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本文报告了一起发生在塔城某蛋鸡场的鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）与大肠杆菌混合感染的疫情。发病初期，蛋鸡表现为眼泪、喘鸣、伸颈呼吸等症状，随后整群发病，出现咳嗽、喘气、蛋产量减少等严重症状。病理变化表现为气管、肝脏、脾脏、心包膜等器官的出血和病变。实验室诊断包括病原分离培养、药物敏感性试验和RT-PCR检测，最终确诊为ILTV与大肠杆菌混合感染。
药物敏感性试验显示，分离的大肠杆菌株对一些药物耐药，强调了合理使用抗菌药物的重要性。同时，通过RT-PCR检测确定存在ILTV感染，展示了分子生物学方法在疫病诊断中的优势。
文章还讨论了各种发病情况，提出了改善饲养环境、加强管理、提高免疫力的建议，以减少类似疫情的发生。对大肠杆菌病的防控强调了防大于治的理念，并强调了对药物敏感性的监测和轮换用药的必要性，以避免耐药性的增强。
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鸡传染性喉气管炎（AILT）是当前养鸡场重点防范的主要呼吸道传染病之一[1]，近年来在我国呈现出“老病新发”的流行趋势，临床中以“温和型”和“非典型”症状为主，增加了防控的难度，也给我国养禽业造成了巨大的经济损失。鸡大肠杆菌病是危害我国养鸡业的常见多发病，在潮湿、寒冷的冬、春季易发生，通风不良、营养不足、环境应激等不良因素易诱发[2]。2023年4月，塔城某蛋鸡场发生了一起以呼吸道和消化道病变为主的疫病，通过综合诊断确诊为鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）与大肠杆菌混合感染，经敏感试验筛选出合适药物治疗以及采取其他辅助措施，养殖场迅速控制了疫情。现将整个诊治过程汇报如下，供基层兽医工作者借鉴。
1 发病情况
2023年4月，塔城某蛋鸡场饲养的7月龄蛋鸡突然发病，初期个别鸡单眼流泪，喘鸣，伸颈张口呼吸，精神萎靡，饮食减少，每天死亡6～10只；随后扩展至整群发病，咳嗽加重，张口喘气，产蛋量急骤减少，每天死亡增加至30只。
2 临床症状
鸡群精神沉郁，食欲减退；流涕，张口呼吸，咳嗽，可咳出带血粘液；腹泻，水样粪便，白痢增多，迅速消瘦；产蛋率由90%降至60%，最后因呼吸困难、窒息、消瘦、衰竭至死亡。
3 病理变化
可见病死鸡气管含大量血色黏痰，有出血点，肝脏、脾脏、肾脏出血、肿大，心包膜增厚、附有纤维素性灰白色渗出物，腺胃粘膜水肿、出血点，肠道变薄、广泛性出血。
4 实验室诊断
病死鸡剖检后无菌采集喉头、气管、心脏、肝脏等组织病料样品，低温保存，迅速送往实验室进行病原分离和PCR检测。
4.1 病原分离培养、鉴定
细菌分离：采用无菌操作的方法将喉头、肝脏病料划线接种麦康凯琼脂平板，37℃培养24 h，结果在平板上长出很多露珠状小菌落，菌落表面光滑、中间圆形隆起、边缘整齐，符合大肠杆菌菌落特征。
染色镜检：挑取单个小菌落涂片、革兰氏染色、镜检，可见革兰氏阴性短小杆菌，单个或散在排列。分离菌镜检结果与大肠杆菌的形态学特征相符。
生化鉴定：取分离菌分别进行糖发酵试验、甲基红试验和吲哚试验等，观察结果。分离菌生化鉴定结果如表1所示。
注：+表示阳性；-表示阴性。
4.2 药物敏感性试验
采用常规的K-B纸片法测定分离菌株对11种常见药物的敏感性，结果显示分离菌株对阿奇霉素、氧氟沙星、头孢噻呋、头孢噻肟、氟苯尼考、环丙沙星较敏感，药物敏感率为54.55%(6/11）；对阿米卡星、红霉素、庆大霉素、四环素、强力霉素耐药，药物耐药率为45.45%(5/11），耐药性相对较严重。
4.3 RT-PCR检测
