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2020—2022年鲁北地区猪流行
性腹泻的流行病学调查
李坤林，李天芝，赵?蕾
（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）
猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea viruse，PEDV）属于冠状病毒科、冠状病毒属病毒，是导致猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhe，PED）发生的病原，猪是唯一感染后发病的动物，该病发病急、高度接触传播、主要通过消化道途径传播的病毒病。临床表现为呕吐、腹泻严重，呈水样、严重脱水，最后死亡。该病无明显季节性，全年均有发病，寒冷季节发病率高。猪无论品种，日龄大小都能发病，猪越小症状表现越严重，1周龄内哺乳仔猪感染后可造成100%死亡。康复后的猪只能携带带毒很长时间，受应激的时候能再次排出病毒，最长排毒期能达2个月。PEDV主要通过水平传播，如消化道途径，发病多为急性，传播迅速，发病猪场短期内还能反复暴发。暴发PED的猪场，储粪池中5年内都能检测出PEDV核酸，病毒在储粪池中最长存活4个月，因此，猪场一旦发生PED，存在再次发病的潜在风险。1971年，英格兰报道了首例PED的发生，后世界多个地方都有该病报道，1978年，我国出现该病病例。自2010年起，PED在全国呈现暴发性流行，是造成仔猪大量死亡的主要因素之一，导致我国养猪业损失严重。
为了解鲁北地区PED的流行现状，从而为PED的有效防控提供一定的参考依据。2020年1月到2022年12月，笔者团队从鲁北区域采集368份样品，均来自腹泻猪只，分布于9个县的猪场，应用荧光RT-PCR检测试剂盒对样品检测，分别检测样品中的PEDV、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）等病原，分析PEDV样品单独阳性率及与其他病原的混感情况。
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材料与方法
INTRODUCE
1.1 病料
共368份病料样品采自9个县不同猪场，均位于鲁北区域，采集时间为2020年1月到2022年12月，样品为疑似PEDV感染的猪肠道及内容物。
1.2 试剂盒
AxyPrep病毒核酸提取试剂盒，为杭州爱思进生物技术公司产品。PEDV、TGEV、RV三重荧光RT-PC核酸检测试剂盒和猪德尔塔冠状病毒荧光RT-PCR检核酸测试剂盒，均是由该公司诊断试剂事业部提供。
1.3 核酸制备
取采集的猪肠道及内容物样品，加入灭菌盐水，使得样品与盐水质量体积比为1∶10，研磨成混悬液，细心转速为6 000 r/min，时间为5 min，取离心后的上清部分，按AxyPrep病毒核酸提取试剂盒说明书操作，提取样品基因组核酸。
1.4 病料样品初步检测
按试剂盒说明书对制备的核酸进行PEDV、TGEV、RV、PDCoV等4中病原荧光PCR扩增检测，统计检测结果，分析PEDV单独感染及与其他病原的混合感染情况。
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试验结果
INTRODUCE
2.1 疑似病料检测结果
从表1可看出，共从鲁北地区采集368份猪只样品，属于9个不同县，其中PEDV阳性样品148份，阳性率是40.2%。其中由3个县PEDV阳性比率超过平均值，从高到低排列分别为临邑县（73.3%）、沾化县（46.6%）、庆云县（43.2%）。PEDV在猪场发病多为这单一种病原引起，但也有同PDCoV、TGEV及RV混感的情况，其中PEDV单独阳性样品占总阳性样品量的85.8%（127/148），两种病原混合感染的样品，主要是PEDV和PDCoV混感，占阳性样品量的5.4%（8/148），对于3种病原感染的样品，只有PEDV、PDCoV和TGEV感染的病例，占阳性样品量的1.4%（2/148），没有检出PEDV、PDCoV、RV和TGEV 4种病毒都感染样品。
2.2 猪场不同季节的PEDV检测结果
如表2所示，PED全年可发病，无明显季节性，148份采自鲁北地区的PED检测为阳性的样品中，秋冬寒冷季采集的相对较多，尤其是冬季数量最大，阳性率最高为55.6%（75/135）。夏季采集数量少，阳性率不高，仅为16.1%（9/56）。
2.3 不同年份猪场PEDV检测结果
如表3所示，PED全年可发病，无明显季节性，148份采自鲁北地区PED阳性样品中，2020年检测的PEDV样品相对较多，阳性率为55%（66/120）。2022年检测的样品量相对不多，阳性率也低，为30.5%（32/105）。
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讨论
INTRODUCE
