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2004年11月15日，溧阳市某鸡场饲养的2000只150日龄左右的罗曼蛋鸡发病。病鸡多呈急性经过，主要表现为精神沉郁，羽毛松乱，缩颈闭眼，头缩在翅膀下，常独立一隅，不愿活动；有的出现腹泻，排出绿色稀粪，肛门四周被稀粪沾污；食欲减退或废绝，饮水增加；呼吸困难，口、鼻有粘液性分泌物，流出混有泡沫状粘液，张口伸颈，摇头，试图排出蓄积在喉部的粘液；鸡冠和肉髯肿胀，严重的呈青紫色。个别病鸡无任何前驱症状，就突然死去。该病病程较短，一般发病半至一天即死亡。第一天死亡30只，以后每天死亡50只左右。至就诊时已死亡约200只，病死率达lO％。发病期间曾使用青霉素、链霉素治疗，病情有所缓解，但很快复发。经了解，发病鸡群是同一批引进的。鸡群曾进行新城疫、法氏囊病、传染性支气管炎和禽霍乱的免疫。2月龄时曾注射过一次禽霍乱灭活苗。共送检病死蛋鸡4只，对其进行实验室诊断，以确诊疾病，并制定了防治措施。
1. 材料与方法
1.1 病料
病料来自溧阳市某鸡场已死的送检罗曼蛋鸡4只；营养琼脂粉(购自中国医药集团上海化学制剂公司)、清洁级ICR小鼠4只(来自扬州大学实验动物中心动物房。
1.2病理学诊断
1.2.1大体病变观察：解剖病死鸡，观察其病理变化。
1.2.2 显微病变观察：无菌操作采取病变明显的肝组织置于10％中性福尔马林固定液中固定，常规制作石蜡切片。组织切片经H.E染色并镜检。
1.3 微生物学诊断
1.3.1细菌抹片：无菌操作采病变肝组织制成抹片，以瑞氏染色液进行染色。
具体操作如下：(1)抹片：对肝脏表面进行无菌处理后，用灭菌剪刀剪取一小块肝组织，夹出后将其新鲜切
面在玻片上压印成一薄片。
(2)干燥并固定抹片。
(3)染色：抹片固定好后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加瑞氏染色液，至略浸过滤纸，并看情况补滴，维持不使变干；染色3 rain后，滴加与染液等量的中性蒸馏水，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，经3 rain，除去滤纸片，直接用水冲洗，吸干或烘干，镜检。
1.3.2 细菌分离：无菌操作采病变组织用血液琼脂平皿和普通培养基进行分离培养，第二天观察培养基中的生长情况和菌落特征，并镜检细菌。具体操作如下：
(1)制备营养琼脂。
(2)制备鲜血琼脂。
(3)细菌分离培养：无菌操作采肝、心内积液进行涂布，分别涂布于鲜血琼脂和普通培养基，于恒温箱中37℃培养24h。(4)革兰氏染色：在洁净载玻片上滴一滴生理盐水，用接种环挑取培养基上的明显菌落，在生理盐水上涂成1 em2涂面，在已干燥、固定好的涂片上滴加草酸铵结晶紫染色液，经2-3 min，水洗。加革兰氏碘溶液媒染，作用30-60 s，水洗。加沙黄水溶液复染30～60s，水洗。吸干或自然干燥，镜检。
1.3.3 动物接种试验：无菌采取病变明显的肝组织研磨成乳剂，接种小鼠，第二天观察小鼠情况。具体操作如下:
(1)接种小鼠：无菌分别采取3、4号鸡的肝脏剪碎，研磨(研磨器中加入灭菌生理盐水)后离心8000t／m，15 min，离心2次取上清液，分别通过皮下接种1、2号小鼠，每只接种0．2mL。另设对照小鼠2只。
(2)第二天观察各小鼠情况并进行对照，如小鼠接种后死亡，剖检观察其病理变化。
(3)取血液或肝组织作成涂片，以瑞氏染液染色，观察细菌的形态特征。并无菌取心血、肝等病料接种于血液琼脂，次日观察在此培养基中的生长情况和菌落特征。
2. 结果
2.1 病理学诊断结果
2.1.1 大体病变观察：剖检病理变化主要为肝肿大，质脆易破裂，表面散布灰白色、针头大的坏死点。其中4／4鸡冠肿胀呈紫色，2／4肉髯出血，1／4喉头充血，2／4气管有粘性分泌物，3／4心包积液，4／4肺充血淤血，4／4肝脏肿大、有坏死点，2，4脾脏肿大有坏死灶，4／4卵巢出血，3／4肠道出血。
