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更好的塞内卡病毒检测手段将提供更好的监测工具
韩浩月 译 陈 权 审
摘要：抗体检测技术的发展能够为猪场兽医在监测猪塞内卡病毒A(Seneca Valley virus A，SVA)的流行上提供一种新工具。
中图分类号：S855.3 文献标志码：C 文章编号：1001-0769(2019)12-00
塞内卡病毒A(Seneca Valley virus A，SVA)原先以塞内加谷病毒(Seneca Valley Virus)闻名，其引发的临床疾病已经从在遥远地方猪群中的零星暴发迅速发展到在全球养猪行业中的稳定发生。该病毒可导致生长猪的口鼻部和蹄部发生水疱(水疱样)和溃疡，并会引起仔猪死亡。
尽管SVA能给养猪行业造成一系列的经济损失，但由于其所引发的临床症状与猪口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease，FMD)完全一致，因此它可能还会给养猪业带来更多的问题。当猪群中有猪出现水疱症状时，兽医需要立即调查，以确定其是否是由猪的外来疾病引发的。这使得SVA感染的确诊以及与FMD的鉴别成为监管兽医和临床兽医的一个关键性要求。
美国兽医诊断协会(包括美国南达科他州动物疾病研究和诊断实验室)对SVA的流行迅速做出了反应，他们开发了一种基于分子聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)的检测方法，可以利用该方法检测出感染猪的组织样本和棉拭子中的SVA。该方法已被兽医诊断实验室广泛采用，并且对猪场兽医区分猪的水疱问题提供了极大的帮助。
然而，相对而言这种PCR检测法在成本上可能较为昂贵，并且仅限于检测被检样本中即时出现的病毒(或病毒的核酸)。如果存在一种成本低且可以检测正在感染的猪，甚至是处于亚临床的猪的方法，从而将其更好地用于SAV的常规监测和定期监测会怎样呢？
这就是血清学方法发挥作用的地方——检测猪血液中的抗体水平，揭示动物早先感染过某种致病因子。SVA的血清学检测技术正得到快速的改进。
根据定义，血清学检测法利用抗体与抗原(一种细菌，或更加常见的是对该细菌具有特异性的蛋白质分子)之间非常特殊且牢固的化学键来表明样本中存在抗体。随后，这种交互作用必须“可见”，通常通过向检测样本中添加荧光标记物来实现。
着手精确血清学检测方法的研发不可被低估，特别是对SVA等新兴病原体。
首先，研究人员必须研究该病毒本身的结构，以便在病毒中找出其特殊的部位，通常是结构蛋白，这些部位是抗体的最佳“靶标”。在这种情况下，美国南达科他州立大学(South Dakota State University，SDSU)的研究人员获取了有代表性的SVA毒株的完整基因组序列，并将其与不同的小核糖核酸病毒(包含SVA的病毒科)的序列进行比较。这一步骤可确保SVA检测法只能鉴定SVA，而不能识别其他密切相关的病毒。SVA的这些特异性蛋白被确定后，研究人员会通过将SVA中的特异性核酸片段克隆到大肠杆菌载体中来复制它们，从而生成足够数量的蛋白质以便在检测方法的研发中使用。
接下来通过反复试验，从这些候选蛋白质中确定哪一种蛋白质在抗体检测试验中效果最佳。在这一过程中，有用的是来自感染SVA的猪群和从未感染过SVA的猪群的血液样本。SDSU的试验发现，一种名为VP2的结构蛋白是血清学检测中的最佳候选蛋白。
SDSU的研究团队正在研究多种不同的血清学检测法，如病毒中和检测法、间接荧光抗体检测法、竞争性ELISA、荧光微球免疫分析法以及其他方法。在这些检测法中，大部分都以与抗体、荧光标记物或酶不同的组合使用纯化的SVA蛋白，以显现样本中的抗体。所有这些检测法都有各自的优缺点，一般来说，病毒中和检测法具有最高的特异性(假阳性较少)，并且能够在猪感染SVA后短至5 d～7 d内检测出SVA阳性猪。其他方法的改进工作仍在继续，尤其是ELISA检测法，它能够更高效地自动化运行。
这些抗体检测法能够在SVA监测上立即向兽医提供新的工具。血清学检测对疫苗制造商测试SVA的候选疫苗也至关重要，而该检测法研发进程的分支(如单克隆抗体)在诊断过程(如病毒分离)中也很重要。随着时间的流逝，研究人员将继续完善这些检测方法，以使其越来越适用于力图对这种混淆病毒(confounding virus)进行归类的研究人员。
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