|
猪流行性腹泻的思考总结
郭昌明，王新平
（吉林大学动物医学学院，吉林 长春 130062）
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的一种临床上以呕吐、腹泻和脱水为特征的高度接触性肠道传染病，不同日龄的猪均可感染。猪流行腹泻病毒是一种有囊膜的单股正链RNA病毒。该病在猪群中反复暴发、引起仔猪高死亡率接近100%，但母猪的发病率变化大，妊娠母猪可引起轻度腹泻、无乳以及生殖周期紊乱。PEDV的潜伏期约为两天，但是根据饲养环境及试验条件的不同，潜伏期在 1～8 d不等。该病与TGEV在临床症状、流行特点及病理变化等方面极为相似，临床上极易误诊。近年来PED在美洲以及亚洲地区出现大规模的暴发，我国疫情频发，严重影响养猪健康发展。
1 猪流行性腹泻的暴发流行与历史沿革
1971年，猪流行性腹泻首次在英国报道，被称为“流行性病毒腹泻病”（Epidemic viral diarrhea， EVD），随后几年，在几个欧洲国家相继发现类似的病毒性腹泻流行病，经过与已知的猪传染性胃肠炎病毒和肠道病原微生物的比对，将其命名为EVD II以便与其他病原微生物相区分。1978年，比利时科学家Debouck首次从EVD样本中分离出病毒，并命名为冠状病毒CV777；病毒接种试验证明，CV777病毒可引起猪群发生EVD II型腹泻。1988年，Hofmann和Wyler通过向培养基中添加胰蛋白酶，使PEDV在非洲绿猴肾（Vero）细胞中连续传代并分离出病毒。在上世纪80年代和90年代，PEDV在欧洲有零星报道，呈现地方性、散发性流行；据报道，20世纪80年代PED在亚洲大面积暴发。
2013年4月，美国暴发了PEDV感染，美国暴发猪流行性腹泻时分离到的PEDV毒株与2011-2012年报道的中国毒株（中国/2012/AH2012）同源性较高。并且在不到一年的时间内，迅速传播到整个美国和与美国邻近的加拿大和墨西哥。2013年7月，墨西哥首次检测出PEDV。2013年10月，秘鲁首次检测出PEDV。2014年3月，哥伦比亚暴发了一起哺乳期仔猪高死亡率的急性腹泻，2014年9月，经实验室检测来自6个地区的54个样本，证明了该腹泻疫情为PEDV引起的感染。2014年8月，加拿大向OIE报告PED暴发的疫情；该次疫情开始于 1月份，并且影响了4个省份的58个畜群。2014年9月，多明尼加共和国的31个省暴发PED。2014年底，PEDV迅速传遍美国，并确定在32个州的猪场中都存在该病。与此同时，PED横跨太平洋，在韩国和日本暴发。2013年后我国PED流行广泛，给养猪业带来很大损失，至今还是影响养猪业发展的主要疫病。在过去10年，PEDV已经在许多亚洲国家暴发，包括泰国、菲律宾、南韩和越南南部的某些省份，应高度重视该疫病的防控。
2 PEDV特性
猪流行性腹泻病毒（PEDV）是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，是冠状病毒科α冠状病毒属的成员，目前尚未发现PEDV有不同的血清型。PEDV病毒粒子呈现多形性或近球形，直径在95～190 nm之间。病毒粒子由糖基化的纤突蛋白（S）、Poll（P1）、囊膜蛋白（E）、糖基化膜蛋白（M）和非糖基化RNA结合的核衣壳蛋白（N）构成。
虽然大多数由冠状病毒基因编码的结构蛋白已被彻底研究，但是对辅助蛋白的功能却知之甚少，在进行细胞培养病毒时不需要辅助蛋白，但是它们的表达却能够使病毒在体外扩增时的适应性降低。一般来说，野毒株中的辅助基因的丢失大多数能导致病毒在自然宿主体内毒力衰减。而PEDV唯一的辅助基因是ORF3，因此认为ORF3能影响病毒毒力，为了减弱病毒毒力，细胞培养PEDV适应株时，ORF3基因经常被改变。检测ORF3基因的变异成为研究PEDV流行病学的一个很有价值的工具。
