MIC是检验不同来源抗菌物质抗菌能力的一把“标尺”

现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2016/11/4 9:18:06 关注：362 评论： 我要投稿

　　众所周知，自然界会产生大量的具有抗菌能力的物质，像我们所熟知的抗生素、植物提取物、精油和抗菌活性肽。这些抗菌物质主要来源于植物、动物、微生物及矿物。天然的抗菌活性物质杀菌能力有强有弱，有没有合适的方法来评价不同来源抗菌物质的抗菌能力呢？
　　一、抗生素类物质的“效价”测定
　　《中国兽药典》上对多数可以在动物疾病预防和治疗中使用的抗生素抗菌能力测定，是这样规定的：抗生素的活性（效价）测定，使用抗生素微生物检定法。抗生素微生物检定法包括管碟法和浊度法。
　　管碟法，又叫抑菌圈法，是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。具体方法可采用二剂量法和三剂量法，然后根据抑菌圈直径（或面积），进行可靠性测验及效价计算，活性以IU/mg或者IU/ml来表示。
　　从上述规定来看，我们可以得出管碟法有两个必要条件，第一是必须有标准品，这种标准品由中国兽药监察所制备和标定，不是随意那个企业或个人提供的纯品或对照品。第二是供试品要在合适的浓度下（高、低剂量）测试，与供试品的浓度相近或者在一定浓度梯度内呈现线性关系，才可以通过抑菌圈直径或面积来计算效价。由此可知，管碟法是测定效价的相对值，必须有标准品，且供试品含量明确、成分相同或相近，才较为适合采用这种方法。
　　浊度法，又叫MIC法，是利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较供试品对试验菌生长抑制的程度。此方法也可同时检定标准品，作为可靠性的对照。
　　从上述规定来看，浊度法测定的是抗菌物质抑菌能力的绝对值，以最低药物浓度下，受试菌液仍可澄清，作为MIC的判定标准，以ug/ml来表示。在没有标准品作对照时，仍能检定抗菌物质的抗菌能力，应用范围更广。
　　二、非抗生素类物质的抗菌活性测定
　　除了抗生素产品，还有大量的抗菌物质具有体外和体内杀菌、抑菌的能力。这类物质多数没有标准品，也没有国家规定的检测方法，如果每个企业都提出一套各自适用的方法，会造成评价过程中的混乱和繁琐，同时并不具有说服力。在这种情况下，“借鉴”成熟的抗生素效价检测方法来帮助我们建立标准，用于检测这类物质的活性， 才是科学和客观的。
　　抗生素效价测定中使用的管碟法和浊度法，哪个更适合非抗生素类物质呢？不同的抗菌物质来源不同，抗菌活性差异很大，甚至也没有纯品，更不要说有国家承认并出售的标准品，况且在什么浓度范围，抑菌圈和活性可以成线性关系，都是未知，都需设置大量的实验条件摸索。在这种情况下，管碟法不是十分适合，我们更推荐浊度法来检测抗菌能力的绝对值，这是一把合适的“标尺”，既可定性，也可定量，科学客观，方法简单，判断过程中误差小，适于我们饲料企业使用。
　　通过浊度法得到的结果，还可帮我们判断抗菌物质在饲料中的添加剂量（大于或等于MIC值），和各类产品的性价比。
　　有些企业推荐逐级稀释抗菌物质，然后点样至平板中查看抑菌圈，认为不产生抑菌圈时的药物浓度，可判断为抗菌物质的MIC，这种方法未见于任何书籍和标准化材料，不是国际上承认的方法。我们也通过实验发现，这种方法测得的MIC值，和国际上通用的肉汤稀释法测得的MIC值，会有很大的差距。不可以用于MIC的测试。
　　三、宏量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法
　　MIC法是美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standard Institute，CLSI）推荐的抗菌药物敏感实验的检测方法，自1998年以来，卫生部将CLSI制定的药敏标准定为我国的部颁标准。在标准中，MIC法包括宏量肉汤稀释法和微量肉汤稀释法。
　　宏量肉汤稀释法采用13mm×100mm无菌试管进行，加入1ml的抗菌药物和1ml的受试菌液。样品体积大，对操作的要求相对低，误差较小，适合我们饲料厂和养殖场采用。
　　微量肉汤稀释法采用96孔板，每孔加入0.1ml的肉汤。样品体积小，对操作的要求相对高，误差较大，但一次可检测较多的样品，更适合高校和科研院所采用。
　　四、受试菌株的选择
　　根据《中国兽药典》的规定，不同的药物有不同的受试菌。这些受试菌都是标准菌株，编号如ATCC、CMCC或CVCC。之所以选择标准菌株，是因为统一、规范，美国使用的这种标准菌株，和中国使用的标准菌株，甚至中国不同地区使用的标准菌株，性质相同，检测结果一致，到哪里都承认。而如K88、K99等菌株，其分类是根据血清型而界定的，并不是严格意义的同一种菌，对同一种抗菌药物的敏感程度可能完全不同，这就失去了作为受试菌株统一评价的意义。因此实验室检测抗菌物质，都要使用标准菌株。
　　那么，对野生分离菌株的效果，怎么评定？通过大量的分离菌株对抗菌物质的MIC值，来判断抗菌物质在养殖场中的效果，如果仅仅是一两株分离菌，不具有代表性，不能说明问题。
　　综上所述，如何检测不同来源抗菌物质的抗菌能力？我们认为MIC法是一把科学、客观、公正的“标尺”，饲料企业可通过标准受试菌株，使用宏量肉汤稀释法来进行试验和操作，用同一把尺子去衡量这一类的物质，会使我们擦亮双眼，事半功倍。