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2016—2019年广西玉林市送检病死鸭的鸭圆环病毒检测


现代畜牧网 http://www.cvonet.com 2020/9/21 10:59:51 关注:436 评论: 我要投稿

  摘要:为了解广西玉林市鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)感染情况,通过PCR方法,对2016—2019年玉林市629个养鸭场送检的856份病死鸭样品进行DuCV病原检测,并对检测结果进行不同月份、不同日龄以及混合感染情况统计分析。结果显示:2016—2019年玉林市送检病死鸭的DuCV检出率为10.63%(91/856),其中20日龄以内、21~65日龄、65日龄以上的检出率分别为7.76%、15.38%、11.32%;2019年(14.52%)和2018年(16.33%)的检出率高于2017年(5.82%)和2016年(2.38%);3—5月(13.15%)和上年12月—2月(11.88%)的检出率高于6—8月(4.35%)和9—11月(8.56%);95.60%(87/91)的DuCV阳性样品中检出副黏病毒、禽多杀性巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌。结果表明:玉林市养鸭场中存在一定水平的DuCV流行,春冬季DuCV感染率较高,各日龄段鸭均易感,DuCV易与其他病毒和细菌发生混合感染。结果提示,要加强春冬季节DuCV感染的预防,采取综合防控措施,控制混合感染。
  鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)属于圆环病毒科、圆环病毒属,病毒粒子无囊膜,呈二十面体对称,直径约15nm,核酸为单股环型DNA,是目前已知最小的鸭病毒。Hattermann等研究发现,DuCV感染造成的淋巴组织损伤导致了机体体液免疫和细胞免疫功能的下降,这种免疫抑制反应增强了其他共感染因素的致病性。施少华等研究发现,大部分品种及不同日龄的鸭对DuCV均易感。2014年粟艳琼等发现,广西家禽市场健康鸭群的DuCV平均检出率为8.01%,其中玉林市为1.36%。2016年杨晶等对我国部分地区采集的302份鸭组织样品,进行了7种常见鸭病毒性疫病检测,结果发现DuCV检出率高达20.2%,说明DuCV已成为我国鸭群中的主要流行病原之一。
  玉林市养殖信息报送系统提供的统计数据显示,玉林市2016—2019年鸭平均存栏量为1170.73万只,且鸭养殖规模逐年增长,已成为广西重要的鸭养殖基地。DuCV常呈隐性和混合感染,感染后的临床症状不典型,需要辅助以分子生物学方法进行确诊。为初步了解玉林市DuCV感染情况,对2016—2019年部分养鸭场送检的病死鸭组织样品,通过PCR方法进行病原检测,以期为玉林市DuCV感染防控提供数据支撑。
  材料与方法
  病料样品
  2016—2019年广西玉林市629个养鸭场送检的病死麻鸭、樱桃鸭、白鸭、鬼头鸭的肺脏、胰腺、脾脏、肝脏、脑组织样品共856份。其中,2016年137个养鸭场送检168份,2017年127个养鸭场送检189份,2018年146个养鸭场送检196份,2019年219个养鸭场送检303份(表1)。

  引物设计与合成
  根据参考文献设计1对DuCV引物,扩增片段大小为351bp。
  PCR扩增
  取5μL PCR产物在1.0%琼脂凝胶上进行核酸电泳,在阴、阳性对照均成立的情况下,于核酸凝胶成像仪中观察检测结果。
  其他细菌及病毒检测
  无菌采集病死鸭肝脏、肺脏、脾脏、胰腺组织分装,以无菌PBS缓冲液,按质量比1:5稀释后研磨,用高速冷冻离心机12000r/min离心5min后,提取200μL上清液,使用核酸自动抽提试剂盒,按步骤抽提核酸。根据参考文献中的PCR/RT-PCR检测方法,分别进行副黏病毒、禽多杀性巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭黄病毒、大肠杆菌、鸭细小病毒等6种病原的核酸检测。
  结果
  总体情况
  2016—2018年,856份病死鸭样品中,共检出DuCV阳性91份,平均检出率为10.63%。2016年检出率为2.38%,2018年上升至16.33%,2019年又下降至14.52%(表2)。玉林市所有7个管辖县(市、区)、所有品种鸭均有阳性样品被检出,其中不同县(市、区)的阳性检出率介于9.89%~20.88%,不同品种鸭的检出率介于8.79%~28.57%。

 

  不同日龄
  不同日龄的统计结果(表3)显示:1~20日龄的DuCV检出率最低,为8.67%;21~65日龄检出率最高,为15.11%。

 

  不同月份
  不同月份的统计结果(表4)显示:上年12月—2月、3—5月的DuCV检出率较高,分别为11.88%、13.15%;而6—8月、9—11月较低,分别为4.35%、8.56%。

 

  混合感染
  对91份DuCV阳性样品进行细菌及其他病毒的核酸检测,发现有87份存在混合感染,占比为95.60%(87/91)。混合感染均是DuCV分别与禽多杀性巴氏杆菌、副黏病毒、鸭疫里默氏杆菌的双重感染,检出率分别为47.13%(41/87)、28.74%(25/87)、24.14%(21/87)。
  分析与讨论
  流行形势
  检测发现,广西玉林市鸭场送检的病死鸭样品DuCV检出率为10.63%,说明该地存在一定水平的DuCV流行,这与施少华等检测的我国部分地区病死鸭15.28%的DuCV个体阳性率基本相符。不同地区、不同品种鸭均有阳性样品被检出,说明玉林市的DuCV流行范围较广,对鸭养殖业影响较严重。因为本次检测的是病死鸭,所以相比粟艳琼等对当地健康鸭DuCV的个体阳性检出率1.36%有所偏高。从不同年份的统计结果来看,玉林市DuCV感染率整体呈上升趋势,2017年DuCV检出率较2016年上升了3.44%,2018年较2017年上升10.51%。虽然2019年较2018年下降了1.81%,但由于病死鸭检测数量有限,且未对健康鸭带毒情况进行研究,暂不能说明DuCV感染得到了控制,仍需加强防控。
  感染日龄及易发季节
  从不同日龄的阳性检出率可以发现,虽然各年龄段的鸭中都有DuCV检出,但21日龄以上病死鸭的检出率(14.25%)高于20日龄以内(7.76%),这可能与该病毒能够被鸭隐性携带有关。本次检测结果与施少华等的病死鸭DuCV检测结果基本相符。不同月份统计结果统计发现,上年12月—2月和3—5月的DuCV阳性检出率较高,说明玉林市DuCV流行有一定的季节性特征,春冬季节高发,这可能与当地春季的“回南天”气候和冬季温度骤降过快有关。这与杨晶等在我国部分地区鸭病毒性疫病流行病学调查中发现的DuCV季节性特征相似。
  混合感染
  本研究发现,DuCV与禽多杀性巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌、副黏病毒的混合感染比例较高(95.60%),与施少华和黄瑜对DuCV与鸭疫里默氏杆菌混合感染研究数据相似,验证了Hattermann等的研究结论——DuCV能够破坏鸭的免疫器官,易继发细菌和其他病毒的感染。
  结论
  广西玉林地区养鸭场中广泛存在DuCV流行,各日龄段的鸭均有感染;本病具有一定的季节性特征,以春、冬两季检出率较高;DuCV易与其他病毒和细菌发生混合感染。因此,需要在春冬高发季节,采取综合防控措施,加强DuCV感染以及与其他病原混合感染的控制。
文章作者:甘一波等 中国动物检疫     文章编辑:一米优讯     
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