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禽白血病的诊断与防控措施
现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2023/1/6 7:35:39 关注：1162 评论： 我要投稿
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摘 要：
禽白血病是一种垂直传播性免疫抑制病，引起鸡群发生肿瘤、免疫抑制和生产性能下降等多种危害。随着种源的逐级放大效应，这种危害进一步加重。本文从该病的病原、流行病学、病理变化、综合防控等方面进行探讨，以期给基层养殖户提供相关理论参考。
关键词：禽白血病;诊断技术;综合防控;
在J亚群白血病出现之前，禽白血病就已存在于我国。从1991年英国首先报道J亚群禽白血病病毒（ALV-J）引起新型白血病之后[1]，此病引起了全球的重视。新发现的ALV-J在1997、1998年对整个养鸡业特别是白羽肉鸡养殖业形成了毁灭性的打击，全球称那两年为“禽白血病灾难年”。我国在1999年率先鉴定出ALV-J，此后在多个省份相继发现，给全国养殖业造成了重大的经济损失[2,3,4]。通过基因组测序发现，中国的ALV与美国的ALV-J有一个共同的分子标志，由此提出了该病毒可能是从美国引种的过程中传到了我国的观点[5]。为了进一步加强对进口鸡的检疫，我国于2009年制定了国家标准《禽白血病诊断技术》，从而启动了我国对该病的检疫。
1 病原
禽白血病是由禽白血病/肉瘤病毒群中的病毒引起的禽肿瘤性疾病的统称，该病毒是鸡的一种反转录病毒，由于其基因组可以整合到宿主鸡或鸟类的基因组上，因此是诊断和检测的难点。目前发现ALV共有A～K 11个亚群，可自然感染鸡群的ALV仅限于A、B、C、D、E、J和K七个亚群，其中K亚群是在中国实施禽白血病的净化过程中从地方本土鸡群发现的一种中国土鸡很早就感染的固有亚群，11个亚群中以1988年新出现的J亚群致病力最强、传播性最强，对我国各类鸡群的危害也是最严重的[6]，而K亚群致病力最弱。J亚群对肉鸡感染最为严重和典型，A亚群对蛋鸡感染最为普遍，K亚群很大一部分易感对象是地方品种黄鸡或原种土鸡。禽白血病毒的基因组比较小，长度7～8 kb，其基因组结构与人的艾滋病病毒非常相似。每个基因组分子包含了三个主要编码基因，即聚合酶基因（pol）、衣壳蛋白基因（gag）、囊膜蛋白基因（env）。其中gag基因非常保守[7]，它编码了p27蛋白，该蛋白存在于所有的亚群中，在内源性和外源性的白血病病毒之间十分保守且高度一致，因此由该蛋白制成的用于检测禽白血病毒p27抗原的试剂盒和胶体金试纸条，不能区分是内源性病毒表达还是外源性病毒表达，也无法鉴定是什么亚群。而env基因表达的gp85蛋白，是一种囊膜蛋白，它主要与病毒识别宿主细胞的特异性以及病毒的中和反应有关，能够用来鉴定不同的亚群。
白血病病毒还存在一些较特殊的情况，即重组的白血病病毒和复制缺陷型的白血病病毒，其中复制缺陷型的白血病病毒是急性肿瘤的一个重要组成部分，病毒的基因组一段完整的基因或某一段基因或一大段连续的基因能被鸡的部分肿瘤基因取代；不同亚群之间或者内源性与外源性白血病病毒之间一部分基因片段发生了重组从而形成了重组的白血病病毒。
2 流行病学
鸡是已分离到的所有ALV的天然宿主，不同品种和品系的鸡均可感染，但抵抗力不同，其中以白羽肉鸡发病率最高，同时也可感染鸡、野鸡、珍珠鸡、鹌鹑、火鸡等。