对上述采集的病料按照病毒基因组RNA/DNA提取试剂盒说明书抽提DNA，按照李海利等[3]建立的鸡传染性喉气管炎病毒PCR检测方法，设计一对鸡传染性喉气管炎病毒特异性引物并送生物公司合成，并按照文中优化的PCR反应条件进行PCR扩增，成功扩增出一条690 bp的目的基因片段，片段大小与预期结果一致。表明临床病料样品中存在LITV核酸，存在鸡传染性喉气管炎病毒感染。
注：M为DL-2 000 Marker;1为PCR扩增产物；2为生理盐水对照。
5 综合诊断结果
通过临床诊断、剖解变化和实验室诊断，综合判定鸡场饲养的蛋鸡发生传染性喉气管炎病毒与大肠杆菌混合感染。
6 讨论与分析
对临床混合感染的病例，应借助实验室诊断方法快速确诊，为疫病治疗争取时间。鸡传染性喉气管炎是属于老病新发的传染病，近年来随着鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗的推广应用，在临床中主要呈现出“温和型”和“非典型”的临床症状，虽然不能确定这两种临床症状的出现与ILTV弱毒疫苗的毒力返强有关[4]，但大大增加了AILT临床诊断与防治的难度。为避免误诊，还需通过分子生物学方法和血清学方法进行准确诊断[5]。病毒分离鉴定方法在临床是一种常用的实验室诊断手段，虽然技术成熟可靠，但需要采购SPF鸡胚，存在操作复杂、试验周期长等缺点，无法满足临床快速确诊的需要；ELISA等血清学方法操作简单、但无法进行潜伏感染期的早期诊断；PCR等分子生物学方法具有操作简单、检测快速、成本低廉、特异性和敏感性高的优点，能够检测早期感染或潜伏感染期时极低含量的病毒核酸，特别适合于临床中ILTV感染的快速诊断。因此，本次病例参考他人建立的PCR方法进行了临床应用，提高了诊断结果的准确性。
大肠杆菌病是养鸡生产中的常见病，属于条件性致病菌，其发生与饲养环境卫生较差、温度骤变、寒冷、潮湿、拥挤、饲料霉变等诱发因素密切相关，临床上常见与其他病毒或细菌继发感染、混合感染和并发感染的现象，会加重病情，在临床中一定要做到早发现、早诊断、早治疗，这对大肠杆菌的防控非常重要。
笔者认为对大肠杆菌病的防控应坚持防大于治的理念，通过改善环境卫生、定期消毒、保持通风、避免拥挤、避免刺激、严禁饲喂霉变饲料等措施来避免该病的发生。临床中一旦暴发大肠杆菌病，应快速确诊，根据药敏试验结果筛选出适合本场的药物。在当前养殖生产中，抗菌性药物的长期滥用必然导致耐药性不断增强。袁敬知等[6]研究发现大肠杆菌的耐药性最强，四环素耐药率最高，达到100%。李娟等[7]发现分离的鸡源大肠杆菌总体耐药情况比较严重，对头孢氨苄、泰乐霉素的耐药率达到65%以上。而本病例中的分离菌株在11种常见药物中对6种敏感，药物敏感率达54.55%；对5种药物耐药，药物耐药率为45.45%，结果显示分离菌株的耐药性较严重，这必定与该养殖场平时大量滥用抗菌性药物有关。所以，对病例中大肠杆菌病的治疗应进行药物敏感性试验筛选出敏感药物，轮换用药，避免产生耐药性。
推测两种可能的发病情况：一种可能是蛋鸡先感染了AILT，导致蛋鸡免疫力降低，加上棚舍环境差，大肠杆菌迅速繁殖，从而发生大肠杆菌混合感染，导致发病率和死亡率增加；另一种可能是蛋鸡在通风条件差、环境简陋的棚舍中饲养，先感染了大肠杆菌，导致蛋鸡体质下降，后又因受外界环境应激和管理粗放等影响，继发感染鸡传染性喉气管炎。本病例虽然无法确定是ILTV还是大肠杆菌在蛋鸡发病过程中起到了主导和决定性作用，但无论是哪一种可能，都与蛋鸡的机体免疫力下降有关。此次发病可能与该养殖场的养殖环境较差有关，现场查看发病蛋鸡群所在的饲养大棚简陋、通风条件较差，棚舍内氨气味、腥臭味较浓；其次，新疆塔城四月的天气早晚温差大，相差约14℃，且棚舍保暖性差，以上原因导致鸡群发生混合感染。因此，建议通过加强饲养管理和改善养殖环境增强鸡群的免疫力，减少不良应激的影响，避免和降低疫病的发生。
沙那提·斯兰拜, 巴哈提. 一例蛋鸡传染性喉气管炎病毒与大肠杆菌混合感染的诊断报告[J]. 家禽科学, 2023, 45 (07): 78-80.
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