2.1.2 组织切片结果：肝组织内散在许多由坏死肝细胞和炎性细胞组成的凝固性坏死灶。坏
死灶表现肝细胞胞浆凝固，胞核崩解，并有炎性细胞渗出
2.2 微生物学诊断结果
2.2.1 细菌抹片：镜检可见抹片中有大量两极浓染的卵圆形小杆菌。
2.2.2 细菌分离：恒温箱内37℃培养24h后，该菌在普通培养基上不生长，而血液琼脂上生长出许多淡灰色、圆形、湿润、露珠样小菌落，菌落周围无溶血区，此时从典型菌落勾菌制成涂片，进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性两极浓染的短小杆菌。
2.2.3 动物接种试验：接种的2只小鼠在24 h内即死亡，对照小鼠均健康存活。小鼠因急性死亡，外观未见异常。死后剖检，在接种局部可见皮下组织发生水肿，1号小鼠(接种3号鸡的肝脏研磨液)病变不明显；2号小鼠(接种4号鸡的肝脏研磨液)病变明显，皮下组织有出血点，肝脏肿大，质脆，肝表面散布许多灰白色、针头大的坏死点。无菌操作取2号小鼠肝组织作成涂片，用瑞氏染液染色，镜检可见明显两极浓染的短小杆菌。无菌取肝组织接种于血液琼脂，置于恒温箱内37℃培养24 h后观察生长情况。可见鲜血琼脂中生长出许多淡灰色、圆形、湿润、露珠样小菌落，菌落周围无溶血区。从典型菌落勾菌制成涂片，用瑞氏染色液染色，镜检，可见两极浓染的小杆菌。根据以上的临床症状和病理变化作出的初步诊断，结合实验室检验
结果，确诊为鸡多杀性巴氏杆菌病，即禽霍乱。
3.防治措施及效果
根据该病的流行病学特点和该菌的特性，对鸡场制定了如下治疗措施：
3.1 未发病鸡群与发病鸡群隔离，同一群鸡群将病鸡隔离，同群假定健康鸡隔离观察1周后，如无新病例出
现，再注射疫苗。
3.2 加强饲养管理，定期对鸡舍和饲养用具进行清洗和彻底消毒，粪便及时清除。
3.3 病死鸡应集中处理，焚烧或深埋。
3.4 病鸡用灭败灵注射液每天注射2次，连用3 d。3．5病鸡每100 kg饲料中拌用恩诺沙星粉或盐酸环丙沙星20 g，连用3～5 d。鸡只死亡明显减少后，再继续投药2-3 d以巩固疗效防止复发。
3.5 健康鸡用恩诺沙星或盐酸环丙沙星拌料预防，同时在饮水中加入0．1％维生素C以减轻应激，提高鸡
群的抵抗力。采取以上措施2 d后，死亡明显减少，5 d后病情得到控制，从开始的每日死亡50只逐渐下降至个别鸡死亡。10d后鸡群恢复正常。
4.小结与讨论
4.1 根据发病鸡流行病学、临床症状、病理变化及实验室的诊断结果，确诊该鸡场发生的传染病是禽霍乱，使用灭败灵、恩诺沙星和盐酸环丙沙星对发病群进行治疗。
4.2 此次疾病的发生正处于秋冬交替季节，天气变化剧烈，多雨，应加强饲养管理，减少应激，提高鸡群的抵抗力。该鸡群曾进行禽霍乱疫苗的免疫接种，仍然发病，说明此次免疫失败。主要原因是免疫不完全。由于多杀性巴氏杆菌有多种血清群，个血清群之间不能产生完全的交叉保护，因此，应针对当地常见的血清群选用来自同一禽种的相同血清群菌株制成的疫苗进行预防接种。最好是将发病鸡的肝组织匀浆制成当地或同群疫原疫苗，给当地或同群鸡注射，效果较为理想，且免疫期较长。该鸡场爆发疾病后，曾使用青霉素、链霉素等治疗，有一定效果但不显著，而且很快复发，说明禽多杀性巴氏杆菌具有耐药性，所以发病时宜及早诊断，准确用药，在治疗过程中，剂量要合理，必要时增量或更换新药。
4.3 目前我国禽霍乱多发的原因主要有以下几点：
(1)病原菌禽多杀性巴氏杆菌的引入：带菌禽或种蛋被引进；借助污染的蛋盘、饲料进行传染；病原菌携带者的出入。
(2)所接种的疫苗保护率偏低，免疫期偏短。
(3)带菌禽、病禽及其污染物等接触导致感染。
(4)免疫程序不合理。
