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湖南省部分地区病猪和屠宰猪群猪圆环病毒感染状况调查
现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2022/2/26 10:43:36 关注：420 评论： 我要投稿
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摘要：为了解湖南省猪圆环病毒（PCV）流行情况，采用荧光PCR方法，对来自湖南省14个市州的821份临床病料和屠宰场猪淋巴结样品进行PCV1、PCV2、PCV3和PCV4荧光PCR检测。结果显示：在821份样品中，PCV阳性检出率为88.06%（723/821），阳性检出率由高到低依次为PCV2（81.49%）、PCV3（33.98%）、PCV1（8.04%）和PCV4（1.10%）；278个样品存在两种及以上的PCV混合感染，以PCV2+PCV3混合感染最多，占82.01%；在地域分布上，PCV1、PCV2、PCV3在湖南省各地区均有分布，而PCV4分布范围较小，感染率低。结果表明，湖南省内PCV流行较为普遍，4种基因型病毒都存在，但以PCV2流行最为广泛，需要加强防控。
猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）具有环状单股负链DNA基因组，是圆环病毒科圆环病毒属成员。PCV按其致病性、抗原特异性可分为4种基因型，分别为PCV1、PCV2、PCV3和PCV4型。PCV1在1974年由Tischer等在猪肾细胞中发现，此后证实该病毒不会造成猪细胞病变，对猪无致病性。PCV2在20世纪90年代出现，随后分布全球，具有严重致病性。PCV3是Palinski等于2016年在患有猪皮炎和肾病综合征的急性病死母猪中检测发现的新型PCV。2019年张慧辉等在湖南省患有严重临床疾病的猪只中发现了另一种新的PCV，被命名为PCV4。
与PCV相关的疾病包括猪断奶后多系统衰竭综合征、猪皮炎肾病综合征、先天性震颤、繁殖障碍和增生性坏死性肺炎等。PCV作为猪圆环病毒病的主要病原，在全国范围内广泛存在。近年来，PCV2和PCV3的感染率呈逐年增加趋势，对我国养猪业造成了巨大经济损失，而新发现的PCV4也是对养猪业造成威胁的潜在致病因素。本研究通过对来自湖南省2017—2020年部分地区的821份样品进行PCV1、PCV2、PCV3和PCV4的荧光PCR检测，了解湖南省PCV流行情况，以期为湖南省猪圆环病毒病防控提供参考。
材料与方法
材料
样品采集 本研究样品均于2017—2020年由湖南省动物疫病预防控制中心收集并储存于-80 ℃超低温冰箱，共821份样品，包括采自湖南省14个市州猪场的151份病猪心、肝、脾、肺和肾等组织（同一病猪组织混合研磨后算1份样品），其中2017年68份、2018年32份、2019年23份、2020年28份；2020年4月与12月，采自湖南省14个市州屠宰场的670份猪淋巴结样品。
主要试剂和设备 PCV1和PCV2型双重实时荧光PCR检测试剂盒，PCV3型实时荧光PCR检测试剂盒，购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司；DNase-Free Deionized Water和2×SuperRealPreMix（Probe），购自天根生物科技有限公司。7500 Fast Real-Time PCR System，购自赛默飞ABI公司；组织研磨仪，购自德国Retsch；核酸提取仪和病毒DNA/RNA提取试剂盒，购自西安天隆科技有限公司。
方法
材料处理 在生物安全柜中用无菌剪刀剪下一小块组织放于2.0 mL离心管中，加入研磨钢珠和1.5 mL生理盐水，并编号，对称放置于组织研磨仪研磨3 min，12 000 r/min离心5 min。根据西安天隆自动化核酸提取仪说明进行核酸提取，提取核酸保存于-30 ℃。
引物合成 PCV1、PCV2和PCV3检测所用引物和探针均由试剂盒提供。PCV4检测根据文献建立的荧光PCR方法进行。引物和探针，由擎科生物有限公司合成，引物序列见表1。
荧光PCR检测 PCV1和PCV2检测，根据PCV1和PCV2型双重实时荧光PCR检测试剂盒说明书进行；PCV3检测，根据PCV3型实时荧光PCR检测试剂盒说明书进行；PCV4检测反应总体系为20.0 μL：无核酸酶水5.4 μL，2×SuperReal PreMix（Probe）10.0 μL，上下游引物（10 μmol/L）各0.6 μL，探针0.4 μL，DNA模板3.0 μL。荧光PCR反应程序：95 ℃ 5 min；95 ℃ 5 s，63 ℃ 35 s，进行50次循环，在每次循环的第二步（63 ℃ 35 s）时收集荧光信号。