对禽白血病传播途径的研究是防控该病的关键，传播途径包括：(1)感染母鸡及其所产的蛋，这是最为典型的，也是最基本最直接的传播途径；(2)感染公鸡及其精液，引起水平或垂直传播；(3)育雏中的水平传播，尤其是J亚群禽白血病病毒，不容小觑。王桂枝等实验表明阳性鸡与阴性鸡直接接触混合饲养时，感染ALV-J的比例高达63.33%[8];(4)使用被外源病毒污染的活疫苗。2017年前报道的关于疫苗污染白血病病毒主要属于A亚群，2017年在我国广西发现疫苗污染J亚群白血病病毒的案例[9]，之后在尼日利亚也相继发现。ALV-A的污染通常由SPF蛋质量不过关引起，但是ALV-J致病力非常强，感染SPF鸡群后可能导致全群发病而淘汰，污染造成的后果很严重；(5)野鸟等生物媒介的传播。哈尔滨兽医研究所从300份野鸟样品中扩增ALV亚群的ENV基因和UTR，只分离到ALV-A，未分离到ALV-B和ALV-J[10];(6)使用注射器造成的物理性传播。该途径比较特殊，通常是一些特定的急性肿瘤感染引起，主要是复制缺陷型的白血病病毒[11]。
3 临床症状及病理变化
3.1 临床症状
ALV不仅能诱发免疫抑制和生长迟缓[12]，还能诱发相当高比例的感染鸡发生各种不同表现形式的肿瘤。鸡感染ALV后，多数情况下表现出一些非特异性症状，如精神沉郁、食欲减退、消瘦、腹泻、脱水等。成红细胞性白血病患鸡前期表现嗜睡、鸡冠苍白，后期表现为下痢，部分毛囊出血。发生淋巴细胞性白血病时，表现为鸡冠苍白皱缩，偶间腹部膨大和鸡冠发绀。骨髓细胞瘤病表现头、胸部和腿部异常突起，髓细胞瘤发生在眼眶时会导致出血或瞎眼，在皮肤上还会出现血泡样的血管瘤；受精卵和孵化率降低，蛋鸡产软壳蛋、薄壳蛋，公鸡感染后其精液数量不变但活力下降。
3.2 病理变化
禽白血病引起的肿瘤多种多样，肝、脾和法氏囊肉眼可见有肿瘤，大小不一，组织学观察多为灶性和中心性，主要由淋巴样瘤细胞构成，胞质内富含大量的RNA，经甲基绿哌咯咛染色呈红色。在各种年龄鸡的皮肤和内脏器官中大多可见血管瘤，充满血液的腔隙内排列着内皮细胞或其它细胞。在肝脾肿大破裂的病例里，可以看出ALV-J与REV共感染的病理现象[13]。
淋巴细胞性白血病表现为肝脏弥漫性肿大，表面有大小不一的结节样肿瘤；脾脏肿大，表面有灰白色肿瘤结节；此外，心脏、肾脏、肺、骨髓和肠系膜也有肿瘤；淋巴肉瘤表面光滑，质地柔软，切面呈灰白色或乳白色。成红细胞性白血病较少见，肉眼观察到脾、肝、肾呈弥漫性肿大，樱桃红色，部分切面可见灰白色肿瘤结节；肌肉、内脏、皮下可见点状出血。成髓细胞性白血病很少自然发生，一般只发生于成年鸡，毛囊因血液凝固不良而出血、贫血、消瘦，肝脏偶尔见肿瘤结节。骨髓细胞瘤病自然病例极少见，髓细胞瘤常发生于胸骨表面、肋骨软骨结合处，肿瘤呈结节状。
4 诊断技术
4.1 病原检测
4.1.1 抗原检测
应用ELISA、胶体金或者磁微粒化学发光等方法可以检测不同样品中的禽白血病p27抗原，适用检测胎粪、蛋清、肛门拭子、精液、细胞培养物等样品。种鸡净化过程中常通过采集出壳雏鸡的胎粪或种鸡产蛋期的蛋清鉴定种鸡是否感染ALV。抗原检测方法简单，耗时较短，适用于大批量检测，但缺点是不能区别内源性和外源性抗原。
4.1.2 病毒分离
将不同样品接种细胞后经过一定时间或传代培养后检测病毒，其适用样品是抗凝血、蛋清、精液、临床组织研磨过滤液等。它是国际金标准，DF-1细胞和CEF细胞均可适于白血病病毒的培养，但是从控制和鉴别内外源的角度来说，DF-1细胞是其中最好的。由于DF-1细胞只适用于外源性ALV的生长，接种样品之后的细胞上清若用p27抗原检测为阳性，即可判定是有外源性白血病病毒感染。病毒分离方法特异性灵敏度均较高，结果比较准确，可分离和保存流行株并鉴定其亚群，如有需要还可进一步做致病性试验。但该方法成本高、周期长、对技术要求高，很多养殖场不易掌握或操作不稳定，需要安排专门人员长期训练。在病毒样品接种时，细胞密度过大会影响病毒增殖，因此需要注意这一点；抗凝剂应选择肝素钠或肝素锂，其中肝素锂对病毒的保护率最高；病毒样品在细胞上的维持时间越长越好。
