺乏商品化的鸭传染性浆膜炎疫苗,本病的控制长期依赖于药物。疫苗是控制传染病的有效手段,在鸭传染性浆膜炎病的控制中亦如此。但是,鸭疫里氏杆菌具有多个血清型,不同血清型之间缺乏交叉保护,本文对武进地区鸭传染性浆膜炎进行病原流行病学调查,确定该地区鸭疫里氏杆菌的优势血清型,在此基础上,筛选免疫原性良好的菌株制备疫苗,将有利于该地区鸭传染性浆膜炎的免疫预防。
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