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新型抗病毒药物阿巴妥尔对家禽常见病病毒体外增殖的抑制作用
我国是世界最大的禽蛋生产国之一，但家禽的各种疾病给我国养禽业造成了巨大的损失。据不完全统计，在对养禽业有威胁的疾病中，传染病占75%，而传染病中尤以病毒性疾病危害性大，如鸡新城疫（ND）、鸡传染性支气管炎（IB）、鸡传染性法氏囊病（IBD）等。抗病毒西药是防治病毒病的主要手段之一，近几年来，发展迅速，但是自2005年起，抗病毒西药，如金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林等，已全面禁用于食用动物，这样导致了养禽业中抗病毒药物的空白，亟待开发新的药物填补这一空白。
阿巴妥尔（Arbatoul）为目前最新型的广谱抗病毒药物，具有广谱抗病毒、免疫调节、抗炎抗过敏、促进采食等药理作用。本研究通过比较阿巴妥尔等几种抗病毒药物对家禽NDV、IBV、IBDV的体外增殖抑制作用来验证其抗病毒活性，为兽医临床更好地应用本品提供理论依据。
1 实验材料
药物：阿巴妥尔（山东华强生物技术研究所提供，含量≥98%）、金刚乙胺、利巴韦林等。药物在实验时均用无菌生理盐水配制成1毫克/毫升，过滤除菌，4℃保存备用。
病毒与细胞：禽流感病毒（H9N2），病毒复苏后接种9日龄SPF鸡胚，72小时培养收取感染鸡胚尿囊液，检测病毒血凝效价，SPF鸡胚传至2~3代。 试验用鸡胚成纤维细胞（CEFC）为实验室自制，传2~3代使用。
2 实验方法
2.1 病毒毒力测定
待CEFC长成致密单层后，弃去细胞培养上清，分别加入已在SPF鸡胚尿囊腔增殖的NDV、IBV、IBDV，用细胞维持液（含2%新生小牛血清的MEM）作8个10倍比连续稀释，每一稀释度设4个复孔，并设细胞对照，37℃5%二氧化碳培养3天，观察细胞病变（CPE）。
2.2 药物对CEFC的毒性测定
用细胞维持液分别将药物作连续梯度系列稀释后（1000微克/毫升，500微克/毫升，250微克/毫升，125微克/毫升，62.5微克/毫升，31.25微克/毫升，15.625微克/毫升）接种于已形成单层的CEFC中，每孔100微升，每一稀释度重复4孔，以细胞维持液代替药物作为正常细胞对照，37℃5%二氧化碳孵育。动态观察结果，记录由药物产生的CPE。试验重复3次。
2.3 药物对NDV、IBV、IBDV体外增殖的抑制作用
待CEFC长成致密单层后，弃去细胞培养上清，分别加入100TCID50病毒液，每孔100微升37℃吸附2小时，吸去病毒，用磷酸盐缓冲液洗2次，洗去游离病毒。加入最大无毒浓度药液，37℃5%二氧化碳培养3天，观察结果并记录CPE。实验设实验组，病毒对照组（只加病毒），细胞空白对照组（只加细胞维持液）。整个实验重复3次。
3结果与分析
3.1 病毒毒力测定
按Reed-Muenc小时法测定NDV、IBV、IBDV对CEFC的半数组织培养感染剂量（TCID50）分别为1×10-5/0.1毫升，1×10-4/0.1毫升，1×10-5/0.1毫升，各分装0.5毫升/瓶作为种毒，零下70℃保存。
3.2 药物对CEFC的毒性测定
按Reed-Muenc小时法计算CPE不再进展时（72小时），阿巴妥尔、金刚乙胺、利巴韦林的最大无毒浓度（TD0）分别为250.0微克/毫升、62.5微克/毫升、250.0微克/毫升。
3.3 药物对NDV、IBV、IBDV体外增殖的抑制作用
由表1可知，阿巴妥尔、利巴韦林对感染NDV后的CEFC的CPE具有一定的抑制作用，阿巴妥尔的抑制效果较为突出。金刚乙胺对感染NDV后的CEFC的CPE抑制作用不明显。由表2可知，阿巴妥尔、利巴韦林对感染IBV后的CEFC的CPE具有一定的抑制作用，阿巴妥尔的抑制效果较为突出。金刚乙胺对感染IBV后的CEFC的CPE抑制作用不明显。由表3可知，阿巴妥尔、利巴韦林对感染IBDV后的CEFC的CPE具有一定的抑制作用，阿巴妥尔的抑制效果较为突出。金刚乙胺对感染IBDV后的CEFC的CPE抑制作用不明显。
4 小结与讨论
金刚乙胺、利巴韦林为常见抗病毒药物，阿巴妥尔是一种新型的、广谱的、安全低毒、绿色无药残的高效抗病毒药物。禽新城疫、传支、法氏囊病是危害养鸡业的主要疾病，给中国养禽业造成很大损失。本试验观察了阿巴妥尔、金刚乙胺、利巴韦林在鸡胚成纤维细胞（CEFC）上对NDV、IBV、IBDV体外增殖的抑制作用。结果表明，在安全浓度范围内，阿巴妥尔和利巴韦林对NDV、IBV、IBDV的体外增殖均具有一定的抑制作用，阿巴妥尔的抑制作用较为突出，金刚乙胺对以上病毒感染细胞能力无显著影响。由此可见，阿巴妥尔相较于目前市场上流行的其他抗病毒药确实具有明显的优势，该药的成功上市有望打破目前抗病毒药物紧缺的现状，成为临床上治疗顽固性病毒病及控制继发感染的首选药物。
山东华强生物技术研究所
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