|
育肥猪猪丹毒与猪链球菌混合感染病例的诊治
刘 涛，王 瑞，王新茹，翟冰洋，朱珂莹
（信阳农林学院，河南 信阳 464000）
2022年12月初，河南省信阳市商城县某猪场育肥猪发生疫病，1周之内，10头体重在70～90 kg猪只陆续死亡。实验室诊断为猪丹毒与猪链球菌混合感染，现将诊治过程如下。
1 发病经过
猪场现存栏200头母猪，育肥猪在1 000头左右。育肥猪接种过猪瘟和猪伪狂犬疫苗。2022年12月1日死亡2头，12月5日死亡4头，12月7日死亡4头。死亡猪只分布于相邻两个圈。
2 临床表现
发病猪只表现为高热，体温在40.5～41℃。体表皮肤苍白或体表发红（见图1），濒死期耳部、胸腹部皮肤发紫，有个别猪只体表有突出于皮肤表面的疹块（见图2）。初期食欲正常，后期不吃，粪便干结，饮欲不旺。磨牙，眼神恐惧、虚弱无力。伴有呼吸困难，以喘气较为明显。病程一般3～4 d。发病期间使用替米考星、氟苯尼考、多西环素，治疗效果不佳。
图1 病猪虚弱、体表发红
图2 体表有疹块
3 病理变化
经对送检猪只病变脏器观察可见，肺炎多为双侧性，心叶、尖叶、膈叶有呈紫红色的红色肝变区，切面可见大理石样的花纹（见图3）。气管内充斥着泡沫（见图4）。
图3 现场剖检：肺部病变
图4 实验室送检：肺部病变、气管充斥泡沫
4 实验室诊断
4.1 主要试剂材料
胰蛋白胨大豆琼脂（TSA），胰蛋白大豆肉汤（TSB）、微量生化鉴定试剂购自青岛海博生物技术有限公司；无菌脱纤维绵羊血购自河南跃驰生物技术有限公司；药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司。
4.2 主要病毒病检测
经第三方兽医服务公司诊断，非洲猪瘟、猪伪狂犬抗原、猪蓝耳病抗原为阴性，见表1。
4.3 细菌分离培养
取病猪的肺脏、气管分泌物以无菌操作在鲜血琼脂平板上划线，经37℃需氧与厌氧培养24～48 h后，观察结果。挑取平板上灰白色、透明、表面光滑、圆形、针尖大小（直径小于１ mm）单个菌落进行革兰氏染色。革兰氏染色阳性、纤细杆状细菌为可疑菌落，再挑取可疑单个菌落接种于含５%胎牛血清的TSA平板，37℃烛缸进行纯培养。革兰氏染色阳性、链状排列的细菌为可疑菌落，再分别挑取可疑单个菌落接种于鲜血琼脂平板，37℃进行纯培养。
4.4 细菌生化反应
将纯化后的细菌，接种于相应生化管中，放入37℃恒温培养箱中18～24 h，判定结果。判定标准：阳性呈红色（＋），阴性不变色（－），注意观察生化管中是否有气泡产生。
4.5 药敏试验
用微量移液器吸取细菌培养物涂布接种于鲜血琼脂平板上，置于室温干燥5 min后，用无菌镊子将药敏片紧贴在培养基表面，于37℃恒温箱培养24～48 h，使用游标卡尺测量抑菌圈直径。药敏片来源分为标准药敏片：阿莫西林、多粘菌素B、苯唑西林、氨苄西林、红霉素、青霉素G、氧氟沙星、克林霉素、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、四环素、头孢曲松、头孢呋辛。自制药敏片：取双圈定性滤纸用打孔机打成6 mm直径的圆形药敏片备用，取3个干净清洁的药敏瓶烘干不留水分备用。将100片备用打好的药敏片置于单个药敏瓶中，121℃高压20 min灭菌，再放入37℃恒温生化培养箱烘干直至干燥。每瓶加入5 mL商品兽药进行浸泡。商品兽药分别为恩诺沙星注射液、头孢喹肟粉针及两种兽药的混合液。分别标记为自制药敏片1、自制药敏片2、自制药敏片3。
5 实验室诊断结果
5.1 细菌的分离培养及形态学特性
经48 h培养后，有两种菌落生成。一种分离菌株在鲜血琼脂平板形成针尖大小、半透明、表面光滑、边缘整齐的小菌落。涂片革兰氏染色镜检见明显的单个、成对、成簇存在的革兰氏阳性纤细杆菌（见图5）。另一种分离菌株在鲜血琼脂平板上形成的小菌落周围呈不透明的草绿色溶血环。涂片革兰氏染色镜检见链状革兰氏阳性球菌（见图6）。
图5 纯化后疑似丹毒丝菌
图6 纯化后疑似链球菌
5.2 细菌生化反应结果