PEDV对乙醚和氯仿比较敏感，在蔗糖中的浮密度为1.18 g/mL。适应细胞培养的PEDV毒株经60℃处理30 min会失去感染力，但在50℃时相对稳定，而且PEDV在4℃pH为5.0～9.0时和37℃ pH为6.5～7.5的条件下是相对稳定的。PEDV无血凝性，不凝集兔、猪、犬、马、鼠、羊、牛、雏鸡和人的红细胞。
3 PEDV及猪其它冠状病毒比较
冠状病毒（Coronaviridae），包含α、β、γ、δ 型 。冠状病毒的是基因组最大的一类正链RNA病毒。迄今为止，β冠状病毒，主要攻击人类的呼吸系统，而α冠状病毒主要针对一些动物。这些病毒对于宿主和组织的嗜性主要取决于宿主受体在组织的特异分布以及S蛋白与宿主受体的相互作用。
猪冠状病毒类型较多，分布在3个属型：主要有α冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV），它们主要引起仔猪腹泻，猪呼吸道冠状病毒（PRCV）主要感染呼吸道上皮细胞和肺泡巨噬细胞；β冠状病毒属的猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus，PHEV） 主要引起仔猪的消化系统或神经系统症状。猪δ冠状病毒（Porcine delta-coronavirus，PDCoV）可引起仔猪消化道症状。见表1。
4 发病机制及免疫病理学
发生PEDV感染细胞器损伤的同时，受损细胞的碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、琥珀酸脱氢酶、单胺氧化酶、5'-核苷酸酶、ATP酶等均出现不同程度的活性降低或缺失。造成肠腔内胶体渗透压升高，肠上皮细胞内钠泵失活晶体渗透压升高。这样最终导致仔猪发生渗透性腹泻，严重时，仔猪因脱水、衰竭而死亡。感染PEDV的猪肠上皮细胞，首先出现应激性功能代偿反应，表现为核内常染色质明显增加，胞浆粗面内质网核糖核蛋白颗粒增多，细胞合成代谢功能增强。当上皮细胞遭病毒攻击后，溶酶体数量增加，酸性磷酸酶活性增强，溶酶体内见到细胞器碎片，是感染细胞消除病损、抗御损伤的一种代偿性保护。PEDV感染增加了隐窝干细胞的数量，促进了干细胞的增殖，表明它能加速肠上皮细胞的更新。
人工感染PEDV后第15天，空肠后段、回肠、回盲口粘膜固有层中的IgA、IgM产生细胞显著增多，且该段肠腔中分泌性IgA的含量也相应地增高。肠粘膜集合淋巴结呈现SmIg B 细胞增殖外，肠系膜淋巴结、脾脏及外周血液中SmIg B细胞也相应增多，但其全身免疫反应要比肠粘膜局部免疫反应晚3～6 d。外周血液中SmIg B细胞主要产生IgG，IgM产生细胞呈一过性增多，IgA产生细胞阴性；外周血液中抗PEDV特异性抗体主要为IgG，IgM一过性增高，IgA含量一直处于低水平，未见上升趋势。外周血液中特异性抗体IgG含量，于接毒后第25天呈现上升趋势，至第45～56天达峰值。
5 临床症状与病理变化
不同日龄猪感染PEDV的潜伏期不同，一般为1～8 d。感染PEDV的哺乳仔猪和保育猪发病率较高，其中新生仔猪中死亡率可达100%，10日龄以上哺乳仔猪死亡率也在50%以上，成年猪死亡率只有1%～3%；感染猪发病初期粪便呈灰色且具有腥臭味，后期粪便呈黄绿色、水样，同时伴有呕吐、食欲不振和精神沉郁等症状。
剖检肉眼可见的病变仅限于胃肠道，其特征是肠壁薄而透明（十二指肠至结肠），肠腔内积聚了大量黄色液体；胃中可见大量黄白色未消化的乳块；偶见肠系膜血管充血，淋巴结水肿。猪流行性腹泻病毒主要侵袭、感染仔猪小肠绒毛上皮细胞，此外还感染大肠粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞、肠系膜淋巴结的巨噬细胞，而与TGE的全身感染不同；以感染30 h，腹泻10 h左右，空肠中、后部阳性细胞最多；腹泻10 h后，小肠绒毛上皮有的变成矮立方形、扁平上皮，有的空泡化。
