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新疆地区一例猪蓝耳病阴性场暴发蓝耳案例报告
田路路 1，伍晔晖 1，陈 英 1，施增斌 2 *
（1.新疆农业职业技术学院动物科技分院，新疆 昌吉 831100；2.新疆泰昆集团，新疆 昌吉 831100）
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种免疫抑制性疾病，又称“猪蓝耳病”。该病毒属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属病毒，PRRSV主要感染单核巨噬细胞系统，尤其对猪的肺泡巨噬细胞具有专噬性，导致感染猪蓝耳病毒的猪只出现免疫抑制现象。该病毒具有较高的变异性和较强的抗体依赖增强作用，在猪场持续存在，研究及监测数据表明，目前国内存在的猪蓝耳病毒株主要有类NADC30、类NADC34、高致病性毒株和疫苗重组毒株等，导致疫苗免疫起不到理想的免疫效果。
笔者对新疆石河子地区某种猪场从猪蓝耳病阴性场转为猪蓝耳病阳性场进行了调查和溯源，了解猪蓝耳病的感染过程，从发病情况、临床症状、实验室检测等方面进行分析，以期为猪蓝耳病阴性猪场对猪蓝耳病的防控提供借鉴。
1 材料与方法
1.1 发病场背景调查
新疆石河子地区某种猪场，地理位置优越，周边3 km范围内无其他养猪场，于2021年12月从广西某种猪公司引入600头猪蓝耳病阴性后备种猪，2022年3月开始进行配种，期间生产管理一切正常。2022年5月20日猪只出现精神沉郁，采食量下降，部分猪只发烧，体温升至40.5～42℃，妊娠后期母猪出现流产17窝，检测公猪精液活力下降，精子畸形率高。由于该猪场前期设计为猪蓝耳阴性场，引种后未进行猪蓝耳弱毒苗免疫，引种前、后一个月、2022年3月、5月该场均按要求采血送该校实验室进行猪蓝耳抗体检测，抗原和抗体监测结果均为阴性，猪群发病后使用抗生素治疗效果不佳。
1.2 实验室仪器及试剂
上海快灵柱式核酸提取试剂盒、One Step PrimeScript III RT qPCR Mix，with UNG（货号RR601A）、爱德士猪繁殖与呼吸综合征1-2型多重实时定量PCR检测试剂盒，爱德士猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒，超纯水，西安天隆荧光PCR仪（48E）、高速冷离心机（型号：TGL-16.5M）；酶标仪（型号：Multiska FC）。
1.3 送检猪临床症状
母猪精神沉郁，采食量下降，体温41.5℃，流产（图1）、早产，眼结膜炎，耳尖发绀，流产胎衣有红豆大小的血泡（图2），死后腹部皮肤呈紫色（图3），公猪精液质量下降且畸形率高。
图1 母猪流产
图2 胎衣有血泡
图3 腹部皮肤呈紫色
1.4 剖检变化和样品采集
病死猪剖检发现肺部呈花斑状、肿胀（图4），腹股沟淋巴结肿大、出血（图5），现场采集淋巴结及肺部病变组织，前腔静脉采集不食猪只血清20份，送校实验室检验。
图4 肺部呈花斑状、肿胀
图5 腹股沟淋巴结肿大出血
1.5 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测
采用爱德士猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒对猪只血清进行蓝耳抗体检测。
1.6 荧光PCR/RT-PCR病原检测
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法（GB/T35912-2018）、猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法（GB/T34729-2011），进行病原检测。
2 结果与分析
2.1抗体检测结果
2022年1月2日对引种后备猪只进行猪瘟抗体、猪蓝耳抗体、猪伪狂犬gE抗体、gB抗体、口蹄疫抗体检测，结果显示200份血清中猪蓝耳病抗体除1份阳性样品外，S/P值为0.40，其他抗体均无异常，要求该场对检测阳性猪只及时淘汰处理。