疑似丹毒丝菌生化反应结果显示甘露醇、乳糖、麦芽糖、棉籽糖、鼠李糖、葡萄糖、精氨酸、赖氨酸为阳性；蔗糖、木糖、枸橼酸钠、尿素、七叶苷、硫化氢、山梨醇、肌醇为阴性疑似链球菌生化反应结果显示PYR、V-P、PMG、七叶甘、覃糖、蔗糖、山梨醇为阳性；精氨酸、DPP、MAG、TMZ 为阴性。
5.3 药敏试验结果
药敏试验结果显示阿莫西林、 自制药敏片1、 自制药敏片2、自制药敏片3高敏；头孢呋辛、多粘菌素B、氨苄西林、头孢吡肟中敏；青霉素G、麦迪霉素低敏；苯唑西林、红霉素、氧氟沙星、复方新诺明、四环素、头孢曲松耐药。部分药敏结果见图7、图8。
图7 部分标准药敏片药敏结果
图8 自制药敏片药敏结果
6 讨论与分析
通过临床症状、病理剖检及实验室诊断工作，判定该猪场育肥猪发生死亡的原因是猪丹毒丝菌与猪链球菌混合感染所致。根据药敏试验结果，建议该猪场采用中西医结合方案，同时配合必要的生产管理措施，综合防治。
6.1 发病诱因
该猪场位于山区，发病时期正逢冬节，早晚温差大，冷应激问题突出。同时，由于猪价波动，出现压栏，同一栋舍，不同体重猪只混杂。圈舍夜间密闭时间较长，空气流通性差。健康猪携带猪丹毒丝菌的现象普遍，约30%左右的健康猪扁桃体和其他淋巴样组织中存在猪丹毒丝菌，健康带菌猪在各种降低机体抵抗力的因素交织时，容易出现排菌现象。猪丹毒丝菌抗逆能力很强，耐干燥，在阴暗的环境中能存活30 d有余。猪丹毒丝菌可以通过生猪粪便及眼鼻分泌物排出，从而对环境中的饲料、饮水及打扫工具造成污染，导致交叉感染。从现场照片看，粪污清理不及时，造成圈舍病原体污染严重。
6.2 饲养管理
猪场猪只出现呼吸道问题后，没有及时将病猪与健康猪隔离，只是凭借经验，使用常规的针对呼吸道疾病的抗生素，连续使用几天无效后，伴有猪只死亡，才往实验室送检，造成病情延误。
6.3药物方案
结合药敏试验结果，依据药理学上抗微生物药物的联合用药原则，恩诺沙星和阿莫西林都是繁殖期速效杀菌药物，两者配伍使用有协同增效作用；建议猪场用阿莫西林饮水、恩诺沙星拌料，连续使用7 d。对发病早期的病猪用恩诺沙星注射液稀释头孢喹肟冻干粉，进行治疗。
6.4 预防方案
抗生素可用于猪丹毒和猪链球菌病的防治，但长期大量不合理地使用易导致丹毒丝菌和链球菌耐药性的产生，疫苗接种是预防猪丹毒和猪链球菌病、降低死亡发生的有效措施。但是疫苗免疫策略，在细菌性疾病控制中效果并不理想。获得被动免疫的程度和持续时间常被认为与母猪的免疫状态及后代仔猪的初乳摄取有关。一般来说，母猪接种猪丹毒丝菌疫苗后，其后代体内的母源抗体可提供大约8周的保护作用。由于丹毒丝菌能够存在于猪关节软骨细胞的胞质内，逃避免疫宿主的免疫机制而获得自身保护。因此猪场的猪丹毒免疫接种策略在慢性感染上有其局限性。随着猪链球菌在猪流行病学的复杂性增加（多种血清型、多种菌株之间高度的表型多样性），疾病控制和管理更为困难。
自2022年7月1日起，我国已经全面进入药物限抗、饲料禁抗新时代。对终端养猪群体提出了更高的非药物依赖性养殖理念和具体应对措施的摸索实践。动物传染病发生三大基本要素-传染源、传播途径和易感动物决定了疾病在猪场的流行程度。如何提高猪群的抗病能力、降低场内猪只感染的风险是养猪人在生产管理活动中时刻要关注的问题。例如对于此次发生疾病的猪场，在日常生产活动中，首先要按照当地的气候特征，适时做好栋舍内的保温工作，其次一定要做好清洁卫生和消毒工作，以减少病原体的蓄积问题。最后要及时确诊，明确防治措施，避免延误病情，造成疾病扩散。
7 小结
猪丹毒和猪链球菌病不仅可以给养猪业带来巨大经济损失，作为人畜共患传染病，也对公共卫生安全造成了威胁。在猪丹毒丝菌感染早期进行治疗，通常在24～36 h可取得良好的治疗效果。大多数猪丹毒丝菌也对头孢菌素类、林可酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类和四环素类等抗生素敏感；但由于耐药菌株的出现，应根据药敏试验结果，科学选择药物。例如一般来讲青霉素对丹毒丝菌是比较敏感的，但药敏结果却是低敏。猪链球菌同样也是集约化猪场中的重要致病菌。除了菌株的毒力外，其他因素也会影响疾病的发展，包括猪群的免疫状况、感染猪和未感染猪的混合饲养，病原共感染和免疫抑制、环境质量以及其他管理因素，控制这些因素有助于预防猪群感染致病菌株。
|