6 PED的诊断方法
朱维正等1980年研制成免疫荧光（直接法）诊断法以来，给该病的特异性诊断提供了良好的方法。朱维正等于1985年又研究了PED的血清学诊断法即间接血凝试验（IHA）及间接免疫荧光（IFA）方法。朱维正等于1988年应用双抗体夹心ELISA方法检测猪流行性腹泻病猪粪便中的病毒抗原。于强等于1987年应用猪流行性腹泻病毒（PEDV）吉（J）毒株猪胎肠单层细胞培养物以冻融法制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法检测PED抗体的方法。
针对猪病毒性腹泻的分子生物学诊断方法主要有：反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）、实时荧光定量 PCR（qPCR）、环介导等温扩增技术（LAMP），以及检测PEDV、TGEV、PDCoV、PoRV多重PCR技术等。这些检测手段操作简单、准确、快捷，是目前针对猪流行性腹泻病毒病最常用的检测方法。PEDV的PCR检测方法大多数都是基于病毒 N，M 或 S的一种结构蛋白设计的，尽管这些基因提供良好的诊断目标，但设计新的检测方法时需考虑其遗传变异性。
7 猪场PED的防控
7.1 返饲
伴随着死亡率不断增加的急性PED暴发时，可以考虑返饲，即用腹泻的新生仔猪粪便或者将其肠道内容物绞碎后感染妊娠母猪，这将人为刺激母猪快速产生对该病的免疫力并且有可能缩短该病在猪场中的暴发时间。但是，在使用该方法之前必须考虑几种并发症，如PRRS 和PCV2病毒可能包含在母猪或仔猪的肠道内容物或粪便中。因此，自做病毒组织材料不具有等量的感染PEDV滴度，母猪的免疫力并不能在同一水平上对仔猪进行保护。母猪经过人工感染之后，病毒会随着粪便排出，这使得受污染的猪舍又成为了PEDV的传染源。
7.2 特异性抗体
口服特异性抗体进行人工被动免疫成为预防像PEDV这样的肠道病原体的一种有效方法。卵黄抗体特异性强、且安全、高效，同时也方便保存，在临床中应用中卵黄抗体与补液盐同时口服，中和肠道内PEDV能让染病仔猪腹泻情况逐渐恢复，发病仔猪的精神状态也逐渐恢复。用抗PEDV的牛血清进行免疫的方法也可以减少新生仔猪的发病率。
7.3 疫苗免疫
对母猪进行疫苗免疫是在PED流行或呈地方流行时一个最基本的预防策略。在中国，CV777的弱毒苗以及灭活苗被用来作为抗PEDV的常规疫苗。尽管在实验室条件下证明弱毒苗或者灭活苗能够提供保护，但是在生产中，使用这些疫苗的利弊仍然在争议中。
7.4 生物安全
预防和控制急性PED暴发的一个最重要的措施是要制定严格的生物安全原则，可以通过限制任何有可能携带病毒的个人或物资进入猪场来避免PEDV进入猪场中。为做到这一点，必须对所有非生物媒介、人员以及可能携带PEDV的外来参观人员进行全面消毒。
7.5 检疫与监测
加强病原监测与检疫。对新引进猪要保证PEDV检测两次间隔30 d为阴性才能入群管理。对后备母猪和初产母猪要定期做PEDV病原监测，发现异常采取有效措施以防止PEDV病原在后备猪与母猪群传播。PEDV是一种跨界病毒，很容易传播到邻近或者距离稍远的国家，甚至能够跨越大陆进行传播。因此要加强对PED检验检疫，尤其在相邻或有贸易往来国家间暴发大规模的PED疫情期间，检疫（或国际生物安全）组织应加强对利于病原体在国家间传播的任何危险因素的关注，从而阻止PEDV以及其他新兴或者重新出现的病原体的传播。
|