2022年1月29日再次抽检100份猪只血清，再次检出一份阳性样品，S/P值为0.44；但后期2月及4月抗体检测结果均为阴性；在此期间猪只状态较好，临床未表现任何异常。
2022年5月20日猪群出现异常，猪场随即抽检60份血清对猪蓝耳病原及抗体进行检测，本次检出一份猪蓝耳病高抗样品，S/P值为2.31；5月22日对该区域其他猪只采样检测蓝耳抗体，结果显示95份血清中，有7份猪蓝耳病抗体阳性，S/P值在0.43—2.35之间；6月9日—7月9日期间，该场累计采样检测三次，猪蓝耳病抗体阳性率及S/P值呈持续上升趋势，详见表1数据，说明猪群有猪蓝耳病野毒感染，且速度呈加速度上升。
2.2 病原检测结果
自猪群出现异常后，该场病料一直由该校实验室进行跟踪，样本类型包括猪只血清、口鼻拭子样、死亡猪只淋巴结、肺组织、脾脏、扁桃体等，从5月20日—7月14日荧光RT-PCR检测结果来看，5月20日至6月15日期间一直未检测到病原，直至7月9日该场送检9份死亡猪只鼻腔拭子、肺及淋巴组织样品中，检出2份阳性样品，其后7月13日—14日连续检出猪蓝耳病原阳性样品，详见表2。
本实验室对7月9日检出的阳性样品分别命名为XJ2022-V1、XJ2022-V2，送检测序，对送检样品克隆PRRSV ORF7-5’UTR基因，测序结果反馈，通过BLAST 和遗传进化树分析（图6），苷酸序列与2019年新疆分离的NADC30-Like PRRSV XJ1904-39株的同源性在95.1%，与NADC30（JN654459）的同源性在 92.8%。与国内其他流行和经典毒株，如BJ-4、VR2332、JXA1、HUN4等的同源性较远。
3 讨论与分析
3.1 发病原因及传播方式
通过本实验室对该场猪只蓝耳病抗体及抗原的持续跟踪，蓝耳病阴性猪群感染猪蓝耳病毒后，有先表现临床症状，后检测到抗原抗体现象。追溯该场猪蓝耳病暴发的原因，可能与引种时员工装卸种猪前员工未执行严格的隔离、淋浴有关，也可能由于猪只运输途中及猪只入场后管理存在生物安全漏洞，导致猪蓝耳病野毒株进入场区导致疫病暴发。
有研究表明，在临床上猪蓝耳病毒可通过剪牙、断尾、肌肉注射药物或疫苗等方式传播。因此一旦猪场出现猪蓝耳病疫情不稳定时，应立即停止产房寄养、剪牙等一系列操作，防止猪蓝耳病病毒在场内水平传播。猪蓝耳病病毒可经过鼻腔、肌肉内、口腔、子宫和阴道等途径传播，也可经空气及胎盘传播。
3.2 临床症状及抗体变化
猪蓝耳病阴性场暴发猪蓝耳病后，主要症状表现为母猪流产率、产弱胎、死胎和木乃伊率升高，健仔率减低。从抗体检测结果来看，母猪的抗体水平升高，离散度增大，母源抗体水平参差不齐，且健康度下降，断奶仔猪易发生副猪嗜血杆菌、链球菌、支原体及多杀性巴氏杆菌等细菌感染，培育期间死亡率增加，养殖成本急剧升高。
3.3 猪蓝耳病阴性猪场防控应做好的措施：
3.3.1 引种前监测
加强引种检疫，猪蓝耳病阴性种猪场严禁从猪蓝耳病阳性场引种，引种前一定要充分调研，避免将自身没有的疫病引入猪场。引种后执行严格的隔离驯化制度。猪蓝耳病是大多数猪场面临的严重挑战，对生产成本影响巨大。猪只一旦感染猪蓝耳病病毒，可通过唾液、鼻腔分泌物、尿液、精液及粪便排毒，但不同的排毒方式，排毒量差异很大。
3.3.2 完善猪场生物安全措施
自2018年8月我国发生非洲猪瘟以来，规模猪场生物安全意识得到加强，措施逐步完善。猪只的运输或转运均可带来疫病的传播。特别是运输环节存在较大的生物安全风险，应确保转运车辆运输前彻底清洗、消毒、烘干后再采样进行病原检测，防止车辆带毒感染猪只。同时还应关注场内精液的管理，避免因精液带毒而导致扩散。此外还需要关注其他生物安全风险，如人员进场、物资进场、设施设备进场以及啮齿类动物防范等。
行业内当前猪蓝耳病净化已成为热门话题，主要净化思路又分为清群淘汰—重新引种，或部分淘汰、早期隔离断奶、检测—淘汰以及一次性引种6个月后备随后执行封群管理，保育育肥阶段性清群等多种方式。目前国内只有极少部分猪场猪蓝耳病净化成功，猪蓝耳病净化成功之后如何持续保持猪蓝耳病阴性仍然是重大难题，更多的一线工作者正在不遗余力地研究和实践。
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