4.1.3 核酸检测
经过特定引物扩增后对片段进行测序并与各参考毒株进行比对以确定感染亚群，所有可用于直接提取高质量核酸的样品或细胞培养物均可。核酸检测方法简单，耗时较短，可适用于大批量检测，缺点是不能区别内源性和外源性ALV核酸，容易引起误判。该方法常被用于分离病毒后的测序与病毒亚群确定；个别疑似阳性样品的初筛以及科学研究中阳性样品的定量分析，但此方法不可以作为确诊的唯一判定依据。
4.2 抗体检测
4.2.1 ELISA检测
应用商品化抗体试剂盒或自包被试剂盒检测J亚型或者其它亚型抗体，需要注意的是不同日龄不同品系鸡的血清检测结果差异较大。该方法操作简单、耗时较短，可用于批量检测，但不能确定鸡群是否处于感染状态，有些内源性蛋白的表达也可以诱导产生非感染抗体。它常被用于对现行SPF鸡洁净度标准评估、现行兽药典疫苗外源病毒检测与评估、对鸡群感染状态的总体评估与大体判定，以及在进出口检疫中作为部分的参考指标。
4.2.2 IFA检测（免疫荧光检测）
应用特定亚群病毒接种细胞后进行固定并作为检测抗原来识别血清中的特异性抗体，可直接应用特定亚群病毒进行检测，但操作比较复杂，需要特定毒株和实验条件。该方法常被应用于复核不符合临床表现的疑似阳性血清、测定特定蛋白抗体以及禽白血病血清中和性抗体及其效价。秦爱建等用ALV-J感染鸡胚成纤维细胞后，用IFA方法检测出阳性细胞，表现强阳性反应，在测定最小病毒感染量上取得了良好的效果；鸡的血清与鸡源细胞会有非特异性反应[14]。应用于对不符合临床表现的疑似阳性血清进行复核；科学研究过程中对特定蛋白抗体等进行测定；禽白血病血清中和性抗体及其效价的测定。
5 综合防控措施
禽白血病净化评估中常见的硬件设施问题：未认真落实雨污分流；入门消毒设计形同虚设；净道和污道存在完全或部分交叉；洗澡消毒设施不够科学和人性化；病死动物剖检设施不符合生物安全要求；病死动物和粪污无害化处理设施缺失或不符合生物安全要求。针对这些问题要全方位改善。另外，要完善健康巡查制度、员工培训制度、投入品管理制度、疾病监测净化制度、病死鸡无害化处理制度以及生产区人员进出消毒及管理制度等。
对地方品系和黄羽肉鸡应特别注意生物安全，要高度重视在孵化期间使用种鸡群、核心群专用孵化箱，即使在特定条件下没有办法做到专用，也要尽可能确保不同批次孵化的鸡群间隔一段时间，以保证消毒彻底，避免产生水平传播；同时，要在实施净化的过程中避免边净化边污染的恶性循环，若环境已被高度污染，应新建一个专门的育种场将鸡群迁移至干净的环境中。对于阳性率低、饲养环境非常洁净的鸡群，应把其中检测为阳性的鸡尽快移走，避免健康鸡与其长时间接触而感染。
实施禽白血病净化过程中配套的生物安全措施：一是配置净化专用的孵化厅和孵化器，对于实施净化的种源鸡群要保证孵化过程中的洁净度，避免与祖代或者父母代商品鸡进行交叉孵化；二是广泛应用纸袋和纸盒孵化，同一家系的母鸡放在同一个纸袋或纸盒里孵化，实现单家系入孵和出孵。
6 结语
禽白血病作为国家中长期动物疫病规划的三大禽病之一，现阶段仍缺乏针对性疫苗和特效药物，预防该病的主要方式就是建立净化无禽白血病的鸡群[15,16,17,18]。净化措施通常采用国家制定的四大检测节点和三种检测手段相结合，即选择出雏期、育雏结束、初产时和留种前为主要净化检测节点，采用胎粪禽白血病抗原检测、蛋清禽白血病抗原检测和病毒分离鉴定作为检测技术。此外，要加强对鸡群的日常管理，增强鸡群的免疫力，从养、防、检三方面贯彻落实，保障家禽业健康发展。
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| 文章来源：家禽科学 文章编辑：一米优讯 |
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