结果描述及判定 PCV1、PCV2、PCV3的检测结果判定，按试剂盒使用说明书标准；PCV4的检测结果判定，当Ct＜45并出现特定的扩增曲线时判为阳性。
结果与分析
总体情况
821份样品的病原检测结果（表2）显示：PCV2阳性检出率最高，为81.49%；PCV3、PCV1阳性检出率次之，分别为33.98%和8.04%；PCV4阳性检出率最低，为1.10%。上述结果说明目前已知的4种PCV基因型在湖南省内均有分布，以PCV2感染为主。
混合感染情况
821份样品中，存在PCV感染的723份，阳性检出率为88.06%，其中PCV1、PCV2、PCV3单一感染在723份感染样品中分别占3.46%、55.0%和3.04%，无PCV4单一感染。
723份PCV感染样品中，有278份样品存在双重或三重混合感染，主要表现为双重感染，占93.17%。双重感染中，以“PCV2+PCV3”为主，阳性检出率为82.01%，而其他双重感染类型的阳性检出率较低，其中“PCV1+PCV2”为7.19%，“PCV1+PCV3”为1.80%，“PCV2+PCV4”为1.80%，“PCV3+PCV4”为0.36%；三重感染中，“PCV1+PCV2+PCV3”阳性检出率为5.76%，“PCV2+PCV3+PCV4”为1.08%。
不同地区情况
临床病料样品 临床病料样品检测结果（表3）显示，在151份临床病料样品中，PCV1、PCV2、PCV3和PCV4的阳性检出率分别为4.64%、69.54%、16.56%和3.31%。其中：PCV1与PCV2阳性检出率最高的是湘北地区，分别为10.00%和80.00%；PCV3阳性检出率最高的是湘东地区，为32.61%；PCV4仅在湘西地区检测出5例阳性，分别来自3个猪场。
屠宰猪群淋巴结样品 猪淋巴结样品检测结果（表4）显示，在670份屠宰场样品中，PCV1、PCV2、PCV3和PCV4的阳性检出率分别为8.81%、84.18%、37.91%和0.60%。其中：PCV1阳性检出率最高的是湘南地区，为16.67%；PCV2阳性检出率较高的是湘北和湘西地区，分别为92.73%和91.54%；PCV3阳性检出率较高的是湘西和湘中地区，分别为57.69%和45.71%；PCV4只在湘东地区检出4例，阳性检出率为2.86%。
讨论
检测结果显示，PCV在湖南省以PCV2流行最为广泛，平均阳性检出率高达81.49%。从样品的混合感染情况可以看出，湖南省的PCV感染以PCV2单一感染及“PCV2+PCV3”混合感染为主，在阳性样品中的占比分别为55.0%和82.01%。
PCV1普遍被认为不具有致病性，因此有关我国PCV1检测的报道较少。在已有的报道中，PCV1阳性率为6.3%~34.0%。本调查发现湖南省PCV1阳性检出率为8.04%，与已有报道基本一致。本调查发现，PCV1在湖南省各地区均有分布，且健康屠宰猪样品阳性检出率高于临床病料，但阳性率均低于10%，其原因可能与PCV1不具有致病性有关。
PCV2在湖南省流行已有较长时间。研究表明，2017—2018年湖南省PCV2阳性率为70.7%。本调查发现PCV2阳性检出率为81.49%，略高于同时间段的其他报道，这可能与本次调查的样品既有临床健康屠宰猪群，也有临床发病猪群有关，但调查数据均表明PCV2在湖南省流行较为严重。
PCV3早在2014年就已在我国部分地区商业猪场出现，而湖南省的感染情况于2017年才被首次报道。本调查发现PCV3阳性检出率为33.98%，略高于刘相聪2018年对湖南省的PCV3检测结果（30.43%），表明湖南省PCV3流行可能有上升趋势。
PCV4于2019年在湖南省首次被发现。本调查共检出PCV4阳性9份，阳性检出率为1.10%，与国内其他报道相似。Zhang等2020年检测发现，湖南湘东、湘西、湘南和湘中地区均有PCV4分布，其中湘中地区较多，占75%，而湘西地区无阳性。但本次调查发现，湖南省PCV4呈小范围分布，仅在湘西地区2017年临床病料样品和湘东地区2020年屠宰场健康猪组织样品检测到PCV4阳性，说明湖南省PCV4早在2017年就已经存在，其流行范围开始逐步扩大，需要引起重视，加强监测。
结论
调查发现：PCV1、PCV2和PCV3在湖南省内分布广泛，其中PCV2流行最为严重，需要加强防控；PCV4在湖南省呈局部分布，但流行范围有逐步扩大趋势，需要加强监测。
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| 文章作者：何世成等 中国动物检疫 文章编辑：一米优讯 |
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