2011—2017年，对浙江省猪群腹泻病原进行流调，结果发现PEDV阳性率为71.25%，PDCoV阳性率为8.75%，TGEV阳性率为3.05%，PRoV阳性率为17.67%，存在一定比率的2种病原混感，其中PEDV+PDCoV混感率为2.80%，PEDV+TGEV混感率为2.40%，PEDV+PRoV混感率为15.10%，PDCoV+PRoV混感率为0.50%。2017—2020年，严瑾等从采集广西不同地区采集腹泻病死猪病料样品，对PDCoV、PEDV、TGEV以及ProV感染情况进行检测，采用多重RT-PCR方法。结果1 463份病料样品中，PDCoV的阳性率为5.67%（83/1 463），PEDV的阳性率为10.12%（148/1 463），TGEV的阳性率为1.30%（19/1 463），RV的阳性率为5.95%（87/1 463），两种病原混合感染的比率为5.26%（77/1 463），三种病原混合感染的比率为1.64%（24/1 463），两病原感染中PDCoV和PEDV混感最高，阳性率为2.32%（34/1 463）。
齐海涛等从218个规模猪场采集4 030份仔猪腹泻样品，猪场分布于5个省，为河北、山西、内蒙古、北京、天津，采用荧光RT-PCR检测其中病原，结果表明，PED全年发病，其中冬春季高发。2017—2021年PEDV样品阳性率分别为20.21%、15.28%、10.88%和18.80%，大体趋势为每年降低，但2021年稍微上升；猪场阳性率同样大体趋势为每年降低，分别为34.78%、28.00%、25.00%和22.73%。张丽荣等对来自江西省部分猪场的30份样品进行检测，结果发现，PEDV检出率为66.7%、TGEV检出率为3.3%、RV检出率为6.7%，存在一定混合感染，其中，PEDV、TGEV和ProV三重混合感染样品1份，PEDV和PRoV混感样品2份。从齐海涛研究报道了看出PEDV广泛存在于多个省份猪场，总的流行趋势出现下降，推测主要原因为各猪场重视相应的疫苗接种。从张丽荣研究数据可看出，PEDV可与其他常见引起腹泻的病原发生混合感染。为对鲁北地区PEDV开展流调工作，掌握真实发病情况，共采集368份样品，这些样品来自该区域9个不同的县。用荧光RT-PCR方法检测样品中PEDV、TGEV、ProV以及PDCoV病原存在情况，分析PEDV单独感染以及与其他病原混合感染情况。结果表明PEDV阳性比率为40.2%，主要是单一感染，且与其他几种病毒存在不同程度混感。二重感染中以PEDV、PDCoV混合感染为主，共8份病料，占PEDV总阳性的5.4%（8/148），同严瑾报道一致，即主要是PDCoV和PEDV二重感染。检测到PEDV、PDCoV和TGEV三重混感样品2份，占阳性总数的1.4%（2/148），未检测到四种病毒混感样品。结果表明，PEDV是造成猪腹泻的重要病原，与TGEV、PDCoV以及PRoV有一定程度的混感，鉴于条件所限，未对其他的猪常见病原排查检测，数据仅包含3种常见的引起猪腹泻性病毒病的混合感染分析，并不排除PEDV与PCV2、PRRSV等存在混感的情况。冬季寒冷天气为PED多发时期，与齐海涛等报道一致，存在着一定的季节流行规律，寒冷天气适于病毒长期存活，消毒效果下降，猪群抵抗力下降，猪群要做好防寒保暖措施。从2020—2022年，PEDV发病比例大体呈下降态势，2020年阳性率最高，为55%（66/120），2022年阳性样品比率最低，为30.5%（32/105），每年发病比率降低，表明该病越来越引起人们的重视，危害逐渐降低。下一步笔者团队将对检测的PEDV阳性样品进一步测序分析或代表毒株分离，从而了解PEDV遗传演化规律，为鲁北地区PEDV的科学防控提供参考，丰富菌毒种库，为疫苗研制奠定基础。
仔猪刚出生时，身体较弱，抵抗力低，免疫功能弱，容易受饲养管理、外界环境、应激因素等影响而导致腹泻的发生。腹泻是引起仔猪大量死亡的主要疾病之一。造成仔猪腹泻的因素多样，其中有细菌性、病毒性、寄生虫性及营养性因素。仔猪由病毒造成的腹泻严重影响仔猪存活率，常见的引起仔猪腹泻的病毒有PEDV、PDCoV、TGEV和PRoV。在全国不同地区、不同季节造成仔猪腹泻发生的病原不一致，病原之间存在不同程度的混感及相互作用。疫苗接种对仔猪病毒性腹泻的预防起到一定的积极效果，可降低仔猪发病后的死亡率，减少排毒，缩短病程。此外，还需要加强饲养以及管理，增加营养，禁止饲喂霉变饲料，补充微量元素和维生素，提高猪只免疫力。猪群定期选取一定比例猪只采集肛门拭子开展PEDV监测，对异常猪只及非正常病死猪只进行检测，做到早发现、早处理、早控制。减少猪群应激，做好猪只防寒和保暖工作，猪舍避免潮湿，增加通风和换气。做好环境卫生消毒，制订合理的消毒管理制度，降低环境中病毒载量。总之，猪场可以采用加强生物安全措施，强化管理，注意营养，减少应激等多种措施，以减少猪群发生腹泻的概率。
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