(5)由于某些原因，未使用禽霍乱疫苗进行免疫。
(6)禽霍乱暴发后用药物进行治疗，其他各项综合防治措施跟不上，引起复发，因而出现用药病停，停药又
发病的状态。
(7)疫区某些未发病或发
病后幸存的家禽上颚裂等部位带有病原菌。在气候突变、畜群密度过大、日粮中维生素缺乏、蛋白质含量不足或其他疾病发生等应激因素存在，病菌在抵抗力降低的带菌禽或慢性病禽体内大量繁殖，毒力增强并迅速扩散传播，从而导致禽霍乱的暴发。
4.4 多杀性巴氏杆菌是危害家禽的一种重要的细菌性病原微生物，近年来随着养禽业的发展，禽多杀性巴氏
杆菌病的爆发也呈上升趋势，由于其发病率和病死率都很高，给广大养殖户造成巨大的经济损失。但是只要能加强鸡群的饲养管理，平时严格执行鸡场兽医卫生防疫措施，以栋舍为单位采取全进全出的饲养制度，预防本病的发生是完全有可能的。
4.4.1 加强饲养管理：应有严格的隔离消毒制度，全进全出制度。每天定期清理鸡粪，鸡场人口处应设消毒池，对进出的车辆及人员进行消毒；定期用碘制剂或百毒杀对鸡舍进行消毒，定期对带菌鸡喷雾消毒，及时隔离和淘汰发病鸡只，加强死鸡的无害处理，发病鸡只和死鸡一律深埋；固定饲料配方，在气候骤变时，及时投服预防量的抗菌药物，如氯霉素、灭败灵及磺胺类药物。避免拥挤和受寒，消除可能降低机体抗病力的因素；在禽霍乱非疫区、新办鸡场和未发生禽霍乱的老鸡场，不要使用弱毒菌苗，以免将病原菌引入。
4.4.2 定期进行疫苗预防接种：在常发地区，药物治疗效果日渐降低，本病很难得到有效地控制，因此要应用疫苗进行预防。注射疫苗应安排在夜间进行，在注苗前后3 d的饲料中添加维生素C和维生素E等以减轻应激。免疫前后5 d禁用抗菌药物否则会影响免疫效果。疫苗有弱毒疫苗和灭活苗有两种弱毒疫G190E40、833和B26T1200，一般在6-8周龄进行首免，10-12周第二次免疫，常采取饮水途径接种；灭活苗有禽霍乱氢氧化铝灭活菌禽霍乱油乳剂灭活苗，一般在10-12周龄首免，16-18周龄加强免疫一次，采用颈部皮下或肌肉注射方式。但这些疫苗免疫期不长，一般为3-6个月，且应激反应比较强烈，对产蛋有一定影响。现国内有较好的禽霍乱蜂胶灭活疫苗，安全可靠，可在0 oC下保存2年，易于注射，不影响产蛋，无毒副作用，可有效防制该病。在有条件的地方可在本场分离细菌，经鉴定合格后，制作自家灭活苗，定期对鸡群进行注射，经实践证明通过l～2年的免疫，本病可得到有效控制。
4.5 发生本病时，应将病鸡隔离，严密消毒，发病鸡群还应实行封锁。同群的假定健康鸡，隔离观察1周后，如无新病例出现，再注射疫苗。发病鸡群，可试用禽霍乱自场脏器苗(系将发病鸡场的急性病鸡肝脏研细、稀释，用甲醛灭能而成)，紧急预防接种，免疫2周后，一般不再出现新的病例。
4.6 鸡群发病应立即采取治疗措施，有条件的地方应通过药敏试验选择有效药物全群给药。许多药物对该病均有一定的疗效，但存在着停药后容易复发的缺点另外长期用药，细菌会产生抗药性必须增量或更换新药，防止长期重复使用某一种药物。常用的药物有：
(1)磺胺类：磺胺嘧啶(SP)或磺胺二甲嘧啶(SM2)，0.4％～0.5％浓度拌料每日2次；磺胺喹恶林(SQ)，0．1％浓度拌料，连喂2-3 d，间隔3 d，在添加0．05％，喂2 d，再停3 d，再喂2 d。
(2)喹乙醇0．005％~0．01％浓度拌料，连用3～5 d。
(3)环丙沙星恩诺沙星等O．005％一o．01％浓度拌料，连用3-5d。
(4)氯霉素0．1％浓度拌料，连喂3—5 d。庆大霉素2万~4万U／升水，连用3-5 d
(5)敌菌净每公斤体重口服30mg，首次剂量加倍，每天2次，连服2—4 d。在治疗过程中，要做到剂量足，疗程够，当鸡只死亡明显减少后，再继续投药2～3 d以巩固疗效防止复发。
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